agar coklat adalah media kultur padat, diperkaya, non – selektif dan non – diferensial. Ini digunakan terutama untuk isolasi mikroorganisme yang menuntut dari sudut pandang nutrisi, meskipun semua jenis bakteri dapat tumbuh di dalamnya .
Itulah sebabnya kegunaannya meningkat terutama dalam penyemaian sampel yang biasanya steril, seperti CSF dan cairan sendi. Meskipun juga termasuk dalam cara yang dipilih untuk menabur sampel polimikroba, tetapi dalam kasus ini penambahan antibiotik yang menghambat flora yang menyertai diperlukan.
Agar coklat dengan pertumbuhan bakteri
Medium ini memiliki karakteristik warna coklat yang sangat mirip dengan coklat, karena itulah namanya. Persiapannya sangat mirip dengan agar darah , hanya saja dalam hal ini darah harus dipanaskan agar sel darah merah dapat terurai.
Persiapannya, seperti agar darah, sangat halus, karena mudah terkontaminasi. Oleh karena itu, banyak laboratorium lebih memilih untuk memperoleh media ini yang telah disiapkan oleh perusahaan komersial yang menjamin kualitasnya.
Indeks artikel
Dasar
Media ini terdiri dari dasar agar yang kaya nutrisi dan darah yang dihangatkan. Hemolisis sel darah merah menyediakan faktor X (hemin) dan faktor V (NAD), yang diperlukan untuk pertumbuhan beberapa mikroorganisme, seperti genus Haemophilus . Hal ini juga sangat berguna untuk isolasi Neisserias sp.
Seperti agar darah, media yang berbeda dapat digunakan sebagai agar dasar tergantung pada kebutuhan. Di antara media yang digunakan adalah brain heart infusion dan trypticase soy agar, meskipun yang paling direkomendasikan adalah agar Columbia, Müeller Hinton, agar GC dan agar Thayer Martin.
Beberapa varian agar coklat termasuk suplemen yang diperkaya yang tersedia secara komersial yang disebut Isovitalex atau Polivitex.
Suplemen ini mengandung vitamin B 12 , L-glutamine, adenin, guanin hidroklorida, asam p-aminobenzoic, nicotinamide adenin dinukleotida (NAD), tiamin pirofosfat, nitrat besi, tiamin hidroklorida, sistein hidroklorida, L-sistin, dan glukosa.
Penting untuk dicatat bahwa agar coklat lebih diperkaya daripada agar darah, tetapi tidak memungkinkan pengamatan pola hemolisis.
Kegunaan
Sumber: pixnio.com. Penulis: Pete Seidel, Amanda Moore, MT, Todd Parker, PhD, Audra Marsh, USCDCP
Agar-agar cokelat disiapkan dengan agar-agar Columbia
Media ini mengandung cerna pankreas dari kasein dan hati, cerna peptik daging, natrium klorida, agar-agar, ekstrak ragi dan pati jagung. Ini juga kaya akan vitamin, mineral, dan asam amino esensial.
Basis darah yang dipanaskan ini sangat ideal untuk isolasi bakteri dari genus Neisseria. Di sisi lain, jika suplemen untuk Brucella ditambahkan ke media, mikroorganisme tersebut dapat diisolasi. Hasil ditingkatkan menggunakan darah kuda.
Agar coklat disiapkan dengan agar dasar GC (untuk gonokokus)
Media ini mengandung pepton, pati jagung, buffer monobasic dan dibasic, natrium klorida, dan agar-agar.
Sebagian besar bentuk agar coklat yang disiapkan secara komersial datang dengan basis ini dan tidak mengandung darah yang dipanaskan, melainkan campuran sintetis hemin dan suplemen kimia faktor pertumbuhan, vitamin, mineral, asam amino, faktor V, dan glukosa.
Agar coklat disiapkan dengan agar Müeller Hinton
Ini digunakan untuk menguji kerentanan antimikroba dari mikroorganisme rewel, seperti Streptococcus pneumoniae menggunakan 5% darah domba yang dipanaskan.
Hal ini juga digunakan untuk isolasi utama Neisserias dan Haemophilus, tetapi dalam kasus tertentu dari isolasi Haemophilus , penggunaan darah kuda lebih disukai, karena merupakan sumber yang kaya faktor X dan V.
Sebaliknya, jika sampel yang akan ditabur berasal dari daerah yang tidak steril, maka dianjurkan penambahan antibiotik untuk menghambat flora normal daerah tersebut.
