pewarnaan negatif adalah metode pewarnaan khusus untuk menyoroti kehadiran kapsul di beberapa mikroorganisme , terutama Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae dan Cryptococcus neoformans-, dari spesimen klinis atau kultur murni.
Sampel langsung yang biasa digunakan untuk pewarnaan negatif adalah cairan serebrospinal . Teknik ini merupakan alternatif cepat untuk diagnosis dugaan meningitis, terutama Cryptococcus neoformans .
A. Karang gigi yang diwarnai dengan tinta India, B. Cryptococcus neoformans var gatti dienkapsulasi dengan lemah seperti yang terjadi di alam, menggunakan nigrosin. C. Cryptococcus neoformans var gatti dengan kapsul tebal seperti yang ditemukan dalam bentuk parasit, menggunakan nigrosin. D. Cryptococcus neoformans dengan tinta India yang sedikit diencerkan. Gisell Quinde [CC BY-SA 4.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0)], dari Wikimedia Commons / CDC [Domain publik atau domain publik], melalui Wikimedia Commons / Kredit Foto: Penyedia Konten ( s): CDC / dr. Leanor Haley [Domain publik], melalui Wikimedia Commons
Demikian juga, pewarnaan ini dapat diterapkan pada dahak dan cairan steril pada umumnya, serta pada galur yang diperoleh dari biakan murni muda. Teknik ini menggunakan tinta nigrosine atau India untuk pelaksanaannya; Oleh karena itu, ini adalah metodologi yang sangat sederhana dan murah untuk diterapkan yang memberikan informasi nilai diagnostik yang besar dalam waktu singkat.
Dalam pengertian ini, laboratorium mana pun dapat melakukan pewarnaan ini. Tentu saja, laboratorium harus memiliki personel yang kompeten yang mampu mengenali ragi Cryptococcus neoformans yang diisolasi atau yang sedang berkembang dan membedakannya dari leukosit dan artefak yang mungkin ada dalam sampel.
Indeks artikel
Dasar
Tinta nigrosine dan India bekerja dengan cara yang sama; Untuk alasan ini, salah satu dari kedua zat tersebut dapat digunakan secara bergantian.
Teknik ini disebut pewarnaan negatif karena tindakannya bertentangan dengan teknik pewarnaan lainnya. Dalam hal ini, apa yang tetap tidak ternoda adalah struktur yang sedang dicari atau yang ingin dilihat seseorang; yaitu mikroorganisme.
Oleh karena itu, pewarnaan didasarkan pada pewarnaan bagian bawah apusan yang berwarna gelap. Dalam skenario ini, struktur berkapsul akan menonjol dalam warna terang atau tidak berwarna.
Ragi umumnya refringen, dikelilingi oleh halo bening yang sesuai dengan kapsul. Hal ini terjadi karena tinta India dan nigrosin adalah zat yang tidak dapat menembus polisakarida yang membentuk kapsul mikroorganisme hidup.
Perlu dicatat bahwa struktur lain yang mungkin ada dalam sampel langsung, seperti leukosit atau sel darah merah, juga tidak menembus.
Nah, jika mikroorganisme mati, pewarna dapat menembus ke dalamnya, sehingga pewarnaan ini juga berguna untuk mengevaluasi viabilitas mikroorganisme.
Teknik
bahan
Nigrosin
Nigrosine berutang namanya untuk warna hitamnya. Ini adalah zat sintetis yang diperoleh dengan memanaskan campuran senyawa organik —seperti nitrobenzin, anilin, dan anilin hidroklorit—, menggunakan katalis (besi atau tembaga) dalam reaksi tersebut.
tinta cina
Tinta Cina adalah zat yang digunakan terutama oleh orang Asia untuk menulis, membuat karya seni, dan lukisan monokromatik. Ini sangat populer dalam budaya Cina.
Itu diperoleh dari tinta cumi yang dicampur dengan arang bubuk, produk dari pembakaran pohon resin rendah.
Dimungkinkan juga untuk menyiapkannya dari jelaga dari pembakaran hidrokarbon (minyak nabati), bersama dengan gelatin protein yang memberikan konsistensi yang tepat untuk menghindari pengendapan partikel karbon.
Spesifikasi untuk pengambilan sampel
– Tidak perlu puasa.
– Sampel cairan serebrospinal, sputum, atau cairan steril harus mengandung setidaknya 1 ml volume dan harus segera dipindahkan ke laboratorium pada suhu kamar.
