empedu esculin agar adalah selektif dan media diferensial biakan padat. Ini digunakan sebagai tes diagnostik untuk menentukan kemampuan mikroorganisme tertentu untuk tumbuh dalam media yang mengandung empedu dan juga memecah glukosida esculin menjadi esculetin dan glukosa.
Tes diagnostik ini digunakan untuk membedakan spesies dari genus Streptococcus yang termasuk dalam kelompok D (empedu esculin positif), dari kelompok Streptococcus lainnya yang bereaksi negatif terhadap tes ini.
Piring agar esculin empedu, diunggulkan dengan strain Enterococcus (tes positif). Sumber: Tidak ada penulis yang dapat dibaca mesin yang disediakan. Philippinjl diasumsikan (berdasarkan klaim hak cipta). [Area publik]
Perlu dicatat bahwa beberapa Streptococcus dari kelompok viridans dapat menghidrolisis esculin, tetapi tidak mampu tumbuh dengan adanya empedu pada konsentrasi 40%, oleh karena itu, dalam media ini reaksi untuk kelompok ini adalah negatif.
Di sisi lain, media esculin empedu juga berguna untuk diagnosis spesies Listeria monocytogenes atau Aerococcus sp , karena mikroorganisme ini positif empedu esculin.
Bile Esculin Agar terdiri dari pepton, ekstrak daging, empedu sapi, esculin, besi sitrat , agar, dan air suling. Beberapa rumah komersial memasukkan natrium azida dalam komposisi medium.
Media dapat dibuat di laboratorium jika Anda memiliki semua senyawa secara terpisah atau dapat dibuat dari media dehidrasi komersial.
Indeks artikel
Dasar
Media esculin empedu mengandung pepton dan ekstrak daging, kedua senyawa tersebut memberikan nutrisi yang diperlukan untuk pertumbuhan mikroorganisme.
Ini juga mengandung esculin; Senyawa ini adalah glikosida yang dibentuk oleh penyatuan monosakarida sederhana (glukosa) dengan senyawa yang disebut 6,7-dihidroksikumarin atau esculetin (aglukon), dihubungkan oleh ikatan asetal atau glukosidik.
Tes ini didasarkan pada apakah bakteri tersebut mampu menghidrolisis esculin. Jika ini terjadi, esculin terurai menjadi esculetin dan glukosa. Esculetina bereaksi dengan zat besi yang ada dalam medium, membentuk senyawa coklat tua, hampir hitam.
Ini berarti bahwa besi sitrat bertindak sebagai pengembang reaksi. Karakteristik ini membuat Bile Esculin Agar menjadi media diferensial.
Pada bagiannya, empedu merupakan inhibitor yang mencegah pertumbuhan beberapa mikroorganisme, oleh karena itu, bakteri, sebelum membelah esculin, harus dapat tumbuh dengan adanya empedu. Oleh karena itu, media ini dianggap selektif.
Bakteri yang dapat berkembang di lingkungan ini terutama yang hidup di lingkungan usus.
Dalam pengertian ini, beberapa perusahaan komersial menambahkan natrium azida ke media untuk lebih menghambat pertumbuhan basil gram negatif enterik, meningkatkan selektivitas media untuk pertumbuhan Streptococcus.
Akhirnya, agar-agar memberikan konsistensi padat pada medium dan air adalah pelarut untuk senyawa tersebut.
Persiapan
Sediaan agar-agar esculin empedu buatan sendiri
Menimbang:
5 gram pepton
3 g ekstrak daging
40 gr empedu sapi
1 gram eskulin
0,5 g besi sitrat
15 gr agar-agar
1000 ml air suling
Dalam kasus penambahan natrium azida, 0,25 g / liter ditimbang dan ditambahkan ke dalam campuran.
Larutkan komponen dalam liter air suling, panaskan sampai senyawa benar-benar larut. Masukkan 5 ml ke dalam tabung reaksi tutup ulir 16 x 125 mm. Autoclave pada 121 ° C, tekanan 15 pon selama 15 menit.
Keluarkan dari autoklaf dan miringkan tabung pada penyangga, sehingga agar-agar mengeras dalam paruh seruling lebar.
Simpan di lemari es sampai digunakan. Bawa ke suhu kamar sebelum disemai.
