TSI agar atau tiga iron agar gula adalah medium padat yang berfungsi sebagai sebuah uji biokimia untuk memandu identifikasi awal Gram negatif basil. Ini didasarkan pada menunjukkan fermentasi gula yang ada, dan produksi hidrogen sulfida dan gas.
Komposisi dan dasarnya sangat mirip dengan uji besi Kligler, dengan perbedaan bahwa yang terakhir hanya mengandung glukosa dan laktosa. Sebaliknya, -sesuai namanya- triple sugar iron agar mengandung tiga karbohidrat yang dapat difermentasi: glukosa, laktosa, dan sukrosa.
Gambar uji TSI dengan mikroorganisme yang berbeda A. Escherichia coli, B. Shigella flexneri, C) Salmonella typhimurium, D. Pseudomonas aeruginosa. Sumber: Witmadrid [Domain publik], dari Wikimedia Commons
Selain itu, media TSI memiliki empat turunan protein yang membuatnya menjadi agar-agar yang sangat bergizi: ekstrak ragi, ekstrak daging, pepton, dan proteosa pepton. Ini juga mengandung besi amonium sulfat, natrium tiosulfat, natrium klorida , fenol merah, dan agar-agar.
Ketidakmampuan suatu mikroorganisme untuk memfermentasi glukosa yang ada dalam media segera mengeluarkannya dari keluarga Enterobacteriaceae. Oleh karena itu uji ini sangat penting dalam memutuskan jalur identifikasi mana yang harus diambil untuk menentukan genus dan spesies.
Setiap laboratorium memutuskan apakah akan bekerja dengan agar TSI atau dengan agar besi Kligler.
Indeks artikel
Dasar
Masing-masing senyawa memenuhi fungsi dalam medium.
Natrium klorida dan agar
Natrium klorida diperlukan untuk menjaga keseimbangan osmotik medium. Sedangkan agar-agar memberikan konsistensi padat.
Indikator PH (merah fenol)
PH media yang disiapkan seimbang pada 7,3 dan indikator pH (merah fenol) berubah menjadi kuning di bawah 6,8. Ini berarti bahwa sejumlah kecil asam yang dihasilkan oleh fermentasi gula akan mengubah medium dari merah-oranye menjadi kuning.
Jika fermentasi tidak terjadi akan terjadi alkalinisasi media melalui penggunaan pepton, berubah dari merah-oranye menjadi merah kuat.
Turunan protein (ekstrak ragi, ekstrak daging, pepton dan pepton proteosa)
Ketika bakteri memetabolisme protein yang ada dalam agar TSI, amina diproduksi yang membuat media menjadi basa (terutama pada tingkat bevel), karena reaksi membutuhkan oksigen. Amina mengubah bezel menjadi merah cerah.
Tapi ini akan tergantung pada kemampuan bakteri untuk memfermentasi karbohidrat atau tidak.
Fermentasi karbohidrat (glukosa, laktosa dan sukrosa)
Studi tentang fermentasi gula dapat memberikan beberapa gambar dan masing-masing ditafsirkan berbeda. Interpretasi uji membagi mikroorganisme menjadi 3 kategori: glukosa non-fermenter, laktosa non-fermenter, dan fermentor laktosa / sukrosa.
Perlu dicatat bahwa jumlah glukosa dalam medium terbatas, sedangkan konsentrasi laktosa dan sukrosa 10 kali lebih tinggi.
Bakteri dari Keluarga Enterobacteriaceae dan mikroorganisme pemfermentasi glukosa lainnya akan mulai memfermentasi gula ini karena merupakan karbohidrat paling sederhana untuk energi.
Di sisi lain, laktosa dan sukrosa adalah karbohidrat kompleks yang harus dipecah dan diubah menjadi glukosa agar dapat memasuki siklus Embden-Meyerhof.
-Mikroorganisme yang tidak memfermentasi glukosa
Ketika mikroorganisme yang diinokulasi tidak mampu memfermentasi glukosa, apalagi mampu memfermentasi karbohidrat lain. Oleh karena itu, tidak ada asam yang terbentuk di sini, tetapi ada pembentukan amina di bevel dengan menggunakan pepton.
Dalam hal ini, bezel berubah menjadi merah yang lebih kuat dan bagian bawah tabung mungkin tetap tidak berubah atau mungkin juga menjadi alkali, meninggalkan seluruh tabung merah.
Interpretasi: K / K berarti bevel alkali / basa atau dasar netral
Pada gambar di awal artikel lihat gambar tabung D.
