hapusan darah adalah apusan darah tepi yang digunakan untuk menganalisis komponen hadir dalam peredaran darah. Pengamatan apusan darah memberikan data hematologi yang sangat berguna untuk diagnosis dan tindak lanjut dari banyak patologi.
Apusan darah memungkinkan untuk mengukur jumlah berbagai jenis sel darah putih (rumus leukosit), serta memungkinkan analisis morfologi dan bentuk eritrosit, leukosit dan trombosit.
Persiapan apusan darah. Sumber: Darah dalam gelas laboratorium. Domain PublikPictures.net
Dapat mendeteksi kelainan jumlah sel, seperti: leukositosis atau leukopenia, limfositosis atau limfopenia, neutrofilia atau neutropenia, trombositosis atau trombositopenia dan eosinofilia. Kelainan bentuk dan ukuran sel juga dapat terlihat.
Selain itu, dimungkinkan untuk mendeteksi berbagai jenis anemia, leukemia, dan infeksi bakteri atau parasit darah.
Untuk ini, ada berbagai jenis apusan yang dilakukan tergantung pada tujuan penelitian. Ada apusan tipis dan apusan tebal. Pap ini berbeda dalam teknik eksekusi dan tujuan penelitian.
Mereka dengan tetes halus digunakan sebagai tambahan untuk menyelesaikan hematologi. Ini memberikan data tentang formula leukosit, selain analisis bentuk dan morfologi dari tiga seri sel yang membentuk darah: seri merah, seri putih dan trombosit. Meskipun mereka juga berfungsi sebagai pelengkap studi film darah tebal.
Film tebal digunakan untuk diagnosis penyakit yang disebabkan oleh hemoparasit, seperti malaria atau malaria, toksoplasmosis, leishmaniasis, penyakit Chagas, babesiosis dan mikrofilariasis.
Indeks artikel
Ciri-ciri apusan darah
Apusan darah yang baik harus memenuhi ciri-ciri tertentu. Di antara mereka dapat kita sebutkan:
-Sampel harus memenuhi persyaratan kualitas minimum agar dapat mewakili.
– Pengambilan sampel harus dilakukan dengan baik.
-Eksekusi smear tepat waktu.
-Jika dilakukan dengan darah vena, gunakan antikoagulan yang tidak merusak sel dan campur tabung sebelum membuat apusan.
-Jika dilakukan dengan darah kapiler, buang tetes pertama.
– Penyebarannya harus homogen. Ini memastikan bahwa sel-sel didistribusikan secara merata dan analisis yang baik dari sel-sel darah, dalam hal bentuk dan jumlah, dapat dilakukan.
– Sisi apusan harus halus dari awal hingga akhir.
-Apusan harus menghormati margin 1 sampai 2 mm ke sisi slide.
-Lapisan sebar harus secara bertahap berkurang ketebalannya dari awal hingga akhir (diolesi dengan tetesan halus dengan metode slide).
-Ini harus diberi label dengan benar untuk menghindari kebingungan sampel.
-Perbaiki dan noda dengan benar untuk pengamatan yang jelas dari unsur darah.
-Biarkan apusan mengering dengan baik sebelum memasang preparat di bawah mikroskop. Menempatkan minyak imersi pada apusan basah akan menyebabkan terbentuknya misel, sehingga sel tidak terlihat.
Jenis-jenis apusan darah
Apusan darah tepi dapat diklasifikasikan menjadi apusan tipis dan apusan tebal. Mereka yang memiliki lapisan tipis digunakan untuk mempelajari rumus leukosit dan pengamatan morfologi sel darah. Anda juga dapat melihat bakteri ekstraseluler seperti borrelia dan hemoparasit intraseluler, seperti plasmodium, antara lain.
Dalam gumpalan halus, spesies parasit dapat diidentifikasi, oleh karena itu, ini adalah teknik yang lebih spesifik daripada gumpalan tebal, tetapi gumpalan tebal lebih sensitif, karena ini adalah teknik konsentrasi yang digunakan untuk pencarian lengkap untuk hemoparasit ekstraseluler.
