agar darah adalah media kultur padat diperkaya diferensial tapi selektif. Ini digunakan untuk pemulihan dan pertumbuhan berbagai macam mikroorganisme dari sampel klinis atau untuk subkultur.
Agar darah klasik harus disertakan untuk penyemaian sebagian besar sampel klinis yang diterima di laboratorium; Kecuali sampel tinja yang tidak berguna, kecuali jika dibuat dengan modifikasi tertentu.
piring agar darah
Media kultur ini pada dasarnya terdiri dari agar dasar yang diperkaya dan 5% darah. Basis agar dapat bervariasi sesuai dengan kebutuhan, tetapi terutama akan terdiri dari pepton, asam amino, vitamin, ekstrak daging, natrium klorida, agar, antara lain.
Sedangkan untuk darah, biasanya diperlukan kontak dengan vivarium untuk mendapatkan darah dari hewan, seperti domba, kelinci atau kuda. Namun, ini tidak selalu memungkinkan dan darah manusia terkadang digunakan.
Media agar darah dapat disiapkan di laboratorium atau dapat dibeli siap pakai dari perusahaan khusus. Persiapan media ini adalah salah satu yang paling halus, setiap kecerobohan dalam persiapannya akan menghasilkan batch yang terkontaminasi.
Untuk alasan ini, semua tindakan pencegahan yang mungkin harus diambil dan, pada akhirnya, kontrol kualitas harus dilakukan dengan menginkubasi pada 37 ° C 1 piring untuk setiap 100 yang disiapkan.
Indeks artikel
Dasar
Staphylococcus aureus dikultur pada agar darah. Nathan Membaca di Flickr Nathan R. di twitter [CC BY 2.0 (https://creativecommons.org/licenses/by/2.0)], melalui Wikimedia Commons
Telah disebutkan bahwa agar darah memiliki karakteristik sebagai media yang diperkaya, diferensial dan non-selektif. Dasar untuk masing-masing properti ini dijelaskan di bawah ini.
Agar darah merupakan media yang diperkaya karena mengandung 5-10% darah pada basis agar sebagai bahan tambahan utamanya. Kedua senyawa tersebut mengandung banyak nutrisi dan sifat ini memungkinkan sebagian besar bakteri yang dapat dibudidayakan untuk tumbuh di dalamnya.
Pertumbuhan itu terjadi tanpa batasan; untuk alasan ini adalah non-selektif. Namun, jika senyawa ditambahkan ke media ini yang mencegah pertumbuhan beberapa mikroorganisme dan mendukung yang lain, itu menjadi selektif. Ini terjadi jika jenis antibiotik atau antijamur tertentu ditambahkan.
Demikian pula, agar darah adalah media diferensial, karena memungkinkan kita untuk membedakan 3 jenis bakteri: beta-hemolitik, alfa-hemolitik dan gamma-hemolitik.
Beta-hemolitik adalah mereka yang memiliki kemampuan untuk sepenuhnya melisiskan atau menghancurkan sel darah merah , membentuk lingkaran halo yang jelas di sekitar koloni, oleh karena itu mereka menghasilkan atau -hemolisis dan mikroorganisme disebut -hemolitik .
Contoh bakteri -hemolitik adalah Streptococcus pyogenes dan Streptococcus agalactiae.
Alfa-hemolitik adalah mereka yang melakukan hemolisis parsial, di mana hemoglobin dioksidasi menjadi methemoglobin, menghasilkan warna kehijauan di sekitar koloni. Fenomena ini dikenal sebagai atau -hemolisis dan bakteri diklasifikasikan sebagai -hemolitik.
Contoh bakteri -hemolitik adalah Streptococcus pneumoniae dan Streptococcus dari kelompok viridans.
Akhirnya, ada yang disebut bakteri gamma-hemolitik atau non-hemolitik. Ini tumbuh di agar tanpa menghasilkan perubahan di atasnya, efek yang dikenal sebagai -hemolisis, dan mikroorganisme adalah -hemolitik.
Contoh bakteri -hemolitik: beberapa strain Streptococcus grup D ( Streptococcus bovis dan Enterococcus faecalis ).
Kegunaan
Media kultur agar darah adalah salah satu yang paling umum digunakan di laboratorium mikrobiologi.
Di antara mikroorganisme yang mampu tumbuh dalam media agar darah adalah: aerobik ketat, fakultatif, mikroaerofilik, anaerobik, bakteri Gram positif atau Gram negatif, bakteri yang tumbuh cepat atau lambat.
Beberapa bakteri rewel atau rewel nutrisi juga tumbuh, serta jamur dan ragi. Demikian juga, berguna untuk melakukan subkultur atau mengaktifkan kembali galur yang secara metabolik sangat lemah.
Namun, pilihan golongan darah dan agar dasar akan bervariasi tergantung pada kemungkinan mikroorganisme yang dicurigai pulih dan penggunaan pelat yang akan digunakan (kultur atau antibiogram).