Hasil ini menunjukkan bahwa mikroorganisme tersebut tidak termasuk dalam Famili Enterobacteriaceae.
-Mikroorganisme yang tidak memfermentasi laktosa/sukrosa
Jika bakteri mampu memfermentasi glukosa tetapi tidak laktosa atau sukrosa, hal berikut akan terjadi:
Bakteri akan mengkonsumsi semua glukosa yang ada setelah kira-kira 6 sampai 8 jam, mampu mengasamkan baik bevel maupun blok; yaitu, agar-agar akan benar-benar menguning. Tetapi ketika glukosa habis dan laktosa dan sukrosa tidak dapat digunakan, bakteri akan memulai metabolisme protein.
Reaksi ini membutuhkan oksigen, oleh karena itu degradasi pepton terjadi di permukaan (bevel). Amina menghasilkan alkalize bezel yang berubah dari kuning menjadi merah. Reaksi ini dibuktikan setelah 18 hingga 24 jam inkubasi.
Interpretasi: K / A berarti basa bevel dan gumpalan asam.
Pada gambar di awal artikel lihat gambar tabung B.
-Mikroorganisme fermentasi laktosa / sukrosa
Mikroorganisme yang mampu memfermentasi laktosa dan sukrosa jelas dapat memfermentasi glukosa. Setelah jumlah minimum glukosa yang ada dalam media habis, piruvat yang terbentuk mulai dimetabolisme untuk membentuk asam melalui siklus Krebs aerobik, dan dalam periode 8 hingga 12 jam semua media akan berwarna kuning.
Jika bakteri mampu memecah laktosa atau sukrosa, asam akan terus diproduksi, dan setelah 18 sampai 24 jam seluruh tabung – bevel dan plug – akan terus menguning.
Perlu dicatat bahwa penggunaan glukosa dilakukan dengan dua cara: satu secara aerobik di bagian bawah tabung, dan yang lainnya secara anaerob di bagian bawah tabung.
Interpretasi: A / A berarti bevel asam / dasar asam. Ini mungkin atau mungkin tidak memiliki gas.
Pada gambar di awal artikel lihat gambar tabung A.
produksi gas
Beberapa mikroorganisme mampu menghasilkan gas selama fermentasi gula. Gas dibuktikan dalam tabung dengan tekanan yang diberikannya di dalam agar-agar. Tekanan menyebabkan pembentukan gelembung atau perpindahan agar-agar. Terkadang pembentukan gas dapat mematahkan medium.
Penting bahwa saat menabur media TSI, tusukan dibuat dengan bersih melalui bagian tengah agar-agar hingga mencapai bagian bawah. Jika tusukan diarahkan ke dinding tabung, itu dapat menyebabkan positif palsu dalam produksi gas, karena akan keluar melalui saluran yang salah bentuk.
Produksi gas, serta reaksi yang terjadi di bevel agar-agar, membutuhkan oksigen, oleh karena itu disarankan agar tabung ditutup dengan sumbat kapas, dan jika menggunakan tutup Bakelite, tidak boleh benar-benar kencang.
Produksi gas dilaporkan positif (+) atau negatif (-).
Pola pembentukan gas. Sumber: Skema yang dibuat oleh MSc. Marielsa Gil. Sumber gambar: VeeDunnFlickr.com/Y_tambe [CC BY-SA 3.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0)], melalui Wikimedia Commons
Natrium tiosulfat dan besi amonium sulfat (produksi hidrogen sulfida)
Bakteri yang mampu menghasilkan hidrogen sulfida (gas tidak berwarna) mengambil belerang dari natrium tiosulfat yang ada dalam medium. Setelah H 2 S terbentuk, ia bereaksi dengan besi amonium sulfat, menghasilkan besi sulfida (endapan hitam yang terlihat jelas).
Produksi H 2 S dilaporkan positif (+) atau negatif (-).
Pada gambar di awal artikel lihat gambar tabung C.
Persiapan
Timbang 62,5 g medium triple sugar iron agar (TSI) dan larutkan dalam satu liter air suling.
Panaskan sampai agar-agar benar-benar larut. Rebus selama satu menit, sering diaduk. Distribusikan 4 ml media ke dalam tabung reaksi 13/100 dengan tutup kapas.
Sterilkan dalam autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit. Keluarkan dari autoklaf dan biarkan miring. Harus diperhatikan bahwa alas dan bezel memiliki jarak yang sama.