Ada dua jenis apusan tetes halus: yang dilakukan pada slide dan yang dilakukan pada kaca penutup. Apusan tebal dilakukan pada slide.
Teknik pengambilan sampel darah
Apusan darah dapat dibuat dari pungsi kapiler atau sampel vena yang diambil dengan antikoagulan. Jika dilakukan dari darah dengan antikoagulan, apusan dapat dibuat hingga 2 jam setelah pengambilan sampel.
Perhatian harus diambil untuk menggunakan antikoagulan yang tidak merusak sel darah. Pilihan terbaik adalah EDTA. Sebaliknya, penggunaan antikoagulan seperti trisodium sitrat harus dihindari.
Jika sampel diambil dengan pungsi kapiler, apusan harus segera disebarkan, sebelum darah menggumpal.
Tetesan pertama harus dibuang, membiarkan tetesan berikutnya keluar secara spontan untuk menghindari pengenceran sampel dengan cairan jaringan. Ini adalah teknik yang paling direkomendasikan untuk mengamati morfologi sel, karena darah tidak memiliki aditif.
Untuk pengamatan hemoparasit, Solari dkk menyimpulkan dalam penelitiannya bahwa kedua teknik (pungsi vena dan kapiler) sama-sama efisien.
Jenis pengambilan sampel darah: A. Pungsi kapiler. B. Pungsi vena. Sumber: A. Flickr.com B. Pxhere.com
Teknik pembuatan apusan darah
Apusan darah dapat dilakukan secara manual pada slide mikroskop atau pada kaca penutup atau slide. Hal ini juga dimungkinkan melalui peralatan otomatis.
-Slide smear
Ini adalah teknik yang disukai oleh sebagian besar laboratorium karena penanganannya yang mudah.
Dengan menggunakan pipet Pasteur, tempatkan setetes darah yang tidak terlalu tebal atau sangat halus di tengah salah satu ujung kaca objek yang bersih.
Dengan bantuan slide lain dengan ujung tanah, apusan dibuat. Geser kaca tanah ditempatkan tegak lurus ke ujung yang berlawanan dari tempat jatuhnya berada.
Itu miring ke sudut antara 30 – 45 ° dan meluncur ke arah penurunan; Ketika disentuh, itu mengembang secara linier di atas tepi slide buram dan dengan gerakan yang konstan dan pasti, lembaran itu kembali; sebelum mencapai ujung perosotan diangkat.
Dengan cara ini, lapisan homogen tersebar di permukaan slide penerima.
Smear dibiarkan mengering. Kemudian difiksasi dan diwarnai dengan pewarna yang disukai. Biarkan mengering dengan baik sebelum dilihat di bawah mikroskop. Setetes minyak ditempatkan pada wajah dengan apusan dan diamati di bawah mikroskop cahaya.
Sediaan darah pada slide. Gambar atas: noda tidak bernoda. Gambar bawah: noda bernoda. Sumber: Coinmac [CC BY-SA 3.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0)]
Bagian dari apusan yang dibuat pada slide
Dalam jenis apusan ini, tiga area yang ditentukan dapat dibedakan: kepala, tubuh, dan ekor. Kepala sesuai dengan area di mana apusan dimulai, itu adalah area yang paling tebal dan tidak baik untuk diamati.
Tubuh adalah bagian tengah atau tengah dari apusan, itu adalah area terbaik untuk diamati di bawah mikroskop, karena di sana sel-selnya terdistribusi secara merata dan morfologinya dipertahankan.
Ekor sesuai dengan bagian akhir noda; disini distribusinya tidak lagi seragam dan morfologi eritrosit cenderung hilang.
Kontrol kualitas dalam teknik slide
Dalam teknik ini ia memainkan peran mendasar:
-Pembersihan dan degreasing slide: menjamin geser sampel yang baik.
-Ukuran tetesan: dengan tetesan yang sangat besar, apusan yang lebih tebal dan lebih panjang akan diperoleh, dengan tetesan yang sangat kecil penyebarannya akan lebih pendek dan sangat halus.