Contoh untuk sampel saluran pernapasan yang diduga ada bakteri genus Haemophilus , bacitracin digunakan untuk menghambat pertumbuhan Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus dan saprofit Neisserias.
Dalam kasus sampel kanker genital, di mana Haemophilus ducreyi dicurigai , agar cokelat yang disiapkan sebagai berikut telah berhasil digunakan: Müeller – Hinton agar dengan 5% darah kuda yang dicokelat, 1% pengayaan Isovitalex dan 3 g / ml vankomisin.
Agar-agar cokelat disiapkan dengan agar-agar Thayer Martin
Media ini khusus untuk isolasi Neisseria gonorrhoeae . Itu harus mengandung antibiotik untuk menghambat flora yang menyertainya. Darah domba digunakan.
Persiapan
Anda harus melihat indikasi persiapan agar-agar dasar yang akan digunakan. Mereka ditemukan di bagian belakang wadah media dehidrasi. Mereka umumnya menjelaskan berapa banyak Anda harus menimbang untuk menyiapkan satu liter media kultur.
Di laboratorium, jumlah tepat yang dibutuhkan bisa disiapkan, bisa lebih atau kurang dari satu liter.
Perhitungan
Aturan tiga digunakan untuk menghitung berapa berat untuk membuat volume yang diinginkan. Contoh:
Jika untuk 1 liter diperlukan timbang 40 g dan laboratorium membutuhkan 800 ml, dikatakan:
1000 ml ——————————— 40 gr
800 ml ————————————– X
Rumusnya akan menjadi sebagai berikut:
X = 32 gr (jumlah yang akan ditimbang untuk 800 ml).
Timbang dan larutkan
Jumlah yang diperlukan ditimbang dan ditempatkan dalam labu dengan air.
Panaskan di atas api sedang dan aduk perlahan dengan gerakan memutar sampai media dehidrasi benar-benar larut, biarkan mendidih selama 1 menit.
Mensterilkan
Labu diautoklaf untuk mensterilkan media pada 121 ° C selama 20 menit.
Agregat darah
Saat meninggalkan autoklaf, didiamkan sampai suhu medium kira-kira antara 56 sampai 70 ° C untuk menempatkan darah dan mengaduk sampai medium berubah warna menjadi coklat.
Jika Anda menambahkan suplemen, inilah saatnya untuk melakukannya. Selanjutnya campur dan sajikan 20 ml untuk setiap cawan Petri steril.
Seluruh prosedur harus dilakukan dalam tudung aliran laminar atau di sekitar pembakar Bunsen.
Diamkan sampai mengeras dan simpan terbalik di lemari es.
Cara lain untuk menyiapkan agar coklat tanpa menggunakan darah
Media dasar dibuat seperti dijelaskan di atas, hemoglobin terdehidrasi yang diperoleh secara komersial dilarutkan dan disterilkan dalam autoklaf.
Kedua larutan dibiarkan dingin hingga 50 ° C, digabungkan dan suplemen ditambahkan. Campur dalam kondisi aseptik dan kemudian sajikan dalam cawan Petri steril.
QA
Adalah penting bahwa darah ditempatkan pada suhu yang ditunjukkan, karena merupakan suhu yang ideal untuk melisiskan sel darah merah dan pada saat yang sama mempertahankan faktor V, yang peka terhadap suhu.
Tidak ada gelembung yang tertinggal di permukaan agar-agar. Dari setiap batch 100 piring, satu atau dua piring harus diinkubasi dalam oven pada suhu 37 ° C selama 24 jam untuk memverifikasi sterilitasnya.
Untuk hasil terbaik, agar cokelat harus digunakan segera setelah persiapan.
Strain bakteri kontrol harus disimpan di laboratorium untuk mengevaluasi kemanjuran media segar untuk pertumbuhan mikroorganisme rewel utama yang penting secara klinis.
Referensi
- García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Mikrobiologi klinik praktis. Universitas Cadiz, edisi ke-2. Layanan Publikasi UCA.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosa Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 edisi Argentina. Editorial Panamericana SA
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosa Mikrobiologi. (edisi ke-5). Argentina, Editorial Panamericana SA
- Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. Kelayakan menggunakan media kultur dasar GC-Biocen Agar di Laboratorium Mikrobiologi. Rev Cubana Med Trop , 2004; 56 (3): 237-238. Tersedia di: scielo.sld.
- Kontributor Wikipedia. agar-agar coklat. Wikipedia, ensiklopedia gratis. 17 Desember 2018, 19:54 UTC. Tersedia di: en.wikipedia.org.