Simpan di lemari es 2-8°C. Biarkan hangat sebelum menabur strain bakteri.
Warna media yang dikeringkan adalah krem muda dan media yang disiapkan berwarna merah-oranye.
PH akhir dari media yang disiapkan adalah 7,3 ± 0,2.
Kegunaan
Tes TSI banyak digunakan di tingkat laboratorium mikrobiologi. Tes ini penting untuk memandu jenis tes yang harus diterapkan untuk mencapai identifikasi genus dan spesies. Eksekusi dan interpretasi yang baik dapat menghemat bahan dan tenaga.
Jika hasilnya adalah TSI K / K dan tes sitokrom oksidase positif, diketahui bahwa tes harus digunakan untuk identifikasi basil Gram negatif yang tidak memfermentasi, seperti Pseudomonas, Alcaligenes, Achromobacter, Burkholderia, di antara genera lainnya. Jika oksidase negatif, berorientasi pada genera Acinetobacter, Stenotrophomonas, dll.
Sebaliknya, jika diperoleh TSI A/A atau K/A dan uji sitokrom oksidase negatif, semakin banyak nitrat yang tereduksi menjadi nitrit, maka dapat dipastikan bahwa itu adalah mikroorganisme yang termasuk dalam Famili Enterobacteriaceae. Dalam hal ini, rute identifikasi akan fokus pada tes khusus untuk kelompok bakteri ini.
Sebaliknya, jika diperoleh citra K/A atau A/A dan uji sitokrom oksidase positif, maka pengujian tambahan yang akan dilakukan ditujukan untuk mengidentifikasi galur fermentasi yang tidak termasuk dalam Famili Enterobacteriaceae, seperti seperti: Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio dan Pasteurella.
Sebuah TSI dengan hidrogen sulfida, oksidase negatif, akan memandu identifikasi genera berikut dari Keluarga Enterobacteriaceae: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella , Leminorella, Pragia, Trabusiella atau Salmonella.
Sebuah TSI dengan sedikit atau sedang hidrogen sulfida dalam bevel alkali dengan latar belakang alkali dan oksidase positif, akan memandu penggunaan tes untuk identifikasi Gram-negatif, non-fermentasi H 2 S memproduksi batang , seperti putrefaciens Shewanella .
Akhirnya, TSI dapat digunakan untuk pemeriksaan produksi hidrogen sulfida pada basil Gram positif, terutama bila dicurigai Erysipelothrix rhusiopathiae.
Ditaburkan
Media TSI harus diinokulasi dengan koloni murni, diisolasi dalam kultur primer atau selektif. Jika koloni diambil dari media selektif yang diunggulkan dengan sampel dengan flora campuran, harus berhati-hati untuk mengambil hanya dari permukaan, karena strain yang layak dihambat dalam media itu mungkin ada di bagian bawah koloni.
Oleh karena itu, loop tidak boleh didinginkan pada media selektif dan kemudian koloni diambil dan diinokulasi dengan media TSI.
Penyemaian akan dilakukan dengan loop lurus atau jarum. Penusukan akan dilakukan dengan hati-hati melalui bagian tengah tengah hingga mencapai bagian bawah, kemudian penyemaian diakhiri dengan menginokulasi permukaan secara zig-zag. Jangan lakukan dua tusukan.
Inkubasi pada suhu 37°C secara aerobiosis selama 18-24 jam. Tafsirkan saat ini, baik sebelum maupun sesudahnya.
Keterbatasan
Tes TSI harus dibaca dalam waktu 18 sampai 24 jam inkubasi. Pembacaan sebelum waktu ini dapat memberikan hasil positif palsu untuk fermentasi A / A. Padahal, pembacaan setelah waktu ini dapat menimbulkan citra negatif palsu dari non-fermentor, karena konsumsi pepton yang membuat media menjadi alkali.
Referensi
- Mac Faddin J. (2003). Tes biokimia untuk identifikasi bakteri yang penting secara klinis. edisi ke-3 Editorial Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosa Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 edisi Editorial Panamericana SA Argentina.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosa Mikrobiologi. edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.
- “Agar TSI.” Wikipedia, Ensiklopedia Bebas . 10 Juli 2018, 08:09 UTC. 10 Feb 2019, 03:33 Tersedia di: es.wikipedia.org
- Laboratorium Britannia. TSI Agar (Tiga gula besi agar). 2015.Tersedia di: britanialab.com
- Laboratorium BD. Agar besi gula rangkap tiga (TSI Agar). 2003.Tersedia di: bd.com
