agar Thayer Martin itu adalah media selektif sangat bergizi dan padat untuk isolasi Neisseria meningitidis dan Neisseria gonorrhoeae; keduanya dikenal sebagai Neisseria patogen atau penting secara klinis.
Salah satu karakteristik khusus yang paling penting dari Thayer Martin Agar adalah kandungan suplemen nutrisi yang tinggi. Sifat ini penting, karena Neisseria adalah mikroorganisme yang sangat menuntut dari sudut pandang nutrisi dan karena itu tidak tumbuh di media umum.
Media Usaha Thayer Martin / Agar Thayer Martin. Sumber Gambar 1: Diambil oleh penulis MSc. Marielsa Gil, gambar 2. Bakteri Pixinio.com dikolonisasi, dimodifikasi, Thayer, Martin, agar.
Di sisi lain, karena mikroorganisme ini biasanya ditemukan di daerah yang tidak steril, penambahan inhibitor diperlukan untuk mencegah pertumbuhan flora yang menyertainya, tanpa mempengaruhi perkembangan genus Neisseria.
Agar-agar ini terdiri dari agar-agar dasar GC, hemoglobin, suplemen nutrisi tambahan dan kompleks zat penghambat (antibiotik dan antijamur). Rumah komersial menjual masing-masing suplemen secara terpisah.
Sampel yang akan ditaburkan dalam media ini akan tergantung pada mikroorganisme yang dicari. Untuk Neisseria gonorrhoeae, spesimen yang ideal adalah sekret vagina dan uretra. Sedangkan untuk Neisseria meningitidis sampel yang paling banyak digunakan adalah cairan serebrospinal, eksudat faring dan nasofaring.
Indeks artikel
Dasar
Neisseria adalah mikroorganisme yang tergolong mengganggu sehingga sulit diisolasi. Untuk alasan ini, Thayer Martín adalah media yang kompleks dan masing-masing komponennya memenuhi fungsi yang dijelaskan di bawah ini:
agar-agar dasar GC
Agar-agar GC mengandung pepton proteosa, pati jagung, natrium klorida, dipotassium fosfat, monopotassium fosfat, dan agar-agar. Komponennya menyediakan nutrisi dasar untuk perkembangan mikroba, menetralkan asam lemak beracun, membantu menjaga keseimbangan osmotik, menentukan pH dan memberikan konsistensi padat pada medium.
Hemoglobin
Hemoglobin menyediakan faktor V dan X (nicotinamide adenine dinucleotide NAD dan hemin masing-masing). Untuk alasan ini, spesies Haemophilus juga tumbuh di media ini. Hemoglobin dapat diperoleh secara komersial dalam bentuk dehidrasi atau darah sapi segar yang telah didefibrinasi dapat ditambahkan ke dalam medium.
Suplemen pengayaan
Di sisi lain, suplemen pengayaan juga harus ditambahkan ke media Thayer-Martin, karena nutrisi yang terkandung dalam agar dasar tidak cukup untuk kebutuhan genus Neisseria.
Suplemen pengayaan yang paling umum digunakan disebut isovitalex. Mengandung glutamine, adenine, NAD, cocarboxylase, guanine, ferric nitrate, p-amino benzoic acid, vitamin B12, tiamin dan glukosa. Semua senyawa ini diperlukan untuk pengembangan yang tepat dari Neisseria patogen.
Inhibitor
Karena merupakan media yang bergizi tinggi, inhibitor harus digunakan untuk mencegah pertumbuhan mikroorganisme dari flora biasa di daerah tersebut dan dengan demikian mendukung isolasi genus Neisseria.
Kompleks inhibitor terdiri dari vankomisin, kolistin, dan nistatin. Vankomisin menghambat pertumbuhan bakteri Gram positif, colistin mencegah pertumbuhan bakteri Gram negatif seperti Pseudomonas dan beberapa Neisseria saprofit, dan nistatin bekerja pada ragi seperti Candida albicans.
Namun, agar Thayer Martin kemudian dimodifikasi; Perubahan tersebut terdiri dari penambahan trimetoprim, penambahan jumlah agar-agar dan penambahan glukosa ekstra. Perubahan ini secara signifikan meningkatkan pemulihan spesies Neisseria gonorrhoeae .
Perlu dicatat bahwa trimetoprim menghambat pertumbuhan genus Proteus dan pembentukannya yang berkerumun. Dalam pengertian ini, antibiotiklah yang memberikan karakter selektif pada medium Thayer Martin.
Persiapan
Agar-agar Thayer Martin asli
-GC agar
Timbang 8,2 g media GC dehidrasi dan suspensi dalam 100 ml. Campur dan didihkan selama 1 menit dengan sering diaduk hingga larut sepenuhnya. Mensterilkan campuran dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit.
