Ruang Neubauer: sejarah, karakteristik, kegunaan

Ruang Neubauer: sejarah, karakteristik, kegunaan

Ruang Neubauer , hematometer atau hemositometer, adalah instrumen laboratorium yang terdiri dari pelat kaca tebal khusus. Ruang ini digunakan untuk melakukan penghitungan beberapa jenis sel seperti sel darah merah, sel darah putih dan trombosit, meskipun dapat digunakan untuk menghitung spora, sperma, parasit, dll.

Ini memiliki karakteristik yang sangat aneh, karena terdiri dari 3 zona, satu zona pusat untuk penghitungan dan dua zona pendukung. Setiap ruang memiliki dua zona penghitungan atau graticules, satu di bagian atas dan satu di bagian bawah.

ruang Neubauer. Sumber: SantiBadia [CC BY-SA 4.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0)]. Gambar yang diedit.

Ini memiliki beberapa divisi dalam pola grid. Area penghitungan adalah kotak sedang yang ditemukan di 4 sudut kedua graticule, ditambah kotak tengah.

Perakitan kamera harus dilakukan dengan sangat hati-hati, karena detail apa pun memengaruhi jumlah sel. Ada banyak kesalahan yang bisa dilakukan, tetapi jika salah satunya terjadi, kamera harus dibongkar, dibersihkan, dan dipasang kembali. Kesalahan utama termasuk yang berikut:

Meluap atau kurang mengisi chamber, membiarkan chamber mengering, berusaha menghilangkan kelebihan cairan dengan kain kasa, memiringkan chamber saat mengangkutnya, mengisi chamber yang kotor atau basah, tidak mencampur pengenceran atau sampel dengan baik, antara lain. Semua kesalahan ini akan menghasilkan nilai yang tidak nyata.

Indeks artikel

Sejarah

Ruang Neubauer adalah instrumen presisi, dan proses pembuatannya menjalani kontrol kualitas yang ketat. Itu dibuat untuk penghitungan partikel atau unsur yang terbentuk secara presisi per mm 3 , seperti sel dalam berbagai cairan. Its halus grafis diukir dengan pensil berlian.

Karakteristik ruang Neubauer

Seluruh ruangan seukuran slide normal sehingga dapat ditempatkan di atas panggung mikroskop.

Kamar terdiri dari tiga permukaan persegi panjang pusat (a, b, c). Di zona “b” terletak zona R atau zona penghitungan, juga disebut retikulum. Satu di setiap sisi ruangan, dipisahkan oleh zona “d”.

Diagram grafis Kamar Neubauer. Sumber: Panduan Praktikum Hematologi. Sekolah Bioanalisis Universitas Carabobo, Venezuela.

Setiap graticule adalah area yang dipoles yang berisi area penghitungan yang diukir. Ini terdiri dari bujur sangkar dengan luas permukaan 9 mm 2 dan secara internal dibagi menjadi 9 bujur sangkar dengan luas permukaan masing-masing 1 mm 2 . Empat kotak sudut dibagi menjadi 16 kotak yang lebih kecil (luas 0,0625 mm 2 ).

Kisi-kisi ini dibentuk oleh serangkaian garis milimeter yang saling berpotongan, yang merupakan kisi-kisi yang digrafik sempurna yang dibatasi oleh pengukuran yang telah ditentukan. Garis-garis ini telah diukir dengan ujung berlian.

Retikel Neubauer yang ditingkatkan. Sumber: Panduan Praktis untuk Hematologi Sekolah Bioanalisis Universitas Carabobo, Venezuela.

Keempat sisi sesuai dengan area penghitungan. Di sisi atau sudut inilah sebagian besar sel (sel darah merah dan leukosit) dihitung, sedangkan trombosit dihitung di area tengah.

Area pusat memiliki lebih banyak bagian, terdiri dari persegi 1 mm 2 yang dibagi menjadi 25 kotak yang memiliki luas permukaan masing-masing 0,04 mm 2 . Ini pada gilirannya dibagi menjadi 16 grid dengan luas permukaan 0,0025 mm 2 .

Deskripsi retikulum Neubauer yang ditingkatkan. a) Persegi sudut, b) bujur sangkar, c) bujur sangkar tengah. Sumber: Panduan Praktis untuk Hematologi Sekolah Bioanalisis Universitas Carabobo, Venezuela.

Zona “a” dan “c” berfungsi sebagai penunjang untuk menempatkan objek penutup khusus yang disebut slide hematometri atau penutup hematimeter.

Ketinggian antara slide dan permukaan penghitungan adalah 0,1 mm. Pengukuran luas kotak penghitungan, serta ketinggian ruang dan pengenceran sampel, adalah data yang diperlukan untuk membuat perhitungan akhir.

Kegunaan

Digunakan untuk menghitung sel. Ini sangat membantu di bidang hematologi, karena memungkinkan penghitungan 3 seri sel darah; yaitu, sel darah merah, sel darah putih, dan trombosit.