-Kecepatan yang diterapkan dalam ekstensi: semakin rendah kecepatan smear akan lebih tipis, semakin tinggi kecepatannya akan lebih tebal.
-Sudut eksekusi: semakin kecil sudutnya, semakin halus nodanya, semakin tinggi sudutnya, semakin tebal hasilnya.
-Langkah pada kaca penutup
Ini tidak banyak digunakan karena tidak praktis untuk menangani kaca penutup yang rapuh, namun menawarkan keuntungan besar, karena distribusi sel yang lebih baik diperoleh di seluruh apusan.
Tetesan yang tidak terlalu tebal atau sangat halus ditempatkan di tengah kaca penutup. Segera penutup kaca lain diletakkan di atasnya sedemikian rupa sehingga ujung kedua kaca penutup menonjol, membentuk bintang.
Tetesan akan secara spontan menyebar ke permukaan kedua kaca penutup. Di akhir ekstensi, setiap slide digeser ke sisi yang berlawanan satu sama lain (satu ke kanan dan yang lainnya ke kiri) dengan cepat.
Teknik ini memberikan dua noda, bukan satu.
Mereka ditempatkan untuk dikeringkan dengan sisi menyebar ke atas. Setelah kering, itu diperbaiki dan diwarnai dengan teknik pilihan. Biarkan kering. Setetes minyak imersi diletakkan di atas kaca objek, apusan diletakkan dengan sisi apusan menghadap ke bawah, dan dilihat di bawah mikroskop.
Kontrol kualitas dalam teknik kaca penutup
Untuk mendapatkan apusan yang baik untuk teknik ini, penting untuk:
-Membersihkan kaca penutup (membantu meluncurnya sampel dengan baik).
-Ukuran tetes (mempengaruhi ketebalan apusan).
-Kecepatan pemisahan kaca penutup (mempengaruhi homogenitas apusan).
-Dengan peralatan otomatis
Mereka dapat dilakukan melalui salah satu tim ini: Spinner dan Autoslide.
Spinner terdiri dari menempatkan slide dengan setetes darah di piring centrifuge khusus. Sampel disentrifugasi dengan kecepatan tinggi; dengan cara ini apusan sampel yang homogen dan halus terbentuk. Kerugiannya adalah kemungkinan hemolisis sampel.
Autoslide adalah instrumen yang secara mekanis melakukan gerakan untuk pelaksanaan smear pada slide. Anda juga dapat memperbaiki dan menodai noda. Bahkan dapat disesuaikan dengan beberapa penghitung hematologi otomatis.
Teknik olesan tebal
Untuk mencari hemoparasit, dianjurkan untuk melakukan dua apusan: satu dengan tetes halus dan satu dengan tetes kental.
Lakukan tusukan kapiler, bersihkan tetes pertama. Tempatkan setetes halus pada slide dan apus seperti yang dijelaskan sebelumnya. Untuk manik-manik tebal, letakkan manik-manik besar di slide lain dan sebarkan ke dalam bujur sangkar 1,55mm. Biarkan kedua noda mengering.
noda noda
Bagi mereka dengan tetes halus, pewarna Giemsa atau Wright, antara lain, dapat digunakan. Pewarnaan Giemsa atau May-Grunwald Giemsa direkomendasikan untuk noda tebal .
noda Giemsa
Apusan difiksasi selama 3 menit dengan metanol, ditiriskan dan dibiarkan kering kembali. Apusan kemudian ditutup dengan pewarna Giemsa selama 10-15 menit. Itu dicuci dengan air suling dan dibiarkan kering. Untuk mengamati di bawah mikroskop, setetes minyak imersi ditempatkan.
noda Wright
Apusan ditutup dengan pewarna Wright selama 5 menit. Buang dan tempatkan larutan buffer pada pH 6,8 selama 6 menit. Tiup preparat untuk menghomogenkan. Cuci dengan air suling dan biarkan kering. Amati di bawah mikroskop.