Pilihan golongan darah
Darahnya bisa domba, kelinci, kuda, atau manusia.
Yang paling direkomendasikan adalah darah domba, dengan beberapa pengecualian. Misalnya, untuk mengisolasi spesies Haemophilus, di mana darah yang direkomendasikan adalah darah kuda atau kelinci, karena darah domba mengandung enzim yang menghambat faktor V.
Yang paling tidak direkomendasikan adalah manusia, namun paling banyak digunakan, mungkin karena paling mudah didapat.
Darah harus didefibrinasi, diperoleh tanpa bahan tambahan apapun dan dari hewan yang sehat. Untuk penggunaan darah manusia, beberapa faktor harus diperhitungkan:
Jika darah berasal dari individu yang pernah mengalami infeksi bakteri, mereka akan memiliki antibodi spesifik. Dalam kondisi ini pertumbuhan beberapa bakteri kemungkinan akan terhambat .
Jika diperoleh dari bank darah, mengandung sitrat dan bakteri tertentu mungkin tidak tumbuh di hadapannya. Di sisi lain, jika darah berasal dari pasien yang mengonsumsi antibiotik, pertumbuhan bakteri yang rentan dapat dihambat.
Dan jika darahnya berasal dari penderita diabetes, kelebihan glukosa mengganggu perkembangan pola hemolisis yang tepat.
Pilihan jenis agar-agar dasar
Basis agar yang digunakan untuk pembuatan agar darah bisa sangat luas. Ini termasuk: Nutrient Agar, Brain Heart Infusion Agar, Trypticase Soy Agar, Müeller Hinton Agar, Thayer Martin Agar, Columbia Agar, Brucella Agar, Campylobacter Agar, dll.
Kegunaan agar darah menurut media dasar yang digunakan untuk pembuatannya
agar nutrisi
Basis ini paling sedikit digunakan, karena di atasnya sebagian besar bakteri yang tidak menuntut akan tumbuh, seperti basil enterik, Pseudomonas sp , S. aureus, Bacillus sp, dan lain-lain. Tidak dianjurkan untuk mengisolasi Streptococcus.
Agar Infus Jantung Otak (BHI)
Ini adalah salah satu yang paling banyak digunakan sebagai dasar untuk agar darah, karena memiliki nutrisi yang diperlukan untuk pertumbuhan sebagian besar bakteri, termasuk Streptococcus sp dan bakteri lain yang menuntut. Meskipun tidak cocok untuk mengamati pola hemolisis.
Darah domba umumnya digunakan dengan bahan dasar ini .
Varian agar darah juga dapat dibuat, di mana senyawa lain ditambahkan untuk mengisolasi mikroorganisme tertentu. Misalnya, Brain Heart Infusion Agar yang dilengkapi dengan darah kelinci, sistin, dan glukosa dapat digunakan untuk mengisolasi Francisella tularensis.
Sedangkan dengan sistin tellurit berguna untuk isolasi Corynebacterium diphteriae. Darah manusia atau domba dapat digunakan.
Dengan beta-hemolisis pertama akan terlihat sebagai halo yang sempit, sedangkan dengan yang kedua halo akan jauh lebih luas.
Demikian pula, basa ini bersama dengan bacitracin, pati jagung, darah kuda dan suplemen pengayaan lainnya (IsoVitaleX), digunakan untuk isolasi genus Haemophilus sp dari sampel pernapasan.
Juga, jika kombinasi antibiotik kloramfenikol – gentamisin atau penisilin – streptomisin dengan darah kuda ditambahkan, ini sangat ideal untuk isolasi jamur patogen yang menuntut, bahkan dengan hasil yang lebih tinggi daripada agar glukosa Sabouraud. Ini sangat berguna dalam isolasi Histoplasma capsulatum .
agar kedelai trypticase
Basis ini paling direkomendasikan untuk pengamatan pola hemolisis yang lebih baik dan untuk melakukan tes diagnostik seperti optoquine taksa dan bacitracin. Ini adalah agar darah klasik yang digunakan secara rutin.
Dengan bahan dasar ini, Anda juga dapat menyiapkan agar darah khusus untuk Corynebacterium diphteriae, dengan sistin telurit dan darah domba .
Demikian pula, kombinasi agar-agar ini dengan darah domba, ditambah kanamisin-vankomisin sangat ideal untuk pertumbuhan bakteri anaerob, terutama Bacteroides sp.
Müeller Hinton agar
Basis yang dilengkapi dengan darah ini digunakan untuk melakukan antibiogram mikroorganisme rewel, seperti Streptococcus sp.
Hal ini juga berguna untuk isolasi bakteri seperti Legionella pneumophila.
Thayer Martin Agar
Media ini ideal sebagai bahan dasar agar darah bila diduga genus Neisseria, terutama Neisseria meningitidis , karena N. gonorrhoeae tidak tumbuh pada agar darah.