Piring agar esculin empedu juga dapat disiapkan; dalam hal ini, seluruh campuran diautoklaf dalam labu dan selanjutnya didistribusikan dalam cawan Petri steril. Biarkan mereka mengeras dan simpan di lemari es.
PH media harus 6,6 ± 0,2.
Pembuatan agar eskulin empedu dari media komersial
Timbang jumlah yang ditentukan oleh sisipan. Ini dapat bervariasi dari satu rumah bisnis ke yang lain. Selanjutnya, lanjutkan sama seperti prosedur yang dijelaskan di atas.
PH media harus 6,6 ± 0,2. Warna media yang dikeringkan adalah krem muda dan media yang disiapkan berwarna kuning gelap.
Media esculin empedu komersial. Sumber: Foto diambil oleh penulis MSc. Marielsa Gil.
Kegunaan
Media esculin empedu terutama digunakan untuk membedakan Grup D Streptococcus (empedu esculin positif), dari sisa kelompok Streptococcus (empedu esculin negatif).
Menggabungkan tes pertumbuhan kaldu hypersalted dengan tes esculin empedu dapat mengidentifikasi kelompok khusus Streptococcus grup D yang disebut Enterococcus.
Kelompok khusus Streptococcus ini termasuk dalam kelompok D dari genus yang disebutkan dan mereka mampu menghidrolisis esculin dengan adanya empedu seperti halnya anggota kelompok D lainnya, tetapi mereka juga mampu berkembang dalam media hypersalted (BHI dengan klorida dari 6,5% natrium), properti yang membuat perbedaan.
Oleh karena itu, Streptococci yang menghidrolisis empedu esculin tetapi tidak tumbuh dalam kaldu hypersalted disebut Streptococci Grup D non-enterokokus.
Ditaburkan
Inokulasi media sebaiknya dari kaldu 24 jam Todd-Hewitt.
Tambahkan 2 tetes ke permukaan media dengan pipet Pasteur dan sebarkan di media dengan loop platinum.
Inkubasi pada suhu 35 °C selama 48 jam, selama waktu inkubasi terpenuhi, dapat dipantau untuk melihat apakah ada reaksi positif. Jika reaksi tetap negatif pada akhir waktu, dapat diinkubasi hingga 72 jam.
Penafsiran
Reaksi positif : munculnya warna coklat tua, hampir hitam pada paruh seruling (dalam kasus uji tabung) atau menghitamnya agar-agar di sekitar koloni (dalam kasus uji pelat).
Reaksi negatif : media tidak menghitam atau hitam muncul dalam waktu kurang dari setengah tabung setelah 72 jam inkubasi. Di sisi lain, pertumbuhan bakteri dalam media tanpa munculnya warna hitam harus dianggap sebagai tes negatif.
QA
Untuk mengevaluasi kualitas media, strain Enterococcus faecalis ATCC 29212 harus tersedia sebagai kontrol positif dan strain Streptococcus yang tidak termasuk kelompok D sebagai kontrol negatif.
Keterbatasan
-Media yang tidak mengandung natrium azida memungkinkan pertumbuhan basil gram negatif enterik. Beberapa di antaranya bisa menghitamkan bagian tengahnya.
– Beberapa rumah komersial menambahkan empedu konsentrasi rendah (10%) dan untuk alasan ini beberapa Streptococcus yang tidak termasuk dalam kelompok D dapat berkembang dalam medium dan menghidrolisis esculin, yang dapat menghasilkan kesalahan dalam interpretasi.
Referensi
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosa Mikrobiologi. edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosa Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 edisi Editorial Panamericana SA Argentina.
- Mac Faddin J. (2003). Tes biokimia untuk identifikasi bakteri yang penting secara klinis. edisi ke-3 Editorial Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
- Lab.Britania. Empedu esculin dengan agar azida. 2015.Tersedia di: britanialab.com
- “Agar Esculin Empedu.” Wikipedia, Ensiklopedia Bebas . 22 Agustus 2017, 17:30 UTC. 22 Apr 2019, 17:35. es.wikipedia.org.
- Laboratorios Bd.Bile Esculin Agar Miring. 2015.Tersedia di: bd.com
- Laboratorium Neogen. Agar-agar empedu eskulin. Tersedia di: foodsafety.neogen.com
