Mei Grünwald-Giemsa atau Pappenheim noda adalah pewarnaan teknik diferensial yang campuran Giemsa dan Mei Grünwald reagen. Ini digunakan untuk diferensiasi sel darah normal dan abnormal dalam darah tepi dan apusan sumsum tulang, serta untuk pewarnaan bagian histologis dan sampel sitologi.
Kedua reagen —Giemsa dan May Grünwald—berasal dari pewarnaan tipe Romanowsky, teknik yang didasarkan pada kombinasi pewarnaan asam dan basa.
Apusan menunjukkan neutrofil tersegmentasi dan miliosit dalam kasus Leukemia Myeloid Kronis, diwarnai dengan pewarnaan May Grünwald Giemsa. Dr Ramon Simon-Lopez (https://es.m.wikipedia.org/wiki/Archivo:LMC-1.JPG) melalui Wikipedia.org.
Giemsa meningkatkan teknik dengan menstabilkan campuran eosin, metilen biru dan turunannya, dengan gliserol. Sebaliknya, May Grünwald menggunakan eosin dan metilen biru, menggunakan metanol sebagai pelarut. Kombinasi strategis ini telah membuahkan hasil yang sangat baik.
Meskipun dalam hal pengamatan morfologi sel ia bertindak dengan cara yang mirip dengan pewarnaan Giemsa dan Wright, teknik ini meningkatkan yang sebelumnya dengan menyempurnakan pewarnaan parasit yang menyebabkan malaria, penyakit Chagas, leishmaniasis dan trikomoniasis.
Selain itu, telah terbukti menjadi teknik yang sangat berguna untuk studi sitologi cairan sperma. Ini telah menonjol tidak hanya dengan menunjukkan karakteristik morfologi sperma, tetapi juga dengan memungkinkan untuk membedakan leukosit, sel epitel, dan sel spermatogenesis dengan sangat efisien .
Indeks artikel
Dasar
Teknik ini mengikuti dasar pewarnaan Romanowsky, di mana pewarna asam memiliki afinitas selektif untuk komponen seluler dasar dan komponen asam menarik pewarna dasar.
Dijelaskan dengan cara lain, baik struktur sel maupun pewarna memiliki muatan listrik positif atau negatif; muatan yang sejenis tolak menolak dan muatan yang berbeda tarik menarik.
Misalnya, pewarna dasar seperti metilen biru bermuatan positif dan tertarik ke struktur bermuatan negatif. Itulah sebabnya pewarna ini menodai inti yang kaya akan DNA dan RNA yang memiliki gugus fosfat bermuatan negatif.
Butiran basofil tersegmentasi dan sitoplasma sel darah putih mononuklear yang mengandung RNA juga diwarnai.
Demikian juga, pewarna asam membawa muatan negatif, itulah sebabnya mengapa ia mengikat struktur bermuatan positif seperti eritrosit dan butiran eosinofil tersegmentasi. Adapun butiran neutrofil tersegmentasi, ini memperbaiki kedua pewarna.
Berbagai pewarna
Dalam teknik ini, kombinasi reaksi hidup berdampingan antara pewarna ortokromatik dan metakromatik. Ortokromatik (eosin dan metilen biru) mengikat struktur seluler yang terkait dan memberikan warna stabil yang tidak bervariasi.
Di sisi lain, metakromatik (turunan dari metilen biru azure A dan azure B), memvariasikan warna aslinya setelah melekat pada struktur tertentu, dan bahkan mungkin ada berbagai corak.
Akhirnya, langkah yang dilakukan oleh larutan May Grünwald membutuhkan adanya air, karena tanpanya pewarna akan menembus struktur tetapi tidak akan mengeras. Agar ini terjadi, pewarna harus menjadi polar atau terionisasi, dan dengan demikian dapat mengendap dan mengikat struktur terkait.
Teknik
bahan
– Slide mikroskop.
– Jembatan mewarnai.
– Solusi Mei-Grünwald.
– Pewarna Giemsa.
– Air sulingan.
Mungkin larutan pekat pewarna Grünwald
0,25 g eosin-metilen biru (noda menurut May Grünwald) harus ditimbang dan dilarutkan dalam 100 ml metanol. Kemudian preparat tersebut dicampur selama 1 jam dan didiamkan selama 24 jam. Pada akhir waktu, itu disaring.
Untuk menerapkan teknik ini, pewarna May Grünwald harus diencerkan sebagai berikut: untuk 200 ml pewarna encer, ukur 30 ml larutan pekat, tambahkan 20 ml larutan buffer dan 150 ml air suling disesuaikan dengan pH7,2-7,3 . Kemudian dicampur dan disaring.
Konsentrat pewarna Giemsa
0,5 g biru-eosin-metilen biru (noda menurut Giemsa) harus ditimbang, dilarutkan dalam 50 ml metanol dan 50 ml gliserin ditambahkan ke dalam campuran.
Untuk melakukan teknik tersebut diencerkan 1:10 dengan larutan buffer dan didiamkan selama 10 menit. Itu bisa disaring jika perlu.
Pembuatan larutan buffer pada pH 7.2
Mereka harus ditimbang:
– 40 mg kalium di-hidrogen fosfat (KH2PO4).
– 151 mg di-natrium hidrogen fosfat 12-hidrat (Na2HPO4).
Kedua senyawa tersebut dilarutkan dalam 100 ml air.
