agar Simmons sitrat adalah medium padat digunakan sebagai uji biokimia identifikasi mikroorganisme, terutama Gram negatif basil. Media asli diciptakan oleh Koser pada tahun 1923.
Media Sitrat Koser terdiri dari kaldu yang mengandung natrium fosfat, amonium fosfat, monopotassium fosfat, magnesium sulfat, dan natrium sitrat.
A. Media Komersial Simmons Sitrat Agar Dehidrasi B. Agar Simmons Sitrat. Sumber: A. Foto diambil oleh MSc. Marielsa Gil B. Roto2esdios [CC BY-SA 3.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0)], dari Wikimedia Commons
Seperti dapat dilihat, satu-satunya sumber karbon dalam medium adalah sitrat, dan nitrogen adalah amonium fosfat, tanpa protein dan karbohidrat sebagai sumber unsur-unsur ini, mereka biasanya ada di media lain.
Oleh karena itu, bakteri yang diinokulasi dalam media ini hanya dapat berkembang biak jika mampu mengambil karbon dari sitrat. Uji positif jika terdapat kekeruhan pada medium, namun memiliki kelemahan yaitu dapat terjadi kekeruhan non spesifik.
Masalah ini diselesaikan oleh Simmons dengan menambahkan bromothymol blue dan agar ke dalam formula asli Koser. Meski prinsipnya sama, namun dimaknai berbeda.
Indeks artikel
Dasar
Beberapa bakteri memiliki kemampuan untuk bertahan hidup tanpa adanya fermentasi atau produksi asam laktat, yang membutuhkan energi melalui penggunaan substrat lain. Dalam pengujian ini satu-satunya sumber karbon yang ditawarkan adalah sitrat.
Bakteri yang mampu bertahan dalam kondisi ini dengan cepat memetabolisme sitrat dalam alternatif rute tradisional, menggunakan siklus asam trikarboksilat atau siklus fermentasi sitrat.
Katabolisme sitrat oleh bakteri melibatkan mekanisme enzimatik tanpa intervensi koenzim A. Enzim ini dikenal dengan nama sitrat (citrate oxaloacetate lyase) atau sitrat desmolase. Reaksi membutuhkan adanya kation divalen, yang dalam hal ini disuplai oleh magnesium.
Reaksi menghasilkan oksaloasetat dan piruvat, yang kemudian menimbulkan asam organik di tengah pH basa yang dibentuk oleh penggunaan sumber nitrogen. Asam organik ini digunakan sebagai sumber karbon yang menghasilkan karbonat dan bikarbonat, yang selanjutnya membuat lingkungan menjadi alkali.
Modus menabur
Media simmons sitrat harus diinokulasi ringan ke dalam fishtail menggunakan loop lurus atau jarum, dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu 35-37°C. Setelah waktu, hasilnya diamati.
Penyemaian dilakukan hanya pada permukaan agar-agar. Jangan menusuk.
Penafsiran
Jika media tetap berwarna asli (hijau) dan tidak ada pertumbuhan yang terlihat, tes negatif, tetapi jika media berubah menjadi biru, itu menunjukkan adanya produk alkali yang terdeteksi oleh indikator pH. Dalam hal ini tesnya positif.
Sitrat (+) dan (-). Sumber: MSc. Marielsa Gil
Hal ini terjadi karena jika bakteri menggunakan karbon dari sitrat, ia juga mampu mengambil nitrogen dari amonium fosfat yang dengannya ia melepaskan amonia, membuat medium menjadi alkali.
Sebaliknya jika pada media terlihat pertumbuhan bakteri tetapi tidak terjadi perubahan warna, maka uji juga harus dianggap positif, karena jika ada pertumbuhan berarti bakteri tersebut mampu menggunakan sitrat sebagai sumber karbon. , bahkan jika tidak ada perubahan pH saat ini (terkadang mungkin perlu waktu).
Jika ada keraguan dalam interpretasi warna akhir, dapat dibandingkan dengan tabung sitrat yang tidak diinokulasi.
Persiapan
Timbang 24,2 g media dehidrasi untuk satu liter air. Campur dan diamkan selama kurang lebih 5 menit. Selesai melarutkan media dengan memanaskan selama 1 atau dua menit, sering mengocok.
