Kaldu tetrationat: alasan, persiapan, dan kegunaan

Tetrathionate kaldu atau kaldu TT merupakan media kultur cair selektif untuk pengayaan dan pemulihan dari strain genus Salmonella. Itu dibuat oleh Müeller dan kemudian dimodifikasi oleh Kauffmann, itulah sebabnya ada yang menyebutnya kaldu Müeller-Kauffmann.

Medium aslinya mengandung proteosa pepton, kalsium karbonat, dan natrium tiosulfat. Kauffmann menambahkan garam empedu ke dalamnya dan menciptakan modalitas lain dengan warna hijau cerah . Zat-zat ini menghambat pertumbuhan coliform, meninggalkan lingkungan yang bebas untuk perkembangan bakteri patogen, dalam hal ini Salmonella.

Kaldu tetrationat

Menambahkan larutan iodin iodin ke dalam kaldu tetrationat. Sumber: Manuel Almagro Rivas [CC BY-SA 4.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0)]

Modifikasi itu sangat berhasil karena secara signifikan meningkatkan sensitivitas media. Untuk alasan ini, saat ini berguna untuk mencari Salmonella dalam semua jenis sampel, tetapi terutama untuk tinja dan makanan padat atau cair.

Persiapannya terdiri dari dua tahap; Media komersial adalah dasar untuk menyiapkan kaldu tetrationat, dan selanjutnya, agar tetrationat dapat terbentuk, larutan iodinasi iodin ditambahkan untuk melengkapi media.

American Public Health Association (APHA) merekomendasikan penggunaan Tetrathionate Broth yang dilengkapi dengan warna hijau terang untuk pengayaan sampel Salmonella, karena lebih selektif daripada Tetrathionate Broth dan Selenite Broth.

Secara umum, kaldu tetrationat sangat ideal bila keberadaan bakteri genus Salmonella dicurigai dalam jumlah kecil atau bila disalahgunakan oleh paparan zat penghambat atau oleh proses industri yang meminimalkan viabilitasnya.

Indeks artikel

Dasar

Pepton yang ada sesuai dengan pencernaan kasein pankreas dan pencernaan peptik jaringan hewan. Ini menyediakan sumber karbon, nitrogen, dan nutrisi umum untuk pertumbuhan bakteri.

Untuk bagiannya, natrium tiosulfat bereaksi dengan larutan iodinasi membentuk tetrationat. Hal ini menghambat pertumbuhan coliform dan mendukung perkembangan bakteri yang mengandung enzim tetrathionate reductase, di antaranya adalah genus Salmonella, tetapi juga Proteus.

Garam empedu juga bertindak sebagai zat penghambat bagi sebagian besar bakteri Gram positif dan beberapa bakteri Gram negatif (koliform).

Kalsium karbonat menyerap zat beracun yang dihasilkan oleh dekomposisi tetrationat, yang membentuk asam sulfat . Dalam pengertian ini, kalsium karbonat menetralkan keasaman, menjaga pH medium stabil.

Dalam kasus modalitas hijau terang, zat ini meningkatkan daya selektif kaldu tetrationat dengan menghambat mikroorganisme selain genus Salmonella.

Persiapan

– Kaldu tetrationat

larutan yodium yodium

Menimbang:

  • 6 gram yodium.
  • 5 gram kalium iodida.

Kalium iodida dilarutkan dalam sekitar 5 ml steril air suling , kemudian yodium ditambahkan sedikit demi sedikit sambil campuran dipanaskan. Setelah larut sempurna ditepatkan dengan aquades steril sampai mencapai volume akhir 20 ml.

Medium dasar untuk kaldu tetrationat

Timbang 46 gram media dehidrasi dan suspensi dalam 1 liter air suling steril. Campur dan panaskan sampai benar-benar larut, itu bisa mendidih hanya selama beberapa menit. Jangan autoklaf. Basis media dibiarkan dingin sampai kira-kira 45 ° C, pada saat itu 20 ml larutan iodinasi ditambahkan.

Setelah menambahkan larutan iodinasi ke media itu harus segera digunakan. Jika Anda tidak ingin menggunakan seluruh campuran, lakukan sebagai berikut:

10 ml media dasar didistribusikan dalam tabung, dan hanya untuk mereka yang akan diinokulasi dengan sampel ditambahkan 0,2 ml larutan iodinasi.