Jenis noda yang rusak
Terjadi pada peserta pelatihan dalam teknik fine drop dengan slide.
Sapuan dengan area dengan ketebalan yang berbeda (diselingi tipis dan tebal)
Hal ini dikarenakan pergerakan yang dieksekusi tidak konstan selama spread, membuat stop dan restart.
Pap smear yang sangat singkat
Mereka memiliki 2 penyebab: satu karena fakta bahwa seluncuran tanah telah terangkat sebelum mencapai ujung seluncuran yang lain. Dalam hal ini sangat tebal dan pendek.
Sebaliknya, jika apusannya pendek tetapi tipis, itu karena ukuran tetesannya sangat kecil.
Oleskan dengan area yang digaruk ke arah ujung apusan
Ini memiliki beberapa penyebab: salah satunya adalah bahwa tepi tanah rusak, bahwa tekanan yang diberikan pada slide penerima meningkat pada saat penyelesaian paving, atau bahwa tepi tanah slide sudah aus.
Apusan dengan pembentukan vakuola atau area bulat atau elips yang jelas
Mereka disebabkan oleh penggunaan noda berminyak (tidak dicuci dan dihilangkan lemaknya).
Apusan yang sangat tebal atau sangat tipis
Tetesan yang terlalu besar akan menghasilkan apusan yang sangat kental dari awal sampai akhir dan tetes yang sangat kecil akan menghasilkan apusan yang sangat halus.
Histologi
Sel darah dapat dilihat pada apusan darah. Diantaranya adalah:
-Eritrosit atau sel darah merah
Darah manusia, eritrosit atau sel darah merah dan dua sel darah putih. Diambil dan diedit dari: Viascos [CC BY-SA 4.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0)].
Pengamatan Anda adalah yang paling penting. Pada tingkat ini, anemia, talasemia, penyakit sumsum tulang, dll dapat dideteksi.
Jumlah eritrosit atau sel darah merah kira-kira 5 x 10 6 mm3 pada pria dan 4,5 x 10 6 pada wanita. Sel darah merah berbentuk seperti cakram bikonkaf, dengan pusat fisiologis pucat. Mereka dapat dilihat secara terpisah (normal) atau menumpuk di rouleaux (tidak normal).
Apusan juga menunjukkan poikilositosis (berbagai bentuk eritrosit), anisositosis (berbagai ukuran eritrosit), anisopoikilositosis (berbagai bentuk dan ukuran), anisochromia (berbagai warna), eritroblas (eritrosit yang belum matang), mikrositosis (eritrosit yang lebih kecil) dan makrosit (eritrosit yang lebih besar). ).
Ketika mereka menunjukkan kekurangan jumlah hemoglobin dan pucat pusat meningkat, dikatakan bahwa ada hipokromia. Ketika seri merah normal diamati, itu akan dilaporkan sebagai normositik dan normokromik.
– Sel darah putih atau leukosit
sel darah putih
Jumlah normal berkisar antara 5.000 hingga 10.000 mm 3 . Mereka diubah dalam proses infeksi, alergi dan leukemia. Pada apusan darah dapat dibedakan beberapa jenis yang akan dijelaskan dibawah ini.
Neutrofil tersegmentasi
Mereka mewakili 55-65% dari total leukosit. Mereka mengukur antara 10-15 m. Mereka memiliki inti tersegmentasi atau lobed yang mengadopsi morfologi yang berbeda, oleh karena itu disebut polimorfonuklear.
Mereka memiliki butiran neutrofilik yang melimpah di sitoplasma mereka dan beberapa azurofil. Mereka meningkatkan infeksi bakteri (neutrofilia), penurunan infeksi virus (neutropenia).
Kelainan morfologi seperti pleokaryocytosis (nukleus hyper-segmented), arch (sel yang belum matang) atau macro-polices (berbentuk oval dan besar) dapat diamati .
Perubahan lainnya:
-granulasi beracun
-Pseudo Pelger neutrofil (nukleus tidak berlobus atau bilobed).