Hal ini juga digunakan untuk menguji kerentanan terhadap Neisseria meningitidis .
agar Kolombia
Basis ini sangat baik untuk menyemai spesimen biopsi lambung untuk Helicobacter pylori .
Media dibuat dengan menambahkan 7% darah domba yang didefibrinasi dengan antibiotik (vankomisin, trimetoprim, amfoterisin B dan cefsulodin) untuk membatasi pertumbuhan jenis bakteri lain yang mungkin ada.
Basa yang sama ini ditambah dengan darah manusia atau domba, asam nalidiksat dan colistin berguna untuk mengisolasi Gardnerella vaginalis. Ini juga ideal untuk mengevaluasi kerentanan antimikroba terhadap antibiotik dari mikroorganisme yang sama.
Selain itu, digunakan untuk persiapan agar darah untuk budidaya anaerob, menambahkan aminoglikosida dan vankomisin.
Basis ini memungkinkan pola hemolisis diamati dengan benar.
Brucella agar
Media ini digunakan sebagai dasar agar darah bersama dengan penambahan vitamin K sangat ideal untuk budidaya bakteri anaerob. Dalam hal ini, penggunaan darah domba dianjurkan.
Agar Campylobacter
Agar Campylobacter yang dilengkapi dengan 5% darah domba dan 5 antibiotik (sefalotin, amfoterisin B, trimetoprim, polimiksin B dan vankomisin), merupakan media yang digunakan untuk mengisolasi Campylobacter jejuni dalam sampel tinja.
Persiapan
Setiap rumah komersial membawa instruksi untuk menyiapkan satu liter media kultur di bagian belakang wadah. Perhitungan yang sesuai dapat dibuat untuk menyiapkan jumlah yang diinginkan, tergantung pada agar-agar dasar yang dipilih.
Timbang dan larutkan
Base agar didehidrasi (bubuk), oleh karena itu harus dilarutkan dalam air suling yang disesuaikan dengan pH 7,3.
Jumlah yang ditunjukkan oleh agar-agar dasar yang dipilih ditimbang dan dilarutkan dalam jumlah air yang sesuai dalam labu, kemudian dipanaskan dengan api sedang dan dicampur dengan gerakan memutar sampai semua bubuk larut.
Mensterilkan
Setelah larut, sterilkan dalam autoklaf pada suhu 121°C selama 20 menit.
Agregat darah
Saat meninggalkan autoklaf, labu dibiarkan mendingin sampai suhu berosilasi antara 40 hingga 50 ° C; Ini adalah suhu yang didukung oleh kulit manusia dan pada saat yang sama agar-agar belum mengeras.
Untuk melakukan ini, vial disentuh dengan tangan dan jika panasnya dapat ditoleransi, itu adalah suhu yang ideal untuk menambahkan jumlah darah defibrilasi yang sesuai (50 ml untuk setiap liter agar). Aduk perlahan agar homogen.
Tahap agregasi darah sangat penting, karena jika dilakukan pada medium yang sangat panas sel darah merah akan pecah dan medium tidak akan digunakan untuk mengamati hemolisis.
Jika ditambahkan terlalu dingin, itu akan menggumpal dan permukaan media tidak akan halus untuk memungkinkan penilaian yang tepat.
Tuang ke dalam cawan petri
Sajikan dalam cawan petri steril segera setelah menghomogenkan darah. Kurang lebih 20 ml dituangkan ke dalam setiap cawan petri. Prosedur ini dilakukan di dalam laminar flow hood atau di dekat burner.
Saat menyajikan agar darah dalam cawan Petri, tidak boleh ada gelembung udara yang tertinggal di permukaan cawan. Jika ini terjadi, nyala api pembakar Bunsen dilewatkan dengan cepat di atas piring untuk menghilangkannya.
Pelat dibiarkan memadat dan disimpan dalam lemari es (2-8 ° C) terbalik sampai digunakan. Sebelum menggunakan pelat agar darah, mereka harus ditempa (dibiarkan mencapai suhu kamar) untuk dapat diunggulkan.
Piring yang disiapkan bertahan sekitar 1 minggu.
Referensi
- Bayona M. Kondisi mikrobiologi untuk kultur Helicobacter pylori . Pdt Kol Gastroenterol 2013; 28 (2): 94-99
- García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Mikrobiologi klinik praktis. Universitas Cadiz, edisi ke-2. Layanan Publikasi UCA.
- “Agar darah.” Wikipedia, Ensiklopedia Bebas . 10 Des 2018, 14:55 UTC. 27 Des 2018, 01:49 en.wikipedia.org.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosa Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 edisi Argentina. Editorial Panamericana SA
- Pusat Diagnostik Veteriner Laboratorium CEDIVET. Guatemala. Tersedia di: trensa.com.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosa Mikrobiologi. (edisi ke-5). Argentina, Editorial Panamericana SA
