OF atau glukosa fermentasi media adalah agar semi-padat yang dirancang khusus untuk studi tentang oksidatif dan metabolisme fermentasi karbohidrat dalam kelompok penting dari mikroorganisme selain Enterobacteriaceae, yang disebut non-enterik Gram negatif basil.
Itu dibuat oleh Hugh dan Leifson; para peneliti ini menyadari bahwa cara konvensional untuk mempelajari produksi asam dari karbohidrat tidak cocok untuk kelompok bakteri tertentu ini.
A. Media basal komersial OF. B. Tabung dengan OF medium berbiji. Sumber: A dan B Foto diambil oleh penulis MSc. Marielsa Gil.
Ini karena batang Gram negatif non-enterik umumnya menghasilkan asam dalam jumlah rendah, tidak seperti Enterobacteriaceae.
Dalam pengertian ini, medium OF memiliki karakteristik khusus yang dapat mendeteksi sejumlah kecil asam yang terbentuk, baik melalui jalur oksidatif maupun fermentasi. Perbedaan ini berkaitan dengan jumlah pepton, karbohidrat dan agar.
Media ini mengandung lebih sedikit pepton dan konsentrasi karbohidrat yang lebih tinggi, sehingga mengurangi produk yang mengalkali media sebagai hasil metabolisme protein dan meningkatkan produksi asam karena penggunaan karbohidrat.
Di sisi lain, penurunan jumlah agar-agar mendukung penyebaran asam yang dihasilkan ke seluruh media, selain memungkinkan kita untuk mengamati motilitas.
Medium OF terdiri dari pepton, natrium klorida, bromotimol biru, dipotassium fosfat, agar, dan karbohidrat. Karbohidrat yang paling umum adalah glukosa, tetapi yang lain dapat digunakan sesuai dengan yang ingin dipelajari, antara lain laktosa, maltosa, xilosa.
Indeks artikel
Dasar
Seperti media kultur lainnya, media OF harus mengandung zat gizi yang menjamin pertumbuhan bakteri; zat ini adalah pepton.
Pada bagiannya, karbohidrat menyediakan energi dan pada saat yang sama berfungsi untuk mempelajari perilaku mikroorganisme terhadapnya, yaitu memungkinkan bakteri untuk diklasifikasikan sebagai organisme oksidatif, fermentatif atau non-sakarolitik.
OF medium mengandung rasio pepton / karbohidrat 1: 5 dibandingkan dengan media konvensional 2: 1. Ini memastikan bahwa jumlah amina alkali yang terbentuk dari degradasi pepton tidak menetralkan pembentukan asam lemah.
Di sisi lain, media mengandung natrium klorida dan dipotassium fosfat. Senyawa ini secara osmotik menstabilkan media dan mengatur pH masing-masing. Bromotimol biru adalah indikator pH, yang mengubah warna medium dari hijau menjadi kuning dengan produksi asam.
Beberapa mikroorganisme dapat menggunakan karbohidrat melalui oksidatif atau fermentasi, sementara yang lain tidak menggunakan keduanya.
Hal ini tergantung pada karakteristik masing-masing mikroorganisme. Sebagai contoh, beberapa mikroorganisme aerobik ketat dapat mengoksidasi karbohidrat tertentu, dan anaerob fakultatif dapat mengoksidasi dan memfermentasi tergantung pada lingkungan di sekitar mereka, sementara yang lain tidak mengoksidasi atau memfermentasi karbohidrat (asacarolytic).
Akhirnya, ada modifikasi media OF yang direkomendasikan oleh CDC yang mengandung dasar OF khusus dengan indikator merah fenol.
Proses oksidasi
Proses oksidasi glukosa tidak memerlukan fosforilasi glukosa, seperti halnya proses fermentasi. Dalam hal ini gugus aldehida dioksidasi menjadi gugus karboksil, menghasilkan asam glukonat. Ini pada gilirannya dioksidasi menjadi 2-ketoglukonik.
Yang terakhir baik terakumulasi atau rusak menjadi dua molekul asam piruvat. Sistem ini membutuhkan adanya oksigen atau beberapa senyawa anorganik sebagai akseptor elektron terakhir.
Produksi asam melalui rute ini lebih lemah daripada yang diperoleh dengan rute fermentasi.
Proses fermentasi
Untuk fermentasi glukosa terjadi dengan salah satu rute yang tersedia, pertama-tama harus difosforilasi, menjadi glukosa-6-fosfat.
Fermentasi glukosa dapat mengambil beberapa rute, yang utama adalah rute Embden-Meyerhof-Parnas, tetapi mereka juga dapat mengambil rute Entner-Doudoroff, atau rute heksosa monofosfat Warburg-Dickens, juga dikenal sebagai degradasi pentosa.
Rute yang dipilih akan tergantung pada sistem enzimatik yang dimiliki mikroorganisme.
Via Embden-Meyerhof- Parnas
Pada fermentasi glukosa dengan rute Embden-Meyerhof-Parnas, glukosa dipecah menjadi dua molekul triosa, untuk kemudian didegradasi menjadi berbagai senyawa karbon, hingga mencapai pembentukan gliseraldehida-3-fosfat. Dari sanalah zat antara berasal, yaitu asam piruvat.
Dari sana akan terbentuk berbagai jenis asam campuran yang dapat bervariasi dari satu spesies ke spesies lainnya.
