media SIM adalah agar semi-padat dan diferensial, yang dirancang khusus untuk membantu identifikasi beberapa bakteri , terutama dari keluarga Enterobacteriaceae. Ini terdiri dari triptein, pepton, besi sulfat, amonium sulfat, natrium tiosulfat, dan agar.
Media ini memungkinkan pelaksanaan tiga tes penting: produksi hidrogen sulfida (H 2 S), pembentukan indole dan motilitas, maka SIM berasal dari akronim. Karena kegunaannya yang besar, itu tidak dapat hilang di laboratorium bakteriologi.
A. Media SIM Komersial B. SIM H2S (-), Indole (-) dan Uji Motilitas (+) dan SIM H2S (+), Indole (-), Uji Motilitas (+). Sumber: A. Foto diambil oleh penulis MSc. Marielsa Gil B. Mfloayza [CC BY-SA 3.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0)]
Tidak seperti media lain, media harus semi-padat agar kapasitas pergerakan beberapa bakteri dapat dideteksi. Dalam hal ini, tes ini bekerja sangat baik untuk Enterobacteriaceae, tetapi tidak pada batang Gram-negatif yang tidak memfermentasi, di mana metode lain lebih disukai, seperti drop pendant.
Media SIM memungkinkan untuk membedakan sifat spesifik tertentu yang menjadi ciri beberapa bakteri dalam kaitannya dengan yang lain. Misalnya Escherichia coli dibedakan menjadi H 2 S (-), Indole (+) dan motilitas (+), sedangkan Proteus mirabilis adalah H 2 S (+), indole (-), motilitas (+).
Indeks artikel
Dasar
Ini adalah media kultur yang dianggap diferensial, karena penggunaannya membedakan antara mikroorganisme yang mampu menghasilkan hidrogen sulfida dari yang tidak; itu juga menyoroti mereka yang membentuk indol dari triptofan dari mereka yang tidak membentuknya, dan akhirnya membedakan bakteri motil dari yang tidak bergerak.
Sumber daya
Seperti media kultur lainnya, ia memiliki unsur-unsur yang menyediakan nutrisi yang diperlukan sehingga mikroorganisme yang tidak menuntut dapat berkembang. Unsur-unsur ini diwakili oleh pepton dan triptein.
Perkembangan mikroorganisme dalam media sangat penting untuk dapat mengamati ada tidaknya karakteristik yang dievaluasi media ini.
Produksi hidrogen sulfida
Huruf S dari akronim SIM mengacu pada produksi hidrogen sulfida (H 2 S). Bakteri yang mampu membentuk hidrogen sulfida akan mengambil belerang dari natrium tiosulfat.
Setelah H 2 S -gas tak berwarna- terbentuk, ia bereaksi dengan garam besi yang ada dalam medium, membentuk sulfida besi, terlihat jelas (endapan hitam). Bakteri yang tidak membentuk H 2 S, meninggalkan medium warna aslinya (beige).
Adanya endapan hitam dapat menghambat interpretasi motilitas. Namun, sebagian besar H 2 S memproduksi Enterobacteriaceae diketahui positif motil, seperti Salmonella, Proteus, dan Citrobacter. Selain itu, endapan hitam yang menutupi hampir seluruh media menunjukkan motilitas positif.
Formasi Indole
Huruf kedua dari akronim SIM adalah “I”, yang mewakili pembentukan indole.
Dalam pengertian ini, triptein, selain sebagai sumber nutrisi, memenuhi fungsi fundamental lainnya. Pepton ini kaya akan asam amino yang disebut triptofan, sehingga dapat menunjukkan bakteri yang memproduksi triptofanase.
Enzim ini bertanggung jawab untuk memecah asam amino triptofan, dengan pembentukan konsekuen indole (zat tidak berwarna), asam piruvat dan amonium.
Itulah sebabnya, untuk menunjukkan reaksi ini, perlu ditambahkan zat pengungkap (pereaksi Ehrlich atau pereaksi Kovac). Entah bereaksi dengan indole, membentuk zat berbentuk cincin merah-fuchsia pada permukaan agar-agar. Jika cincin fuchsia muncul, tes indole ditafsirkan sebagai positif.
Bakteri yang tidak memiliki enzim ini tidak akan membentuk cincin dan diinterpretasikan sebagai uji indol negatif.
Penting untuk dicatat bahwa uji indol harus menjadi yang terakhir diinterpretasikan, karena setelah reagen ditambahkan, media menjadi keruh, sehingga sulit untuk memvisualisasikan motilitas.
Motilitas
Akhirnya huruf “M” dari kata SIM berarti motilitas. Untuk dapat menilai motilitas, media ini secara strategis berbentuk semipadat, karena sifat ini penting untuk dapat diamati ada atau tidaknya pergerakan bakteri. Bakteri yang memiliki flagela adalah mereka yang memberikan tes positif ini.
