kapsul pewarnaan adalah teknik pewarnaan diferensial yang memiliki sifat struktur stres polisakarida sekitarnya bakteri tertentu dan ragi yang disebut kapsul. Ini digunakan di laboratorium klinis untuk membantu mendiagnosis patologi tertentu yang disebabkan oleh mikroorganisme berkapsul.
Ini juga digunakan di laboratorium pengajaran untuk mendemonstrasikan struktur morfologi ini kepada mahasiswa karir ilmu kesehatan, seperti: kedokteran, bioanalisis, keperawatan, atau sitoteknologi, antara lain.
Apusan Klebsiella pneumoniae diwarnai dengan pewarnaan kapsul. Metode tinta India dengan safranin. Sumber: .А.В [Domain publik]
Ada beberapa teknik sederhana untuk menunjukkan keberadaan kapsul dalam mikroorganisme yang memilikinya, yaitu: pewarnaan negatif, pewarnaan Anthony dan varian yang menggabungkan dua yang sebelumnya.
Pewarnaan negatif digunakan terutama pada sampel CSF ketika diduga adanya ragi Cryptococcus neoformans. Ragi ini adalah penyebab umum meningitis.
Teknik ini menggunakan tinta nigrosin atau India dan didasarkan pada pembuatan kontras antara latar belakang preparasi dan kapsul mikroorganisme yang tidak dapat ditembus. Latar belakang menjadi gelap dan kapsul tidak berwarna. Dengan cara ini, struktur ini disorot.
Mengenai teknik Anthony, dapat dikatakan bahwa itu banyak digunakan di laboratorium pengajaran untuk menunjukkan struktur polisakarida pada bakteri seperti Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae dan Neisseria meningitidis .
Penggunaan teknik ini untuk tujuan diagnostik sangat jarang, karena ada tes rutin lain yang memungkinkan untuk mengidentifikasi mikroorganisme ini.
Indeks artikel
Dasar
Kapsul adalah struktur kuat yang bersifat polisakarida. Ini melindungi mikroorganisme dari fagositosis, dan karena itu merupakan struktur yang sulit untuk ditembus.
Itulah sebabnya pewarnaan kapsul didasarkan pada kontras. Pewarna menodai bagian bawah sediaan sementara kapsul tetap tidak berwarna.
Oleh karena itu, dengan teknik tersebut kapsul mudah dikenali. Jika mikroorganisme tidak memiliki kapsul, tidak akan dapat dibedakan dengan pewarnaan jenis ini, karena semuanya akan diwarnai dengan warna yang sama.
Semua teknik yang digunakan untuk mewarnai kapsul memiliki alasan yang sama meskipun menggunakan pewarna dan prosedur yang berbeda.
Teknik pewarnaan kapsul
-Pewarnaan Antoni
Pewarnaan Anthony menggunakan kristal violet sebagai pewarna. Ini akan menodai tubuh bakteri dan latar belakang ungu.
Di sisi lain, 20% tembaga sulfat digunakan. Ini berfungsi sebagai larutan pencuci, yaitu menghilangkan kelebihan kristal violet dari sediaan, membuat kapsul menjadi bening tetapi tanpa kehilangan warna tubuh bakteri atau latar belakangnya.
bahan
– Susu berwarna-warni.
– Geser mikroskop.
– kristal ungu 1%.
– 20% tembaga sulfat.
– Mikroskop optik.
– Minyak imersi.
Proses
Teknik ini terdiri dari:
- Budidaya mikroorganisme dalam susu warna-warni selama 36 jam.
- Tempatkan setetes kultur di ujung slide dan di sebelahnya, letakkan setetes kaca violet, campur dan olesi dengan ujung slide lain.
- Udara kering dan tidak diatur dalam panas.
- Cuci dengan larutan tembaga sulfat 20%, biarkan kering.
- Amati di bawah mikroskop dengan objektif imersi. Cari ke arah ujung spread.
Penting untuk tidak menggunakan panas baik untuk memperbaiki atau mengeringkan, karena ini merusak kapsul. Tidak juga mencuci dengan air.
Penafsiran
Susu warna-warni adalah media kultur yang sangat baik karena menyediakan nutrisi yang diperlukan bagi mikroorganisme untuk mengembangkan kapsul yang menonjol.
Sebaliknya, susu yang berwarna-warni akan membentuk dasar yang tebal dan padat yang akan diwarnai ungu bersama dengan tubuh bakteri, tetapi kapsul yang mengelilingi mikroorganisme akan tetap tidak berwarna. Oleh karena itu, halo yang jelas diamati di sekitar tubuh bakteri.
Representasi grafis pada pengamatan mikroskopis dari apusan Klebsiella pneumoniae yang diwarnai dengan pewarnaan Anthony. Sumber: Dibuat oleh penulis MSc. Marielsa Gil.
Keuntungan
Ini adalah teknik sederhana untuk dilakukan. Tidak memerlukan fiksasi.