Namun, dapat digunakan di area lain, misalnya untuk menghitung sperma, spora, bakteri atau item penting lainnya tergantung pada jenis sampel.

Cara Penggunaan?

Persiapan sampel

Untuk melakukan penghitungan sel, umumnya didasarkan pada pengenceran sebelumnya. Contoh: untuk menghitung sel darah putih, siapkan pengenceran 1:20 dengan cairan Turk. Pengenceran dicampur dengan baik sebelum memuat pipet dan memasang ruang Neubauer.

Ada kalanya pengenceran 1:20 tidak cukup untuk dihitung. Misalnya, pada pasien yang menderita leukemia kronis jenis tertentu. Dalam kasus ini, pengenceran yang lebih tinggi seperti 1: 100 harus dibuat.

Sebaliknya, jika jumlahnya sangat rendah, seperti pada leukopenia berat, pengenceran yang lebih kecil dapat dilakukan untuk mengonsentrasikan sampel. Contoh: Anda dapat membuat pengenceran 1:10.

Perubahan yang dilakukan mempengaruhi perhitungan.

Dudukan Kamar Neubauer

Ruang Neubauer dirakit dengan menempatkan slide hematometrik di area tengah. Keduanya harus sangat bersih dan kering. Untuk menempatkan slide, itu diambil di tepinya dan dengan lembut dijatuhkan ke kamera.

Ini diisi dengan menempatkan ujung pipet atau pipet otomatis Thoma pada sudut 35 ° di tepi zona pemuatan. Cairan dibuang dengan lancar dan area pemuatan diisi oleh kapilaritas. Ini dilakukan di kedua sisi untuk memuat dua garis bidik.

Retikel tidak boleh kelebihan beban dan juga tidak boleh ditolak cairannya. Beban harus tepat. Penting agar pengisian dilakukan secara homogen, yaitu tidak boleh ada gelembung.

Setelah bilik dirakit, dibiarkan istirahat selama 2 menit sehingga sel mengendap ke bawah dan visualisasi serta penghitungannya lebih mudah.

Setelah waktu istirahat, dipasang di atas panggung mikroskop cahaya untuk pengamatan. Pertama berfokus dengan tujuan 10X dan jika perlu maka ia pergi ke 40X.

Untuk meningkatkan visualisasi, bagian cahaya dari mikroskop dikurangi. Untuk melakukan ini, kondensor diturunkan dan diafragma sedikit tertutup.

Perhitungan

Untuk menghitung sel darah putih atau leukosit, seluruh permukaan dari keempat median sudut bujur sangkar dan bujur sangkar tengah setiap retikulum harus dihitung.

Penghitungan dimulai di kotak di sudut kiri atas. Anda mulai dari kotak pertama dari baris pertama, yaitu dari kiri ke kanan sampai Anda mencapai ujung yang berlawanan.

Di sana Anda turun dan melihat ke belakang dari kanan ke kiri sampai Anda mencapai ujung yang lain, dan seterusnya, sel-sel di dalam setiap kotak dihitung secara zig-zag. 16 grid dari setiap kotak median dihitung.

Untuk menghindari penghitungan sel dua kali, ada aturan tentang sel yang terletak di garis batas setiap kisi. Sel di garis kiri dan atas dihitung dan sel di garis kanan dan bawah diabaikan.

Penghitung sel manual harus tersedia sehingga operator menekan tombol perangkat sebanyak sel yang diamati. Dengan penggunaan counter, operator dapat menghitung tanpa harus melihat ke atas dari bidang mikroskopis. Di akhir hitungan, Anda akan melihat jumlah total sel yang dihitung.

Perhitungan

Untuk perhitungan, Anda dapat melanjutkan dengan beberapa cara. Satu graticule dapat dihitung atau keduanya dapat dihitung dan keduanya dirata-ratakan. Dalam dua situasi ini, sel yang dihitung harus dikalikan dengan faktor, yang dalam hal ini adalah 40. Dan dengan demikian jumlah total per mm 3 diperoleh .

Tetapi jika dua kisi dihitung dan rata-rata tidak diambil, maka harus dikalikan dengan faktor yang berbeda, dalam hal ini dengan 20.

-Faktor perkalian

Berikut cara menghitung faktor perkalian.

Berbagai data diperhitungkan untuk perhitungan, termasuk titer pengenceran, tinggi ruang dan area yang dihitung.

Pengenceran

Standar pengenceran yang digunakan adalah 1:20 untuk jumlah leukosit.

Tinggi ruangan

Ketinggian antara ruang dan pelat hematometri adalah 0,1 mm.

Area terhitung

Jika dihitung 5 kuadrat luas 1 mm 2 , berarti luas penghitungan seluruhnya adalah 5 mm 2 . Data ini harus dikalikan dengan tinggi chamber untuk mendapatkan total volume yang dihitung. Artinya, 5mm 2 x 0,1mm = 0,5mm 3 .