Uji positif akan terlihat ketika kekeruhan diamati, baik di inokulum awal, dan di sekitarnya. Sedangkan bakteri nonmotil hanya berkembang pada jalur inokulum awal.
Persiapan
SIM sedang
Timbang 30 g media dehidrasi dan larutkan dalam satu liter air suling. Campuran dibiarkan selama 5 menit dan kemudian dipanaskan sampai mendidih, sering diaduk sampai benar-benar larut.
Mendistribusikan campuran dalam tabung reaksi dengan tutup kapas dan autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit. Keluarkan rak tabung dari autoklaf dan biarkan memadat dalam posisi vertikal, sehingga media berbentuk balok.
Untuk pelestariannya disimpan di lemari es sampai digunakan. Media yang disiapkan harus memiliki pH akhir 7,3 ± 0,2.
Pada saat menginokulasi media harus pada suhu kamar. Warna tengahnya beige.
Reagen Kovac
Ukur 150 ml amil atau isoamil atau butil alkohol. (Gunakan salah satu dari tiga yang disebutkan).
Larutkan 10 g p-dimethylaminobenzaldehyde. Kemudian perlahan tambahkan 50 ml asam klorida pekat.
Reagen siap pakai tidak berwarna atau kuning muda. Itu harus disimpan dalam botol kuning dan disimpan di lemari es. Jangan gunakan jika berubah menjadi coklat tua; yang menunjukkan bahwa itu rusak. Reagen ini lebih disukai dalam hal Enterobacteriaceae.
reagen Erlich
Timbang 2 g p-dimethylaminobenzaldehyde dan larutkan dalam 190 ml etil alkohol absolut dan campur perlahan dengan 40 ml asam klorida pekat. Pertahankan reagen Kovac dengan cara yang sama. Reagen Ehrlich paling banyak digunakan untuk bakteri non-fermentasi dan anaerobik.
Kegunaan
Media SIM sangat banyak digunakan di laboratorium bakteriologi. Ini memiliki keuntungan bahwa tiga karakteristik penting dapat diamati dalam tabung yang sama dalam identifikasi Enterobacteriaceae.
Ditaburkan
Cara penaburan media yang benar adalah dengan menggunakan jarum, yang diambil sebagian dari koloni murni yang akan diteliti dan dimasukkan secara vertikal ke tengah media. Sebuah lunge harus dilakukan. Tusukan seharusnya tidak mencapai bagian bawah tabung, hal yang benar adalah menutupi hanya dua pertiga dari kedalamannya.
Tidak dianjurkan untuk mengulangi inokulum, karena hal ini dapat menyebabkan interpretasi yang salah tentang motilitas positif. Media yang diinokulasi diinkubasi secara aerobik pada suhu 37°C selama 24 jam.
Setelah waktu telah menyimpulkan, teramati apakah atau tidak ada produksi H 2 S dan motilitas dibaca. Akhirnya, indole terungkap, menambahkan 3 sampai 4 tetes reagen Ehrlich atau Kovac, aduk perlahan dan tafsirkan.
Sumber: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosa Mikrobiologi. edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.
QA
Sebagai kontrol sterilitas, satu atau dua tabung diinkubasi tanpa inokulasi dalam oven pada suhu 37°C selama 24 jam. Diharapkan setelah waktu ini tidak akan ada pertumbuhan atau perubahan warna.
Sebagai kontrol kualitas, strain bersertifikat yang diketahui dapat digunakan, seperti: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.
Hasil yang diharapkan adalah: Escherichia coli H 2 S negatif, indol dan motilitas positif, Enterobacter aerogenes hanya motilitas positif, Salmonella typhimurium H 2 S dan motilitas positif, dengan indol negatif. Proteus vulgaris semuanya positif, sedangkan Klebsiella pneumoniae dan Shigella semuanya negatif.
Keterbatasan
-Beberapa galur Morganella morganii , di antara galur lainnya, dapat menghasilkan pigmen kecoklatan dalam media ini karena produksi melanin, ini tidak boleh disamakan dengan endapan besi sulfida. Pada profesional yang tidak berpengalaman, situasi ini dapat menghasilkan hasil positif palsu dalam interpretasi tes H 2 S .
-Bakteri aerobik yang ketat hanya akan tumbuh di permukaan tabung, sehingga sulit untuk menginterpretasikan motilitas.
Referensi
- Laboratorium BD. SIM BBL. 2008.Tersedia di: bd.com
- Laboratorium Neogen. SIM Medium. Tersedia di: keamanan pangan
- Difco Francisco Soria Melguizo. SIM Medium. 2009.Tersedia di: http://f-soria.es
- Laboratorium Brizuela-Lab. SIM sedang. Tersedia di: .brizuela-lab.com
- Laboratorium Britannia. SIM sedang. 2015.Tersedia di: studyres.es/doc
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosa Mikrobiologi. edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.