-Hemoglobin 2%
Suspensikan 2 g hemoglobin dehidrasi dalam 2 atau 3 ml air suling panas sampai terbentuk campuran yang seragam. Tambahkan air sedikit demi sedikit hingga volume menjadi 100 ml. Suspensi harus homogen sebelum disterilkan.
Sterilkan dalam autoklaf selama 15 menit.
-Suplemen pengayaan
Susun kembali vial komersial dengan pengencer yang disediakan oleh perusahaan komersial yang sama. Campur dengan baik. Jumlah pengencer yang digunakan akan ditentukan dalam instruksi kit.
-Suplemen penghambat VCN (vankomisin, colistin, nistatin)
Susun kembali vial dengan pengencer yang disediakan oleh perusahaan komersial. Campur dengan baik. Jumlah pengencer yang digunakan akan ditentukan dalam instruksi kit.
-Siap
Untuk setiap 100 ml agar GC, lakukan sebagai berikut:
Ketika agar GC meninggalkan autoklaf, biarkan dingin hingga suhu sekitar 50 ° C dan tambahkan 2 ml larutan hemoglobin yang sudah disiapkan, 2 ml suplemen pengayaan (isobitalex atau britalex), dan 2 ml suplemen penghambat. Campur dan sajikan dalam cawan Petri steril.
Biarkan mengeras dan simpan di lemari es sampai digunakan.
Warna media yang disiapkan adalah merah ceri. PH akhir media adalah 7,2 ± 0,2
Agar Thayer Martin yang dimodifikasi
Timbang 8,2 g media GC dehidrasi dan suspensi dalam 100 ml. Tambahkan 1 g agar-agar dan tambahkan 0,3 g glukosa. Campur dan didihkan selama 1 menit dengan sering diaduk hingga larut sepenuhnya. Mensterilkan campuran dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit.
Siapkan hemoglobin dan suplemen pengayaan seperti yang dijelaskan sebelumnya.
Suplemen supresi yang digunakan adalah VCNT (vancomycin, colistin, nistatin, trimethoprim).
-Siap
Lanjutkan seperti yang dijelaskan untuk agar Thayer Martin asli.
Menggunakan
Thayer Martin Agar harus dibiarkan hangat sebelum spesimen digores. Sampel yang umum digunakan adalah pharyngeal swab, nasal swab, sekret vagina, uretra, dan/atau rektal, dan cairan serebrospinal.
Gunakan sampel segar dan buat inokulum kuat pada agar. Sampel diunggulkan langsung dengan pelepasan material dan kemudian digoreskan ke permukaan.
Pelat diinkubasi pada 35-37 ° C selama 24 sampai 48 jam dalam tabung mikroaerofilik (5% CO 2 ). Pada akhir waktu inkubasi, cawan diperiksa untuk koloni kecil, abu-abu dan kadang-kadang tampak mukoid.
Lakukan tes Gram dan biokimia konfirmasi pada koloni yang mencurigakan.
QA
Strain mikroba berikut dapat digunakan untuk kontrol kualitas Thayer Martin Agar.
Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 dan Neisseria meningitidis ATCC 13090; perkembangan yang memuaskan diharapkan pada kedua strain.
Strain-strain berikut juga harus disertakan: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 dan Candida albicans ATCC 10231. Pada semuanya diharapkan penghambatan total atau sebagian dalam media ini.
Keterbatasan
-Harus diingat bahwa bakteri yang resisten terhadap inhibitor yang digunakan dapat tumbuh dalam media.
-Ada strain Neisseria gonorrhoeae yang sensitif terhadap konsentrasi vankomisin yang digunakan. Untuk alasan ini, disarankan untuk menggunakan agar-agar cokelat yang dilengkapi dengan isovitalex, tetapi tanpa inhibitor.
-Ada galur khamir resisten nistatin yang dapat tumbuh dalam media ini dan mengganggu isolasi Neisseria patogen, terutama gonokokus.
Referensi
- Laboratorium Diagnostik Valtek. Thayer-Martin Agar. 2016. Tersedia di: com
- Laboratorium Britannia. Thayer Martin Sedang Dimodifikasi. 2010.Tersedia di: britanialab.com
- Kontributor Wikipedia. Agar Thayer-Martin. Wikipedia, ensiklopedia gratis. 26 Oktober 2017, 16:33 UTC. Tersedia di: wikipedia.org4. Diakses pada 28 Februari 2019.
- Laboratorium Britannia. agar-agar GC. 2010.Tersedia di: britanialab.com.
- Laboratorium BBL ™ Pengayaan Medium untuk Mikroorganisme yang Rewel. 1999. Tersedia di: bd.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosa Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 edisi Editorial Panamericana SA Argentina.