Rumus dan perhitungan

Dengan data yang kita miliki, dikatakan:

Jika dalam 0,5 mm 3 —— ada ——— jumlah sel yang dihitung

Dalam 1 mm 3 ——- akan ada —- X jumlah sel

X jumlah sel = (jumlah sel dihitung x 1) / 0,5 mm 3

Tetapi pengenceran juga harus diperhitungkan. Oleh karena itu, rumusnya adalah sebagai berikut:

(Jumlah sel dihitung x 1) x 20 / 0,5 mm 3

Akhirnya, untuk meringkas, jumlah sel yang dihitung dapat dikalikan dengan 40. Dengan cara ini, diperoleh nilai leukosit per mm 3 .

Jika dua reticle dihitung, data area yang dihitung diubah, yang dalam hal ini menjadi 10 kotak, yaitu 10 mm 2 . Dan total volume terhitung 1 mm3. Rumusnya akan menjadi:

(jumlah sel dihitung x 1) x 20/1 mm 3

Oleh karena itu, dalam hal ini faktor perkaliannya adalah 20.

kesalahan

-Jika saat memuat kamera terlampaui atau terlampaui dengan cairan, ketinggian kamera akan bervariasi. Ini menghasilkan hitungan yang lebih tinggi dari yang sebenarnya. Jika Anda mencoba menghilangkan kelebihannya dengan kain kasa atau kapas, ini adalah kesalahan besar. Tindakan ini akan menyebabkan sel-sel berkonsentrasi, meningkatkan jumlah.

-Jika dimuat dengan buruk, hitungannya akan lebih rendah dari yang asli.

-Jika kamera dipasang dan dibiarkan kering, sudah tidak bisa dihitung lagi karena akan memberikan hasil yang salah.

-Jika pengenceran sampel tidak tercampur dengan baik sebelum dimasukkan ke dalam chamber, ada risiko kesalahan pembacaan, karena sel tidak akan terdistribusi secara homogen. Oleh karena itu, akan ada konsentrasi sel yang lebih rendah atau lebih tinggi, tergantung pada apakah sampel diambil dari permukaan cairan atau dari bagian bawah tabung masing-masing.

– Adanya gelembung mengurangi jumlah cairan yang harus masuk ke retikulum, mengganggu visualisasi dan distribusi sel yang benar. Semua ini secara signifikan mempengaruhi hasil.

-Selama penghitungan, jangan melihat ke atas dari mikroskop sampai setiap kotak besar selesai untuk menghindari tersesat.

-Salah satu alasan kesalahan adalah memiringkan kamera setelah pemasangan. Untuk alasan ini, panggung mikroskop harus dinaikkan dengan hati-hati.

Rekomendasi

Jika karena alasan apa pun Anda mendeteksi ketidaknormalan dalam pengisian bilik, disarankan agar Anda membongkar persiapan itu, membersihkan bilik dan memasang kembali dari awal.

Berhati-hatilah saat membersihkan kamera untuk menghindari goresan. Di sisi lain, perlu diketahui bahwa slide hematometrik halus dan rapuh. Penanganan yang tidak tepat dapat merusaknya.

Sebelum Anda mulai menghitung, pastikan sel terdistribusi dengan baik. Distribusi sel yang tidak merata terjadi karena pencampuran atau pengenceran sampel yang buruk. Jika ini terjadi, perakitan harus diulang.

Salah satu cara untuk mengetahui apakah sel terdistribusi dengan baik adalah dengan membandingkan jumlah setiap kotak besar, jumlah sel yang dihitung oleh setiap kotak tidak boleh terlalu berbeda satu sama lain.

-Jika jumlah sel darah putih di atas 50.000 mm 3, disarankan untuk mengulangi penghitungan, membuat pengenceran yang lebih besar.

-Jika Anda mengubah pengenceran, Anda harus menghitung ulang faktor perkalian, karena ini mempengaruhi rumus.

Referensi

  1. Cardona-Maya W, Berdugo J, Cadavid A. Perbandingan konsentrasi sperma menggunakan ruang Makler dan ruang Neubauer. Actas Urol Esp 2008; 32 (4): 443-445. Tersedia dalam: scielo.
  2. ruang Neubauer. (2018, 27 Maret). Wikipedia, Ensiklopedia Bebas . Tanggal konsultasi: 04:10, 23 Juni 2019 dari es.wikipedia.org
  3. Meneses A, Rojas L, Sifontes S. Penerapan metode penghitungan alternatif di Kamar Neubauer untuk menentukan konsentrasi Trichomonas vaginalis. Pdt. Cub Med Trop 2001; 53 (3): 180-8. Tersedia di: researchgate.net
  4. Gómez-Pérez Roald E. Analisis Spermogram. Pdt. Venez. Endokrinol. Meta 2007; 5 (2): 19-20. Tersedia di: ve.scielo
  5. Panduan praktis hematologi dari School of Bioanalysis University of Carabobo. Venezuela. 1998