Congo merah adalah zat warna azo untuk protein yang dibentuk oleh kopling garam diazonium dan cincin aromatik aktif. Zat ini mampu menyerap radiasi elektromagnetik dalam spektrum yang terlihat, sehingga memiliki warna yang intens.
Ini bermuatan negatif. Oleh karena itu, ia memiliki afinitas untuk komponen seluler bermuatan positif, seperti zat protein tertentu. Warnanya bervariasi sesuai dengan pH. Dalam pengertian ini, jika media bersifat asam (<pH3), warnanya biru pekat. Antara pH3 – pH 5,2 itu adalah fuchsia (zona balik), dan dengan> pH 5,2 warnanya merah tua.
Larutan koloid Congo Red dan Congo Red. Sumber: Pixinio.com dan Wikipedia.com
Ini adalah zat yang sangat serbaguna, karena memiliki banyak kegunaan. Ini telah digunakan sebagai pewarna dalam industri tekstil, dan juga untuk sel dan kain.
Juga untuk membuat media kultur yang mengukur kerja enzim, sebagai indikator pH, sebagai zat kontrol dalam evaluasi berfungsinya spektrofotometer, dalam studi pembentukan biofilm, atau dalam diagnosis amiloid.
Demikian juga, memungkinkan untuk membedakan serotipe bakteri dan jamur dengan mengidentifikasi struktur spesifik di dindingnya (lipopolisakarida).
Indeks artikel
Karakteristik Kongo merah
Zat ini ditemukan oleh Böttiger pada tahun 1884. Ini adalah turunan diazonium yang dibentuk oleh asam bis-diazoat dari benzidin dengan asam nafthionat. Molekul merah Kongo berukuran 21 Armstrong dan berat molekulnya kira-kira 8000 g / mol.
Kongo merah ditandai dengan larut dalam air, dan terlebih lagi dalam pelarut organik seperti etanol, membentuk larutan koloid.
Ia memiliki afinitas untuk selulosa, untuk jaringan amiloid, dan untuk komponen seluler bermuatan positif.
Persiapan
Congo Red disiapkan dalam konsentrasi yang berbeda tergantung pada teknik yang akan digunakan. Sebagian besar menggunakan merah Kongo pada 1%, 2%, 0,1%, antara lain.
Misalnya, untuk menyiapkan 2% Congo Red, 2 g pewarna makanan kering harus ditimbang dan ditambahkan 100 ml air suling. Kemudian disimpan dalam botol amber.
Kegunaan
Sebagai pewarna dalam industri tekstil
Untuk waktu itu banyak digunakan dalam industri tekstil karena fiksasinya pada kapas, tetapi saat ini tidak digunakan karena bersifat karsinogenik dan juga karena warnanya tidak stabil, menjadi berubah warna karena gesekan.
Penentuan kapasitas pembentukan biofilm
Kapasitas pembentukan biofilm mikroorganisme telah terbukti menjadi faktor virulensi.
Dalam pengertian ini, pewarna merah Kongo digunakan sebagai metode untuk menentukan pembentukan biofilm. Congo red mengikat eksopolisakarida yang ada dalam biofilm. Namun, dibandingkan dengan metode lain, metode ini paling tidak direkomendasikan karena hasil negatif palsu yang tinggi.
Metode yang digunakan adalah agar-agar merah Kongo yang terdiri dari agar darah sebagai basa, glukosa (10 g/l) dan pewarna merah Kongo (0,4 g/l). Strain yang akan dievaluasi disemai dalam medium dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37°C, selanjutnya diinkubasi selama 48 jam pada suhu kamar.
Sebuah tes positif dibuktikan jika koloni kristal warna hitam dan penampilan kering diamati.
Kontrol kualitas spektrofotometer
Untuk mengevaluasi apakah peralatan pengukuran absorbansi atau transaksi memenuhi parameter fotometrik yang ditetapkan oleh peraturan internasional, teknik sederhana dapat digunakan untuk menentukan apakah peralatan tersebut mengeluarkan hasil dalam kisaran yang dapat diterima.
Salah satu teknik evaluasinya adalah menggunakan Congo red, berdasarkan titik isosbestik.
Titik isosbestik adalah panjang gelombang di mana merah Kongo memancarkan absorbansi yang sama secara independen dari pH, konsentrasi dan suhu. Nilai absorbansinya tetap dan dapat digunakan sebagai acuan.
Titik isosbestik teoretis Kongo merah diketahui 541 nm. Jika nilai yang diperoleh berbeda, diketahui bahwa peralatan tersebut memiliki masalah penyimpangan panjang gelombang, dan perlu diperiksa oleh teknisi khusus.
Persiapan media kultur
Ortiz dkk. Jelaskan media kultur yang dibuat dengan pewarna merah Kongo dan karboksimetilselulosa yang disebut agar CMC, untuk mendeteksi strain mikroba selulit; yaitu, produsen selulase (endoglukonase, eksoglukanase dan -glukosidase).
Medium ini memiliki warna yang intens. Warna tersebut akan hilang oleh kerja enzim endoglukanase yang memecah struktur karboksimetilselulosa. Ini menunjukkan reaksi positif.
Penurunan viskositas dan absorbansi memungkinkan aktivitas enzim diukur. Misalnya, pada strain Streptomyces sp.
