laktosa kaldu merupakan sarana non – medium kultur cair selektif digunakan terutama sebagai sebuah pra-pengayaan dalam isolasi strain Salmonella dari analisis mikrobiologi untuk makanan olahan, produk susu atau air. Ini direkomendasikan oleh Komisi Internasional untuk Spesifikasi Mikrobiologi untuk Makanan (ICMPF).
Medium mengandung enzimatik digest dari gelatin, ekstrak daging dan laktosa, zat yang diperlukan untuk pertumbuhan bakteri. Lebih lanjut, laktosa adalah karbohidrat yang dapat difermentasi, oleh karena itu beberapa koliform mampu memecahnya dengan produksi gas.
Kaldu laktat dengan kekeruhan. Sumber: Foto diambil oleh penulis MSc. Marielsa Gil
Untuk alasan ini, kaldu laktosa direkomendasikan oleh American Public Health Association (APHA) untuk studi dugaan bakteri coliform total dan fekal, memenuhi syarat sebagai alternatif yang sangat baik untuk menggantikan kaldu tryptose lauryl sulfate dalam teknik standar Most Probable Number ( MPN). ), digunakan untuk analisis mikrobiologi makanan, susu dan permukaan, sampel air limbah bawah tanah, rekreasi, domestik dan industri .
Indeks artikel
Dasar
Untuk analisis mikrobiologi beberapa sampel, langkah pra-pengayaan sangat penting untuk dapat memulihkan mikroorganisme tertentu yang mungkin dalam jumlah yang sangat rendah atau dalam kondisi yang tidak menguntungkan yang melanggar atau meminimalkan viabilitasnya.
Seperti halnya makanan kering dan makanan olahan, kemungkinan terkontaminasi Salmonella sp . Dalam kasus ini, jika ada bakteri, mereka telah mengalami kekerasan fisik dan kimia selama proses produksi produk.
Sedemikian rupa sehingga mikroorganisme terkena faktor-faktor yang merugikan seperti dehidrasi, paparan produk penghambat atau beracun, dan tumpang tindih yang dihasilkan oleh keberadaan bakteri lain dalam jumlah yang lebih besar, antara lain.
Dalam pengertian ini, kaldu laktosa memiliki efek perbaikan pada struktur mikroorganisme yang rusak, menyebabkannya pulih dan berkembang biak, sedemikian rupa sehingga dapat dideteksi.
Demikian juga, kaldu laktosa memiliki kemampuan untuk mengencerkan zat penghambat yang dapat mempengaruhi kelangsungan hidupnya, memungkinkan perkembangannya. Selain itu, komposisi nutrisi kaldu laktosa sangat strategis untuk mendukung pertumbuhan Salmonella sp dibandingkan mikroorganisme lainnya.
Untuk identifikasi akhir, harus disubkultur ke media kultur definitif lainnya.
Di sisi lain, komposisi media juga memungkinkan untuk mendeteksi mikroorganisme fermentasi laktosa yang menghasilkan gas.
Persiapan
Untuk menyiapkan satu liter kaldu laktosa, 13 gram media dehidrasi harus ditimbang dan dilarutkan dalam 1000 ml air suling.
Untuk membantu melarutkan media dalam air, larutan dapat dipanaskan sedikit, tetapi tidak terlalu panas.
Setelah homogen, larutan disiapkan sebagai berikut: jika kaldu akan digunakan untuk mencari koliform, rak tabung reaksi disiapkan, di mana tabung fermentasi Durham dimasukkan terbalik.
Tabung Durham adalah detail yang sangat penting, karena akan memungkinkan deteksi pembentukan gas, data yang sangat berharga dalam pencarian koliform.
Setelah tabung siap, 10 ml kaldu susu dibagikan ke dalamnya, jumlah yang harus cukup untuk menutupi seluruh tabung Durham.
Jika kaldu laktosa akan digunakan sebagai kaldu pra-pengayaan, tidak perlu menempatkan tabung fermentasi Durham. Dalam hal ini, jumlah medium yang lebih besar diperlukan (225 ml), yang akan disajikan dalam botol 500 ml, mulut lebar dan dengan tutup ulir tahan panas.
Selanjutnya, tabung atau labu tersebut diautoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit.
Medium harus memiliki pH akhir 6,9 ± 0,2 pada 25 ° C.
Kaldu disimpan di lemari es sampai digunakan.
Sebelum digunakan, kaldu harus dibawa ke suhu kamar.
Di sisi lain, kaldu laktosa juga dapat disiapkan dengan konsentrasi ganda.
Beberapa laboratorium menambahkan bromocresol ungu ke kaldu laktosa sebagai indikator pH, untuk menunjukkan tabung di mana laktosa telah difermentasi karena perubahan warna. Dalam hal ini kaldu mengambil warna ungu dan jika ada fermentasi berubah menjadi kuning.
