EMB agar adalah selektif dan menengah diferensial digunakan untuk isolasi padat budaya Gram negatif basil, terutama Enterobacteriaceae dan bakteri Gram negatif lainnya undemanding. Ia juga dikenal dengan singkatan EAM, yang merupakan singkatan dari eosin-methylene blue.
Media ini dibuat oleh Holt-Harris dan Teague pada tahun 1916. Media ini mengandung pepton, laktosa, sukrosa, dipotassium fosfat, agar, eosin, metilen biru, dan air. Ini sangat mirip dengan Agar MacConkey, terutama saat menggunakan Agar EMB Modifikasi Levine, yang tidak mengandung sukrosa.
Kilauan logam Escherichia coli pada agar EMB Sumber: Carmen Moreno González [CC BY-SA 4.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0)], dari Wikimedia Commons
Faktanya, setiap laboratorium memutuskan apakah akan bekerja dengan satu atau yang lain, karena mereka memenuhi fungsi yang sama, meskipun secara biokimia berbeda.
Ia bahkan memiliki kelemahan yang sama seperti agar MacConkey klasik dalam hal produksi berkerumun oleh genus Proteus. Oleh karena itu, untuk menghindari fenomena ini, konsentrasi agar-agar dapat ditingkatkan hingga 5%.
Indeks artikel
Dasar
Selektif
Agar EMB selektif karena mengandung pewarna anilin (eosin dan metilen biru), yang bertindak sebagai inhibitor, mencegah pertumbuhan sebagian besar bakteri Gram positif dan beberapa batang Gram negatif yang rewel.
Namun, agar-agar ini memiliki kelemahan yaitu beberapa bakteri Gram positif dapat menolak keberadaan zat penghambat dan tumbuh sebagai koloni belang-belang kecil yang tidak berwarna, seperti Enterococcus faecalis dan beberapa Staphylococcus .
Ragi tertentu juga dapat tumbuh, seperti kompleks Candida albicans , yang akan memberikan koloni merah muda yang sangat kecil. Chlamydospora bahkan dapat berkembang dari ragi ini jika sampelnya diunggulkan.
Diferensial
Di sisi lain, agar EMB juga merupakan media diferensial, karena pewarna ini bersama-sama (eosin dan metilen biru) memiliki sifat membentuk endapan pada pH asam, oleh karena itu mereka berfungsi sebagai indikator produksinya.
Dengan demikian, bakteri fermentasi laktosa atau sukrosa yang lemah menghasilkan koloni ungu dalam waktu 24 hingga 48 jam. Misalnya genus Klebsiella, Enterobacter dan Serratia.
Bakteri yang memfermentasi laktosa dengan kuat, seperti Escherichia coli, atau sukrosa, seperti Yersinia enterocolitica atau Proteus penneri, membentuk endapan hitam kehijauan, memberikan penampilan kilau logam yang khas pada spesies ini.
Perlu dicatat bahwa jika media EMB levine (tanpa sukrosa) digunakan, Yersinia enterocolitica dan Proteus penneri akan menghasilkan koloni yang jernih.
Bakteri yang tidak memfermentasi laktosa atau sukrosa diberi nutrisi oleh adanya pepton, yang menyediakan asam amino dan nitrogen yang diperlukan untuk pertumbuhan bakteri, dan menghasilkan koloni yang jernih. Misalnya, genus Salmonella dan Shigella, antara lain.
Demikian juga, penting untuk dicatat bahwa genus Acinetobacter dapat menghadirkan koloni biru lavender , meskipun bukan merupakan fermentor laktosa atau sukrosa, tetapi memiliki sifat mengikat metilen biru pada dinding selnya. Ini juga dapat terjadi dengan bakteri oksidatif lainnya.
Persiapan
Media dehidrasi asli berwarna krem muda.
Untuk menyiapkan media kultur ini, 36 gram media dehidrasi harus ditimbang dan disuspensikan dalam labu yang berisi satu liter air suling.
Setelah campuran dibiarkan selama 5 menit, bawa labu ke sumber panas, aduk terus menerus sampai mendidih dan larut sepenuhnya.
Selanjutnya, media kultur yang sudah larut harus disterilisasi menggunakan autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit.