– Sampel cairan CSF dan cairan steril harus diambil oleh dokter spesialis.
– Ini juga bisa menjadi kultur murni dari galur mencurigakan yang terkait dengan patogen yang disebutkan di atas.
Eksekusi teknik dengan sampel langsung
– Sampel harus disentrifugasi, kemudian supernatannya dibuang dan diambil peletnya.
– Setetes bahan yang disentrifugasi (sedimen) dan setetes tinta India atau nigrosin ditempatkan pada slide mikroskop yang bersih.
– Itu harus dicampur dengan baik dan ditutup dengan lembaran kaca penutup, membiarkan tetesan menyebar sebagai film tipis tanpa melewati tepinya.
– Selanjutnya preparat dipasang pada mikroskop.
– Jika sediaan terlalu gelap, dapat diencerkan dengan air.
Eksekusi teknik dengan strain dari budaya
– Sebagian kecil dari kultur muda diambil dengan jarum penyemaian dan dilarutkan dalam setetes tinta India yang sebelumnya ditempatkan pada slide bersih.
– Sebuah kaca penutup ditempatkan di atas.
– Diamati di mikroskop pada 10X dan kemudian pada 40X.
Anda juga dapat melarutkan sebagian koloni dalam air suling, dan dari sana ambil setetes dan campur dengan tinta India. Dengan cara ini, preparasi tidak akan terlalu kental, sehingga memungkinkan untuk mengamati struktur secara terpisah; jika ada orang banyak, itu tidak akan terlihat dengan baik.
Metodologi lainnya adalah sebagai berikut:
– Tempatkan setetes kultur suspensi di salah satu ujung slide.
– Tempatkan setetes nigrosine di ujung yang sama dan aduk.
– Dengan bantuan slide lain, sebarkan sampel seolah-olah mengambil apusan hematologi.
– Biarkan kering dan amati di bawah mikroskop.
Pengamatan mikroskop
Anda harus terlebih dahulu fokus dengan tujuan 10X untuk memiliki pandangan luas ke lapangan. Selanjutnya, harus dicari jika ada ruang yang jelas; jika ada, fokus 40X untuk melihat detailnya.
Keuntungan
– Sangat mudah untuk dieksekusi.
– Ini adalah teknik yang murah.
– Metode ini tidak mengharuskan apusan difiksasi dengan panas atau dengan bahan kimia; oleh karena itu, mikroorganisme diamati tanpa distorsi.
– Sediaan segar tidak perlu dikeringkan, sehingga dapat langsung diamati, memberikan hasil dengan cepat.
Kerugian
Setelah dirakit, persiapan segar harus segera diamati; jika dibiarkan kering tidak mungkin lagi untuk diamati dan yang baru harus dipasang.
Pewarnaan tisu dengan tinta India
Fungsi lain yang dapat dipenuhi oleh tinta India adalah di laboratorium patologi. Ini diterapkan pada sampel jaringan yang diekstraksi untuk menandai margin reseksi tumor.
Jaringan yang ditandai disemprot dengan asam asetat. Ini bertindak sebagai mordan dan mencegah tinta bocor saat jaringan menjalani pemrosesan rutin untuk persiapan biopsi.
Prosedurnya terdiri dari memandikan jaringan dalam alkohol dan xilena, dan kemudian merendamnya dalam lilin parafin. Penandaan ini memandu ahli patologi saat mengamati jaringan, menunjukkan di mana margin reseksi bedah atau tempat menarik lainnya berada.
Referensi
- “Nigrosina”. Wikipedia, Ensiklopedia Bebas . 11 Juli 2017, 22:46 UTC. 6 Jan 2019, 16:56: en.wikipedia.org
- “tinta Cina”. Wikipedia, Ensiklopedia Bebas . 1 Okt 2018, 03:08 UTC. 6 Jan 2019, 18:20: es.wikipedia.org/
- Silva L, Silva C, Fernández N, Bueno C, Torres J, Rico M, Macías J dan kolaborator. (2006). Personil Buruh dari komunitas otonom Extremadura. Agenda Khusus Jilid IV. Redaksi MAD. Sevilla-Spanyol, hal 211-212.
- Silva M, García M, Corrales J, Ponce E. (2006) Teknisi spesialis laboratorium, Layanan Kesehatan Galicia (SERGAS). Agenda mata pelajaran khusus volume 2. Editorial MAD. Sevilla-Spanyol, hal 79-80.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 edisi Argentina. Editorial Panamericana SA