– Badan Döhle: inklusi sitoplasma biru tua.
– Peningkatan basofilia sitoplasma.
– Vakuola intrasitoplasma
-Piknosis seluler (kehilangan jembatan internuklear).
Eosinofil tersegmentasi
Mereka mewakili 1-3% dari total sel darah putih. Mereka mengukur 9-10 m. Mereka dicirikan oleh adanya granula sitoplasmik asidofilik yang melimpah dan sedikit azurofil. Nukleusnya memiliki dua lobulasi. Jumlah mereka meningkat karena alergi dan penyakit yang berasal dari parasit.
Basofil tersegmentasi
Mereka sangat jarang, mewakili 0-1% leukosit. Mereka mengukur 10-12μm. Nukleus biasanya tidak teratur di perbatasan dan mungkin bilobed, tetapi tidak terlihat karena banyaknya granulasi basofilik kasar di sitoplasmanya. Sangat jarang, basofilia dapat terlihat.
Limfosit
Mereka adalah sel-sel kecil dengan sitoplasma basofilik, dengan inti bulat yang jelas, dengan kromatin yang kental. Nukleus meliputi hampir seluruh sel. Mereka mewakili 26-40% dari leukosit darah. Mereka meningkatkan infeksi virus (limfositosis). Limfosit reaktif dapat terlihat.
Monosit
Sel yang lebih besar dari limfosit, dengan sitoplasma yang lebih besar dan inti oval kromatin yang lebih longgar. Mereka mengukur 9-12μm. Sitoplasma berlimpah dan biasanya tampak biru keabu-abuan pucat dengan teknik pewarnaan standar. Di antara perubahan, monosit bervakuol dan monositosis dapat diamati.
-trombosit
Mereka mengukur antara 1,5-3 m. Bentuknya bulat atau oval. Nilai normalnya berkisar antara 150.000 hingga 350.000 trombosit/mm3. Mereka dapat menurun pada beberapa infeksi virus. Mereka tidak memiliki inti dan berwarna ungu. Kelainan dapat terlihat pada rangkaian ini, seperti makroplate atau mikroplate, trombositosis atau trombositopenia, dan fragmen trombosit.
Unsur patologis
Parasit darah
Pada apusan darah dapat diamati hemoparasit seperti agen penyebab malaria atau malaria (parasit Plasmodium jenis kelamin). Untuk alasan ini, penting bahwa smear dianalisis secara manual, karena peralatan otomatis mengabaikan temuan ini.
bakteri
Dalam patologi seperti demam kambuh atau penyakit Lyme, agen penyebabnya dapat diamati. Dalam hal ini, ini sesuai dengan Borrelia recurenti spirochetes dan Borrelia burgdorferi dalam apusan darah.
Sel yang belum matang
Kasus yang parah diamati pada leukemia, reaksi leukemoid dan reaksi leukoeritroblastik, antara lain. Pada infeksi bakteri mungkin ada sedikit penyimpangan ke kiri (adanya penjahat). Eritroblas juga dapat dilihat pada beberapa anemia.
Referensi
- Darah dan jaringan hematopoietik. Tersedia di: sld.cu
- Gomez A, Casas M. 2014. Angel. Interpretasi klinis laboratorium. Edisi ke-8. Editorial Medica Panamericana.
- Solari Soto L, Soto Tarazona A, Mendoza Requena D, Llanos Accounts A. Perbandingan kepadatan parasit dalam penurunan darah vena tebal versus akupresur dalam diagnosis Malaria vivax. Rev Med Hered 2002; 13 (4): 140-143. Tersedia di: scielo.org.
- Terry Leonard Nelson, Mendoza Hernández Carlos. Pentingnya studi apusan darah tepi pada lansia. Medisur 2017; 15 (3): 362-382. Tersedia di: scielo.sld
- Grinspan S. Studi tentang hapusan darah tepi. Pendidikan kedokteran berkelanjutan. Tersedia di: bvs.hn/RMH