Kegunaan
Di laboratorium mikrobiologi, kaldu laktosa banyak digunakan karena merupakan media yang relatif murah yang menawarkan hasil yang andal dan cepat (24-48 jam).
Ini dapat digunakan untuk analisis total dan feses coliform dalam makanan dan air atau sebagai kaldu pra-pengayaan untuk Salmonella.
Pra-pengayaan
Pra-pengayaan adalah langkah sebelum pengayaan sampel, yang sangat meningkatkan pemulihan bakteri genus Salmonella dalam makanan olahan.
Untuk melakukan ini, sampel makanan padat (25 gram) atau cairan (25 ml) diunggulkan dalam 225 ml kaldu laktosa, diinkubasi selama 24 hingga 48 jam. Selanjutnya, akan disubkultur dalam media yang diperkaya seperti kaldu selenit sistin atau kaldu tetrationat. Kemudian pindah ke media selektif XLD dan SS.
Analisis coliform total dan tinja
Ini adalah media yang sangat baik sebagai indikator kontaminasi feses.
Untuk alasan ini, kaldu laktosa sangat ideal untuk fase dugaan studi koliform dengan metode Angka Paling Mungkin.
Untuk sampel yang diduga mengandung koliform dalam jumlah besar, jumlah yang lebih kecil akan diinokulasi (1 ml), sedangkan untuk sampel yang diduga memiliki jumlah koliform yang lebih rendah, sampel dengan volume yang lebih besar (10 ml) akan diinokulasi. .
Untuk analisis, dibuat pengenceran 10 -1 , 10 -2 , 10 -3 , membentuk baterai yang terdiri dari 3-5 tabung untuk setiap konsentrasi yang digunakan.
Dari setiap pengenceran, volume yang sama ditaburkan ke dalam kaldu laktosa.
Tabung diinkubasi selama 24 jam. Kaldu negatif diinkubasi selama 24 jam tambahan.
Interpretasi hasil dilakukan dengan mengamati dua karakteristik: yang pertama adalah ada tidaknya kekeruhan dan karena media ini tidak mengandung indikator pH maka tidak akan terjadi perubahan warna.
Yang kedua adalah produksi atau tidak gas. Gas mudah dibuktikan dalam tabung Durham dengan munculnya satu atau lebih gelembung udara di dalamnya.
Dianggap positif jika kedua karakteristik diamati, yaitu kekeruhan dengan produksi gas. Tabung positif harus diunggulkan kembali di media konfirmasi (2% Brilliant Green Bile broth dan EC broth).
Kontrol kualitas media
– Saat menyiapkan media, jangan lupa untuk meletakkan tabung Durhams jika tujuannya sama untuk mempelajari koliform.
– Jangan terlalu panaskan media sebelum mensterilkan.
– Distribusikan dalam tabung reaksi sebelum mensterilkan, jangan sesudahnya.
– Jangan gunakan jika media lebih dari 3 bulan.
– Jangan gunakan jika Anda mengamati adanya perubahan dalam karakteristik media yang biasa.
– Saat menyiapkan sejumlah kaldu laktosa, uji kualitasnya dengan menaburkan galur yang diketahui seperti Escherichia coli, Enterobacter aerogenes , Citrobacter freundii, dan Klebsiella pneumoniae. Mereka tumbuh sangat baik, dengan produksi gas (kontrol positif).
– Bisa juga termasuk Pseudomonas aeruginosa , Salmonella typhimurium atau Enterococcus faecalis, yang tumbuh dengan baik, tetapi tanpa produksi gas (Kontrol Negatif).
– Perlu dicatat bahwa warna asli dari media yang dikeringkan adalah krem dan warna media yang disiapkan sangat ringan dan kuning transparan. Jika perubahan warna atau penampilan diamati, mungkin ada kerusakan yang sama.
Referensi
- Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Biologi lingkungan dan mikrobiologi. (2013) edisi pertama. Universitas Cartagenas, Kolombia.
- Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B dan Velázquez O. (2009). Teknik Analisis Mikrobiologi Pangan. edisi ke-2 Fakultas Kimia UNAM. Meksiko.
- Laboratorium Conda Pronadisa. 2017. Kaldu laktosa konsentrasi ganda (European Pharm.)
- Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Perbandingan teknik untuk ekstraksi bakteri coliform dari sedimen Danau Xochimilco, Meksiko. Pdt. argent. mikrobiol . 2013; 45 (3): 180-184. Tersedia di: scielo.org.
- Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Penentuan kualitas mikrobiologis air sumur artesis di distrik-distrik di departemen Central, Cordillera dan Capital Municipality. Mem.Inst.Investigasi. Sains. Kesehatan 2013; 11 (1): 5-14. Tersedia dari: scielo.iics.