Sistem ini terjadi tanpa adanya oksigen dan membutuhkan senyawa organik sebagai akseptor elektron terakhir.
Jalur Entner-Doudoroff
Dalam fermentasi glukosa melalui jalur Entner-Doudoroff, glukosa 6-fosfat menjadi glukono-ᵼ-lakton-6-fosfat dan dari sana dioksidasi menjadi 6-fosfoglukonat dan 2-keto-3-deoksi-6-fosfoglukonat, untuk akhirnya membentuk asam piruvat. Jalur ini memang membutuhkan oksigen untuk glikolisis terjadi.
Jalur degradasi pentosa atau jalur Warburg-Dickens Hexoxa monophosphate
Rute ini adalah hibrida dari 2 di atas. Ini dimulai mirip dengan jalur Entner-Doudoroff, tetapi kemudian gliseraldehida-3-fosfat dibentuk sebagai prekursor asam piruvat, seperti yang terjadi pada jalur Embden-Meyerhof-Parnas.
Persiapan
Menimbang:
2 gram pepton
5 gram natrium klorida
10 gr D-glukosa (atau karbohidrat yang akan disiapkan)
0,03 g bromotimol biru
3 gr agar-agar
0,30 g dipotassium fosfat
1 liter air suling.
Campur semua senyawa kecuali karbohidrat dan larutkan dalam 1 liter air suling. Panaskan dan aduk sampai benar-benar larut.
Pada pendinginan hingga 50 ° C, 100 ml glukosa 10% (disaring) ditambahkan.
Distribusikan 5 ml medium OF secara aseptik ke dalam tabung reaksi tertutup kapas dan autoklaf pada 121 ° C, tekanan 15 pon selama 15 menit.
Biarkan memadat dalam posisi vertikal.
PH media harus 7,1 Warna media yang disiapkan adalah hijau.
Simpan di lemari es.
Kegunaan
Medium OF adalah medium khusus untuk menentukan perilaku metabolisme suatu mikroorganisme terhadap karbohidrat. Terutama bagi mereka yang membentuk sedikit, lemah atau tanpa asam.
Ditaburkan
Untuk setiap mikroorganisme, diperlukan 2 tabung OF, keduanya harus diinokulasi dengan mikroorganisme yang akan dipelajari. Koloni diambil dengan gagang lurus dan ditusuk di tengah tabung tanpa mencapai bagian bawah; Beberapa tusukan dapat dilakukan, selama tidak ada minat untuk mengamati motilitas.
Lapisan petrolatum cair steril atau parafin cair steril (kira-kira 1 sampai 2 ml) ditambahkan ke salah satu tabung dan diberi label dengan huruf “F”. Tabung lainnya dibiarkan asli dan diberi label dengan huruf “O”. Kedua tabung diinkubasi pada suhu 35 ° C dan diamati setiap hari hingga 3 hingga 4 hari.
Penafsiran
Metabolisme dan produksi gas
Tabel: Klasifikasi mikroorganisme menurut perilakunya dalam tabung terbuka (oksidatif) dan tertutup (fermentasi)
Sumber: Dibuat oleh penulis MSc. Marielsa Gil
Gas diamati dengan pembentukan gelembung atau perpindahan agar-agar.
Perlu dicatat bahwa organisme yang hanya mengoksidasi glukosa tetapi tidak memfermentasinya, tidak akan dapat memfermentasi karbohidrat lain, dalam hal apa pun ia hanya akan mengoksidasinya. Oleh karena itu, dalam situasi ini tabung tertutup untuk mempelajari karbohidrat lain akan dihilangkan.
Motilitas
Selain itu, motilitas dapat dilihat di media OF.
Motilitas positif : pertumbuhan yang tidak terbatas pada daerah inokulasi. Ada pertumbuhan ke arah sisi tabung.
Motilitas negatif : pertumbuhan hanya pada inokulum awal.
QA
Strain berikut dapat digunakan sebagai kontrol kualitas: Escherichia coli , Pseudomonas aeruginosa dan Moraxella sp. Hasil yang diharapkan adalah:
- coli : Fermentor glukosa (baik tabung kuning dan berkilau).
- aeruginosa : Pengoksidasi glukosa (buka tabung kuning dan segel hijau atau biru).
- Moraxella sp: Tidak bersifat sakarolitik (tabung terbuka hijau atau biru, tabung tertutup hijau).
Keterbatasan
-Beberapa mikroorganisme tidak dapat tumbuh pada medium OF. Dalam kasus ini, tes diulang tetapi 2% serum atau 0,1% ekstrak ragi ditambahkan ke media.
-Reaksi oksidasi sering hanya diamati dekat permukaan dan sisa media dapat tetap hijau, dengan cara yang sama dianggap sebagai positif.
Referensi
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosa Mikrobiologi. edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosa Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 edisi Editorial Panamericana SA Argentina.
- Mac Faddin J. (2003). Tes biokimia untuk identifikasi bakteri yang penting secara klinis. edisi ke-3 Editorial Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
- Laboratorium Francisco Soria Melguizo. 2009. OF Glukosa Medium. Tersedia di: http://f-soria.es
- Laboratorium Conda Pronadisa. dari media glukosa. Tersedia di: condalab.com
- Laboratorium BD. 2007. DARI Medium Basal. Tersedia di: bd.com
