tunggal pewarnaan adalah cepat prosedur pewarnaan dan sederhana di mana pewarna tunggal digunakan, sehingga disebut sederhana. Ini digunakan terutama untuk menentukan morfologi dan organisasi sel yang ada dalam sampel.
Sel secara alami tidak berwarna, sehingga perlu untuk membuatnya terlihat dalam beberapa cara ketika dilihat di bawah mikroskop.
Sel pipi manusia diwarnai dengan pewarnaan biru metilen sederhana.
Penting untuk dicatat bahwa pewarna yang digunakan dalam pewarnaan sederhana harus bersifat basa dengan muatan positif (kationik), sehingga dapat secara spontan berikatan dengan dinding sel dan sitoplasma.
Struktur sel ini bermuatan negatif. Untuk alasan ini, pewarna bermuatan positif tertarik ke sel dan mengikatnya secara spontan. Dengan demikian, semua sel yang ada dalam sampel cepat diwarnai.
Pewarna yang digunakan dalam pewarnaan sederhana
Ada beberapa pewarna dasar yang dapat digunakan di laboratorium mikrobiologi. Yang paling banyak digunakan adalah:
– Biru metilen.
– Kristal ungu.
– Hijau Malachite.
– Fuchsin dasar.
Semua pewarna ini bekerja dengan baik pada bakteri karena mereka memiliki ion warna bermuatan positif (kationik) (kromofor).
Waktu pewarnaan untuk sebagian besar noda ini relatif singkat. Mereka umumnya berkisar dari 30 detik sampai 2 menit, tergantung pada afinitas pewarna.
Penting untuk diingat bahwa sebelum pewarnaan sampel dengan pewarnaan sederhana, sampel harus diperluas dan dipasang pada slide kaca (slide); sampel diperpanjang dan tetap disebut smear.
Langkah-langkah untuk melakukan pewarnaan sederhana
Langkah 1
Tempatkan slide pada rak pewarnaan dan oleskan pewarna yang diinginkan. Biarkan itu bertindak untuk waktu yang sesuai.
Pewarnaan sederhana biasanya membutuhkan waktu beberapa detik hingga beberapa menit, tergantung pada pewarna yang digunakan.
Pengamatan
Dalam langkah ini, penting untuk tidak melebihi waktu yang disarankan untuk pewarnaan yang digunakan, karena kristal dapat terbentuk pada lembaran, menghasilkan apa yang dikenal sebagai “artefak” yang mengubah morfologi sel.
Langkah 2
Cuci apusan dari kaca objek secara menyeluruh dengan air suling dari botol, atau juga air ledeng yang mengalir perlahan, sampai limpasan menjadi jernih. Ini biasanya memakan waktu 5-10 detik.
Pengamatan
Jangan menerapkan aliran air langsung pada smear, untuk menghindari kekuatan itu merusak sampel.
Jika Anda tidak memiliki air suling, Anda dapat menggunakan air keran tanpa masalah karena tidak akan mempengaruhi hasil pewarnaan.
Langkah 3
Blot slide dengan handuk kertas penyerap dalam satu arah dan tanpa menggosok. Pastikan bagian bawah slide bersih.
Langkah 4
Amati apusan yang diwarnai di bawah mikroskop. Mulailah dengan tujuan yang paling jauh untuk menemukan area yang ingin Anda amati secara lebih rinci dengan benar. Ubah tujuan untuk lebih dekat dan lebih dekat dengan sampel.
Pengamatan
Untuk penggunaan objektif dengan perbesaran yang lebih tinggi (biasanya 100X), minyak imersi harus digunakan, karena membantu cahaya menembus lebih baik dan gambar menjadi lebih tajam. Tidak perlu menggunakan kaca penutup.
Langkah 5
Terakhir, buang semua sampel ke dalam wadah yang sesuai yang diberi label “biohazard”.
Referensi
- (2001). Kegunaan Mikrobiologi: Manual Laboratorium dalam Mikrobiologi Umum ( Edisi ke- 8 ). Perusahaan McGraw-Hill.
- Harisha, S. (2006). Pengantar Bioteknologi Praktis (1 st ). Media Firewall.
- Moyes, RB, Reynolds, J., & Breakwell, DP (2009). Pewarnaan awal bakteri: Pewarnaan sederhana. Protokol Saat Ini dalam Mikrobiologi , (SUPPL. 15), 1-5.
- Pommerville, J. (2013). Laboratorium Mikrobiologi Fundamental Alcamo (10 th ). Pembelajaran Jones & Bartlett.
- Prescott, H. (2002). Latihan Laboratorium Mikrobiologi (5 th ). Perusahaan McGraw-Hill.
- Sumbali, G. & Mehrotra, R. (2009). Prinsip-prinsip Mikrobiologi (1 st ). Tata McGraw-Hill Education.