Yang tidak akan digunakan masih bisa disimpan di lemari es, namun karena medianya tidak disterilkan, idealnya adalah menyiapkan jumlah yang tepat yang dibutuhkan.

Warna medium sebelum penambahan larutan iodinasi adalah putih susu dengan endapan putih dan setelah penambahan berwarna coklat dengan endapan pekat. Endapan yang diamati adalah normal dan sesuai dengan kalsium karbonat yang tidak larut. PH akhir media adalah 8,4 ± 0,2.

-Varian kaldu tetrathionate dengan warna hijau cerah

Untuk menyiapkan kaldu tetrationat hijau terang, semua langkah yang dijelaskan di atas dilakukan, tetapi sebagai tambahan, 10 ml larutan hijau terang yang disiapkan pada 0,1% akan ditambahkan ke dalam campuran.

hijau cerah

Solusi ini disiapkan sebagai berikut:

Timbang 0,1 g hijau cerah dan suspensi dalam 100 ml air suling. Panaskan sampai mendidih untuk mencapai pembubaran lengkap. Simpan dalam botol amber.

Menggunakan

Untuk sampel tinja ( kultur tinja ) protokolnya adalah sebagai berikut:

Inokulasikan 1 g feses padat atau 1 ml feses cair ke dalam tabung dengan 10 ml kaldu tetrationat siap pakai. Kocok kuat-kuat dan inkubasi secara aerobik pada suhu 43°C selama 6-24 jam.

Selanjutnya, ambil 10-20 l alikuot kaldu dan subkultur dalam media selektif untuk Salmonella, antara lain agar SS, agar XLD, agar hijau terang, agar enterik Hektoen.

Secara paralel, media selektif untuk Salmonella harus diinokulasi dengan sampel langsung (feses) tanpa pengayaan. Untuk spesimen usap rektal, buang bahan yang terkumpul ke dalam tabung dan lanjutkan seperti dijelaskan di atas.

Untuk sampel makanan, timbang 10 g makanan padat atau 10 ml makanan cair dan masukkan botol dengan 100 ml kaldu tetrationat siap pakai. Lanjutkan dengan cara yang sama seperti dijelaskan di atas tetapi inkubasi pada 37 ° C.

Seperti yang dapat dilihat, hubungan antara sampel dan kaldu akan selalu 1:10.

QA

Strain kontrol yang diketahui dapat digunakan untuk menguji media kultur. Yang paling banyak digunakan adalah galur bersertifikat ATCC.

Strain yang akan digunakan adalah Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 dan Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Pertumbuhan yang sangat baik diharapkan untuk strain Salmonella, sedangkan Escherichia coli mungkin memiliki pertumbuhan yang lemah atau teratur, dan strain Gram-positif (Enterococcus dan Staphylococcus) sebagian atau seluruhnya terhambat.

rekomendasi

-Karena media ini tidak menghambat pertumbuhan Proteus, beberapa laboratorium biasanya menempatkan 40 mg / L novobiocin untuk mencegah perkembangan strain mikroba ini. Antibiotik harus ditambahkan sebelum larutan yodium.

-Setelah menyiapkan media termasuk larutan yodium yodium, tidak boleh lebih dari 2 jam untuk diinokulasi.

-Saat mendistribusikan media dalam tabung, campuran harus terus menerus dihomogenkan untuk mensuspensikan kembali endapan yang terbentuk.

-Dalam sampel yang kurang terkontaminasi, kaldu tetrationat diinkubasi pada 35-37 ° C, dan pada sampel yang sangat terkontaminasi, inkubasi pada 43 ° C direkomendasikan.

Referensi

  1. Laboratorium Conda Pronadisa. 2010. Basis kaldu tetrationat menurut Müeller-Kauffmann. Tersedia di:
  2. Laboratorium BD. 2003. Basis Kaldu Tetrationat. Tersedia di:
  3. Laboratorium Britannia. 2015. Kaldu dasar tetranate. Tersedia di:
  4. Media BBL. 2005. Persiapan tabung untuk kultur spesies Salmonella.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosa Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 edisi Editorial Panamericana SA Argentina.
  6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Perbandingan media kultur sodium selenite dan sodium tetrathionate, keduanya diinkubasi pada suhu 37°C dan 42°C untuk isolasi Salmonella spp dari kotoran pembawa. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220