Pada akhir waktu, dikeluarkan dari autoklaf dan dibiarkan istirahat sebentar. Kemudian, saat masih panas (45-50 ° C), 15-20 ml agar-agar disajikan di setiap cawan Petri steril. Mediumnya harus lakmus biru.
Setelah disajikan piring dibiarkan sedikit terbuka sampai agar-agar sedikit dingin. Mereka kemudian ditutup dan dibiarkan mengeras sepenuhnya. Selanjutnya disusun dalam wadah pelat terbalik dan disimpan dalam lemari es (8 ° C) sampai digunakan.
Prosedur ini lebih disukai dilakukan dalam tudung aliran laminar atau di depan pembakar Bunsen untuk menghindari kontaminasi.
Penting untuk diingat bahwa setiap rumah komersial akan menunjukkan jumlah yang akan ditimbang untuk menyiapkan media kultur.
PH akhir media harus 7,2 ± 0,2
Kegunaan
Media ini digunakan untuk menabur urin dan feses atau jenis spesimen klinis apa pun, terutama jika dicurigai adanya basil Gram negatif yang tidak rewel, seperti basil dari famili Enterobacteriaceae, yang tumbuh sangat baik pada media ini.
Bakteri enteropatogen dari genus Shigella dan Salmonella dibedakan oleh koloninya yang tidak berwarna atau agak kuning.
Basil non-fermentasi laktosa lainnya juga tumbuh seperti Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter, antara lain.
Demikian pula, media ini sangat berguna dalam analisis mikrobiologi makanan dan air, karena sangat ideal untuk fase konfirmasi lengkap penentuan koliform, yaitu untuk menguatkan keberadaan E. coli dari kaldu EC keruh, dari teknik angka paling mungkin (MPN).
QA
Untuk memverifikasi bahwa media kultur yang baru disiapkan bekerja dengan baik, galur kontrol dapat ditanam untuk mengamati karakteristik koloni dan memverifikasi bahwa mereka memberikan seperti yang diharapkan.
Untuk ini, galur ATCC atau galur E. coli yang teridentifikasi dengan baik , Enterobacter aerogenes , Klebsiella sp , Salmonella typhimurium , Shigella flexneri , Pseudomonas aeruginosa dan beberapa bakteri Gram positif, seperti S. aureus, dapat digunakan .
E. coli diharapkan menghasilkan koloni biru-hitam yang berkembang dengan baik dengan kilau logam hijau. Sedangkan Enterobacter aerogenes dan Klebsiella sp akan menghasilkan koloni mukus berwarna hitam kebiruan yang berkembang baik.
Di sisi lain, Salmonella typhimurium dan Shigella flexneri , harus mengembangkan koloni besar, tidak berwarna atau dengan sedikit warna kuning.
Akhirnya, genus Pseudomonas aeruginosa tumbuh sebagai koloni tidak berwarna dengan ukuran tidak teratur, sedangkan bakteri Gram positif harus dihambat total atau tumbuh jarang dengan koloni yang sangat kecil.
Pikiran terakhir
Terkadang sterilisasi menyebabkan metilen biru berkurang, menunjukkan media berwarna oranye. Agar metilen biru mengoksidasi dan mengembalikan warna ungu, harus dicampur dengan lembut sampai warnanya pulih.
Juga, setelah sterilisasi, pewarna dapat mengendap, sehingga harus dicampur dengan baik sebelum menyajikan cawan Petri.
Referensi
- Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B dan Velázquez O. 2009. Teknik untuk Analisis Mikrobiologi Makanan. edisi ke-2 Fakultas Kimia UNAM. Meksiko.
- Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. Karakterisasi dan Distribusi Strain Escherichia coli yang Berpotensi Patogen yang Terisolasi dari Ayam Broiler dari Peternakan Unggas di Peru. Pdt. investiga. dokter hewan. Peru 2012 23 (2): 209-219. Tersedia di: scielo.org.
- Laboratorios Conda SA Eosin dan Methylene Blue Agar . 2010.Tersedia di: condalab.com
- Laboratorium Britannia. Levine EMB (Dengan Eosin dan Metilen Biru) 2011.Tersedia di: britanialab.com
- Laboratorium BD. BD EMB Agar (Eosin Methylene Blue Agar), Dimodifikasi. 2013.Tersedia di: bd.com
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosa Mikrobiologi. (edisi ke-5). Argentina, Editorial Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 edisi Argentina. Editorial Panamericana SA