Juga, perlu diperhatikan bahwa media kultur lain dapat digunakan, tetapi media susu lebih disukai karena memiliki keunggulan dalam menyediakan kapsul yang lebih menonjol.
Kekurangan
Ini adalah teknik yang sedikit lebih padat karya daripada pewarnaan negatif, dan visualisasinya membutuhkan menunggu persiapan untuk benar-benar kering.
-Pewarnaan negatif
bahan
– Slide mikroskop.
– Media biakan dengan mikroorganisme.
– Tinta Cina atau nigrosine.
– Mikroskop optik.
– Larutan garam fisiologis.
Proses
Tempatkan setetes larutan garam fisiologis pada coverslip dan melarutkan sebagian kecil dari budaya mikroba. Adalah penting bahwa persiapan tidak terlalu tebal. Kemudian tempat setetes tinta Cina atau nigrosine dan campuran.
Lembar penutup kaca kemudian ditempatkan di atas sediaan tanpa menumpahkan cairan. Itu diamati di bawah mikroskop dengan terlebih dahulu memfokuskan pada tujuan 10X dan kemudian pindah ke 40X.
Teknik ini juga dapat digunakan pada sampel CSF secara langsung. Artinya, alih-alih menempatkan setetes kultur mikroba, setetes CSF ditempatkan.
Keuntungan
Ini adalah metode sederhana untuk dilakukan dan pada saat yang sama tidak mahal. Itu tidak memerlukan fiksasi atau pengeringan preparasi.
Kekurangan
Kerugiannya adalah harus diamati di bawah mikroskop sebelum sediaan mengering, karena jika ini terjadi mikroorganisme akan berkontraksi, yang akan mempersulit visualisasi.
Di sisi lain, positif palsu dapat terjadi jika analis tidak berpengalaman, karena leukosit sering disalahartikan sebagai ragi.
Pengamatan kapsul ragi dengan tinta Cina atau teknik nigrosin harus dianggap sebagai diagnosis dugaan Cryptococcus neoformans sampai ditunjukkan dengan kultur.
Ini karena ada ragi lain yang bisa menjadi penyebab meningitis dan bukan hanya Cryptococcus neoformans , seperti genus Candida dan Rhodotorula, serta spesies Cryptococcus lainnya.
Penafsiran
Jika ada mikroorganisme berkapsul, latar belakang gelap akan diamati, dengan benda transparan mengambang di cairan, menyoroti keberadaan kapsul.
Kapsul Cryptococcus neoformans diwarnai dengan tinta Cina. Sumber: Kredit Foto: Penyedia Konten: CDC / Dr. Leanor Haley [Domain publik]
-Teknik tinta India
Teknik ini juga bisa dilakukan dengan nigrosine. Ini adalah kombinasi dari teknik yang dijelaskan sebelumnya. Teknik ini menggunakan kristal violet dan tinta India atau nigrosine.
Tubuh bakteri berubah menjadi ungu dari kristal violet karena bermuatan negatif, sedangkan nigrosin mewarnai bagian bawah apusan. Jika bakteri memiliki kapsul, maka akan muncul sebagai lingkaran transparan di sekitar mikroorganisme.
Kristal violet dapat diganti dengan salah satu warna berikut: safranin, fuchsin dasar atau biru metilen.
bahan
– Kaca ungu.
– Nigrosine atau tinta India.
– Slide mikroskop.
– Mikroskop.
Proses
– Menumbuhkan mikroorganisme dalam media kultur.
– Tempatkan setetes budaya di ujung slide dan di samping itu, menempatkan setetes kristal India tinta atau nigrosine, campur dan menyebar dengan akhir slide lain.
– Udara kering dan tidak memperbaiki panas.
– Tutup dengan larutan kristal ungu selama 1 menit, cuci dengan air suling tetapi sangat hati-hati (aliran lembut), biarkan kering di udara terbuka.
– Amati di bawah mikroskop dengan objektif perendaman. Cari ke arah ujung spread.
Penafsiran
Tubuh bakteri berwarna ungu dan latar belakang gelap akan terlihat. Kapsul, jika ada, akan tampak tidak berwarna di sekitar bakteri.
Referensi
- Covadonga A, Silóniz M, Serrano S. Teknik dasar Mikrobiologi. Pengamatan bakteri. Reduca (Biologi). Seri Mikrobiologi. 2010; 3 (5): 15-38. D
- López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, noda Franco-Cendejas R. Dasar di laboratorium mikrobiologi. Mediagraphic.org. 2014; 3 (1): 10-18. Tersedia di: medigraphic.com
- Gil M. Pewarnaan negatif: alasan, teknik, kelebihan dan kekurangan. Lifeder.com.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 edisi Argentina. Editorial Panamericana SA
- Tankeshwar A. Noda Kapsul: Prinsip, Prosedur dan Hasil. 2019. Panduan Mikrobiologi Medis. Tersedia di: microbeonline.com