Prosedur pewarnaan noda darah atau sumsum tulang
Ada dua modalitas: yang klasik dan yang cepat.
Modus klasik
- Tutup apusan selama 2 sampai 3 menit dengan larutan May-Grünwald yang diencerkan.
- Cuci dengan air suling buffer untuk menghilangkan larutan sebelumnya.
- Tutup dengan larutan pencuci buffer yang sama dan biarkan selama 1 menit. Idenya adalah bahwa pewarna sebelumnya melekat pada struktur dan, pada saat yang sama, sel-sel terhidrasi.
- Tambahkan 12 tetes tingtur Giemsa encer ke dalam air buffer dan tiup untuk mencampur dan menghomogenkan. Biarkan istirahat selama 15 sampai 20 menit.
- Cuci smear dengan air suling buffer dan tempat untuk udara kering.
- Fokus dan amati sel darah yang diwarnai di bawah mikroskop cahaya menggunakan objektif 40X. Jika perlu, 100X dapat digunakan.
Modus cepat
- Tutup apusan dengan pewarna May Grünwald yang diencerkan selama 1 menit.
- Cuci dengan air suling buffer.
- Tutup dengan air buffer dan diamkan selama 1 menit.
- Tambahkan pewarna Giemsa yang sudah diencerkan dan biarkan selama 5 menit.
- Cuci dengan air suling buffer dan biarkan kering.
Teknik yang dijelaskan di sini adalah pedoman, tetapi harus diperhitungkan bahwa prosedur dan waktu pewarnaan bervariasi menurut perusahaan komersial yang mendistribusikan reagen. Dianjurkan untuk mengikuti langkah-langkah ketat yang ditunjukkan oleh setiap rumah komersial.
Teknik pewarnaan apusan cairan sperma
1- Tutup apusan dengan lapisan tipis larutan May Grünwald selama 4 menit.
2- Hapus pewarna dan cuci dengan air suling.
3- Tempatkan lapisan Giemsa yang diencerkan (1:10) dalam air suling selama 15 menit.
4- Hapus pewarna dan cuci dengan air suling.
5- Biarkan kering dan amati di bawah mikroskop.
Warna yang diharapkan dengan pewarnaan May Grünwald Giemsa
Spesifikasi Penting
Teknik ini mensyaratkan bahwa reagen dan larutan pencuci memiliki pH yang disesuaikan dengan 7,2-7,3, sehingga afinitas pewarna untuk struktur sel tidak terdistorsi dan warna akhir yang diharapkan tidak bervariasi.
Kegunaan
Teknik ini digunakan oleh laboratorium klinis untuk menodai darah tepi dan apusan sumsum tulang, potongan jaringan, dan sitologi.
Dalam bidang hematologi, teknik ini sangat penting dalam mempelajari kelainan sel dalam hal bentuk, ukuran dan jumlah. Ini adalah alat yang sangat berharga untuk diagnosis penyakit tertentu, seperti leukemia dan anemia.
Selain itu, sangat berguna ketika mencari parasit di daerah hematologi ( Plasmodium sp dan Trypanosoma cruzi ) atau histologi ( Leishmanias sp ).
Sitologi vagina
Mengenai sitologi vagina, teknik ini sangat menguntungkan untuk pengamatan Trichomonas vaginalis. Ini merupakan temuan penting, karena kehadirannya mensimulasikan gambaran karsinoma in situ yang kemudian menghilang ketika parasit dieliminasi.
sampel sperma
Ini telah menjadi alat yang ideal untuk mempelajari sampel sperma, karena memberikan informasi berharga tentang kualitas sperma.
Data yang ditawarkan terutama berkaitan dengan jumlah dan morfologi, serta dengan sel-sel yang mungkin ada dan yang sangat penting, seperti sel germinal, leukosit, dan sel epitel.
Dengan analisis ini dimungkinkan untuk menggambarkan kelainan yang diamati pada sperma di kepala, leher, bagian tengah dan bagian utama.
Selain itu, mereka juga dapat membantu untuk menunjukkan kasus hemospermia (adanya sel darah merah dalam air mani) dan leukospermia atau piospermia (peningkatan jumlah leukosit dalam air mani).
Referensi
- Costamagna S, Prado M. Validasi tes segar, Mei Grünwald-Giemsa dan pewarnaan Gram dan media kultur untuk diagnosis Trichomonas vaginalis . parasit. 2001; 25 (1-2): 60-64. Tersedia dalam: scielo.
- Laboratorium Merck KGaA. Mei Grünwald eosin metilen biru untuk mikroskop.
- “Noda Mei-Grünwald-Giemsa.” Wikipedia, Ensiklopedia Bebas . 15 Nov 2018, 14:37 UTC. 8 Jan 2019, 04:29: en.wikipedia.org
- Laboratorium Panreak Kimia Kaca. Reagen untuk teknik histologis, hematologi dan mikrobiologi. Tersedia di: glasschemicals.com
- Retamales E, Manzo V. Rekomendasi untuk pewarnaan apusan darah untuk membaca hemogram. Laboratorium Biomedis Nasional dan Referensi. Institut Kesehatan Masyarakat Chili.
- Sarabia L. Spermiogram menurut kriteria WHO. Program Anatomi dan Biologi Perkembangan. Sekolah Kedokteran. Universitas Chili. Tersedia di: pp.centramerica.com