Tuang 4 ml ke dalam tabung reaksi dan autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit. Saat meninggalkan autoklaf, miringkan dengan bantuan penyangga sedemikian rupa sehingga agar-agar mengeras dalam bentuk paruh seruling dengan sedikit balok atau bagian bawah dan lebih bevel.
pH akhir dari media sitrat adalah 6.9 (warna hijau). Media ini sangat sensitif terhadap perubahan pH.
Pada pH 6 atau lebih rendah, media berubah menjadi kuning. Warna ini tidak diamati pada uji bakteri.
Dan pada pH 7,6 atau lebih, media berubah menjadi warna biru tua Prusia.
Menggunakan
Simmons Sitrat Agar digunakan untuk mengidentifikasi mikroorganisme tertentu, terutama basil yang termasuk dalam famili Enterobacteriaceae dan basil fermentasi non-glukosa lainnya.
Sumber: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosa Mikrobiologi. edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.
Pikiran terakhir
Media Simmons citrate adalah tes yang sangat rumit, karena hasil positif palsu dapat diperoleh jika kesalahan tertentu dibuat.
Perawatan yang harus dilakukan adalah sebagai berikut:
Inokulum
Inokulum bakteri yang sangat tebal atau penuh tidak boleh dilakukan, karena dapat menyebabkan warna kuning tembaga berkembang di tempat penaburan, tanpa mempengaruhi sisa media, tetapi dapat menyebabkan kepercayaan bahwa ada pertumbuhan. Itu tidak berarti positif dari tes.
Demikian pula, inokulum yang kental dapat menghasilkan positif palsu, karena senyawa organik yang terbentuk sebelumnya di dalam dinding sel bakteri yang sekarat dapat melepaskan cukup banyak karbon dan nitrogen untuk mengubah indikator pH.
Oleh karena itu, yang ideal adalah menabur menggunakan jarum alih-alih pegangan platina, untuk menghindari pengambilan bahan yang berlebihan.
Ditaburkan
Di sisi lain, ketika baterai tes biokimia sedang diunggulkan untuk identifikasi mikroorganisme yang bersangkutan, penting bahwa tes sitrat adalah yang pertama diinokulasi, untuk menghindari pembawa protein atau karbohidrat dari media lain. .
Dalam keadaan ini dimungkinkan untuk memperoleh hasil positif palsu, karena salah satu dari zat-zat ini yang dimasukkan secara tidak sengaja akan dimetabolisme dan akan menyebabkan perubahan pH.
Cara lain untuk menghindari terbawanya zat adalah dengan membakar loop dengan baik dan mengambil inokulum baru di antara pengujian.
Perawatan juga harus dilakukan ketika menyentuh koloni untuk melakukan inokulum, karena harus dihindari untuk menarik bagian agar dari kultur dari mana bakteri berasal, karena penjelasan di atas.
Dalam hal ini, Matsen, Sherris dan Branson merekomendasikan pengenceran inokulum dalam larutan fisiologis sebelum menginokulasi uji sitrat untuk menghindari transfer sumber karbon lainnya.
Intensitas warna
Ini harus menjadi diperhitungkan bahwa intensitas warna yang dihasilkan ketika tes ini positif dapat bervariasi sesuai dengan rumah komersial.
Selain itu, ada mikroorganisme yang tes positif pada 24 jam, tetapi ada strain lain yang membutuhkan 48 jam atau lebih untuk menghasilkan perubahan pH.
Referensi
- Mac Faddin J. (2003). Tes biokimia untuk identifikasi bakteri yang penting secara klinis. edisi ke-3 Editorial Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosa Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 edisi Editorial Panamericana SA Argentina.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosa Mikrobiologi. edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.
- Laboratorium BD. BBL Simmons Sitrat Agar Miring. 2015.Tersedia di: bd.com
- Laboratorium Britannia. Agar Simmons Sitrat. 2015.Tersedia di: britanialab.com
- Laboratorium Diagnostik Valtek. Agar Simmons Sitrat. 2016.Tersedia di: andinamedica.com.