Identifikasi mikroorganisme
Kongo merah memiliki afinitas untuk struktur polisakarida dari strain tertentu, mencapai identifikasi mikroorganisme ini. Diantaranya adalah Escherichia coli, dan Shigella flexneri.
Kongo merah agar piring juga digunakan untuk mendapatkan koloni karakteristik, seperti Azospirillum sp, yang memberikan koloni merah merah , antara lain.
Noda sel dan jaringan
Salah satu aplikasi paling umum dari Congo red adalah kegunaannya dalam diagnosis amiloidosis. Penyakit aneh ini terdiri dari akumulasi ekstraseluler protein abnormal di berbagai organ. Protein abnormal ini dibuat di sumsum tulang dan disebut amiloid.
Kongo merah memiliki afinitas tinggi untuk zat ini. Properti ini telah digunakan untuk menunjukkan keberadaannya di bagian jaringan histologis. Congo Red digunakan bersama dengan Hematoxylin / Eosin untuk tujuan ini.
Penyatuan jaringan amiloid dan merah Kongo terjadi melalui ikatan hidrogen nonpolar, antara gugus karboksil dan gugus amino. Protein amiloid menyumbangkan gugus karboksil (COOH) dan Kongo merah memberikan gugus amino.
Jaringan amiloid diwarnai dalam berbagai warna mulai dari merah muda hingga merah tua yang terlihat di bawah mikroskop cahaya. Dalam mikroskop dengan cahaya terpolarisasi ganda, preparat ini diamati dengan birefringence apel-hijau patognomonik.
Artinya, mereka menyajikan dichroism, karena serat amiloid adalah anisotropik. Pengamatan ini mengkonfirmasi diagnosis.
Pewarnaan jaringan dengan Congo red kompatibel dengan metodologi diagnostik lainnya, seperti metode imunositokimia, dan bahkan dapat diwarnai ulang.
Sebagai indikator pH
Sifat berbalik melawan perubahan pH digunakan dengan teknik yang disebut chromoendoscopy.
Teknik ini menggunakan pewarna dan indikator pH yang memungkinkan deteksi patologi tertentu. Diantaranya adalah penggunaan Congo red, yang dapat mengungkapkan fokus kanker dini di mukosa lambung, digunakan sebagai penanda keasaman.
Teknik ini didasarkan pada fakta bahwa merah Kongo pada pH asam berwarna hitam. Oleh karena itu, setelah menempatkan larutan Congo red pada mukosa lambung, area yang pucat akan dipilih untuk diambil sampelnya untuk biopsi, yaitu di mana tidak ada produksi asam. Ini menunjukkan adanya fokus kanker atau hilangnya sel parietal.
Referensi
- “Kongo Merah.” Wikipedia, Ensiklopedia Bebas . 8 Mei 2019, 12:13 UTC. 16 Mei 2019, 04:08, es.wikipedia.org.
- Ortiz M, Uribe D. Metode baru untuk kuantifikasi aktivitas endoglukanase berdasarkan kompleks selulosa-Kongo merah. Orinoquia [Internet]. Juni 2011 [dikutip 15 Mei 2019 ]; 15 (1): 7-15. Tersedia dari: scielo.org.
- Peña J, Uffo O. Produksi biofilm dalam genotipe Staphylococcus aureus diisolasi dari mastitis sapi di Kuba. Pdt Salud Anim. [Internet]. 2013 Des [dikutip 16 Mei 2019 ]; 35 (3): 189-196. Tersedia di: scielo.s
- Fich F, Chahuán M, Farías M, Cárdenas C, Abarzúa A, Araya G et al. Manifestasi kulit amiloidosis sistemik sebagai kunci diagnostik: Kasus klinis. Pdt.medis. Chili [Internet]. 2012 Apr [dikutip 16 Mei 2019 ]; 140 (4): 499-502. Tersedia dalam: scielo.
- Duymovich C, Acheme R, Sesini S, Mazziotta D. Spektrofotometer dan Fotokolorimeter Panduan pembaruan praktis. Acta Bioquímica Clínica Latinoamericana [online] 2005, 39 (September-Desember): [Tanggal dikonsultasikan: 15 Mei 2019] Tersedia di: redalyc.org
- Marín J, Díaz J dan Solis J. Chromoendoscopy pada infeksi Helicobacter pylori : apakah ini waktu reaksi? Rev Esp Enferm Dig 2012; 104 (1): 1-3
- Fieser L, Fieser M. 1985. Kimia organik. Redaksi Reverte. Barcelona, Spanyol. Tersedia di: books.google.co.ve
- Murillo M. Teknik pewarnaan jaringan histologis. Universitas Guadalajara, Meksiko. Tersedia di: academia.edu
- Paillié M. Penentuan aktivitas selulolitik, ligninolitik dan amilolitik Actinobacteria diisolasi dari tanah rizosfer semanggi putih ( Trifolium repens ). 2012. Pontificia Universidad Javeriana Fakultas Ilmu Mikrobiologi Industri Bogotá DC Tersedia di: repository.javeriana.edu.co
- Cárdenas, D, Garrido M, Bonilla R, & Baldani V. Isolasi dan Identifikasi Azospirillum sp . di rumput Guinea ( Panicum maximum Jacq .) dari Lembah Cesar. Padang Rumput dan Hijauan , 2010; 33 (3): 1-8 Tersedia dalam: scielo.
