agar Endo atau Endo media adalah medium padat, diferensial dan dengan beberapa derajat budaya selektivitas. Formula asli diciptakan oleh Endo pada tahun 1904 untuk membedakan bakteri yang memfermentasi laktosa dari bakteri yang tidak memfermentasi. Awalnya dirancang untuk isolasi Salmonella typhi , tetapi kemudian tujuan media beralih ke pencarian coliform.
Prinsip Endo Agar tetap ada, tetapi formulasinya telah mengalami banyak perubahan selama bertahun-tahun. Saat ini, media terdiri dari peptic digest jaringan hewan, laktosa, dipotassium hidrogen fosfat, natrium sulfit, fuchsin dasar, dan agar-agar.
A: Virgin Endo Agar B: Agar Endo Berbiji, di tengah agar Anda dapat melihat kilau logam dari strain E. coli. Sumber: A: Strolch1983 [CC BY-SA 3.0 (http://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0/))/B: LenkaM [CC BY-SA 1.0 (https://creativecommons.org/licenses /by-sa/1.0)]
Penggunaan utama media telah dikaitkan dengan isolasi dan diferensiasi basil Gram negatif milik keluarga Enterobacteriaceae dan keluarga dekat lainnya.
Untuk waktu yang lama digunakan dalam mendeteksi coliform dalam sampel air, susu dan makanan, tetapi hari ini penggunaan media ini telah digantikan oleh orang lain dengan fungsi serupa. Namun, beberapa laboratorium mikrobiologi menggunakan agar ini untuk isolasi Enterobacteriaceae dari sampel asal klinis.
Indeks artikel
Dasar
Endo agar mengandung pepton yang berfungsi sebagai sumber asam amino, nitrogen, karbon, dan energi, yang diperlukan untuk pertumbuhan mikroorganisme ringan.
Di sisi lain, karakter agar-agar yang sedikit selektif diperoleh dengan penambahan natrium sulfit dan fuchsin basa; kedua komponen tersebut sebagian atau seluruhnya menghambat pertumbuhan sebagian besar bakteri Gram positif.
Karakter diferensial diberikan oleh adanya karbohidrat yang dapat difermentasi, yang dalam hal ini adalah laktosa dan fuchsin basa, yang juga berfungsi sebagai indikator pH.
Bakteri gram negatif yang tumbuh pada agar ini dan mampu memfermentasi laktosa akan membentuk koloni merah muda yang kuat; menjadi patognomonik Escherichia coli pembentukan koloni merah tua dengan kilau logam kehijauan warna-warni. Hal ini disebabkan tingginya produksi asam dari fermentasi karbohidrat.
Perlu dicatat bahwa media di sekitar koloni juga berubah menjadi warna merah muda yang kuat. Sedangkan batang Gram negatif yang tidak memfermentasi laktosa membentuk koloni berwarna merah muda pucat seperti sedang atau tidak berwarna.
Dipotassium hidrogen fosfat menyeimbangkan pH medium dan agar-agar adalah komponen yang memberikan konsistensi padat.
Persiapan
Endo agar
Timbang 41,5 g media dehidrasi dan larutkan dalam 1 liter air suling . Panaskan campuran dengan sering diaduk sampai media benar-benar larut. Sterilkan dalam autoklaf pada 121 ° C, pada tekanan 15 lb, selama 15 menit.
Saat mengeluarkan dari autoklaf, biarkan dingin hingga suhu sekitar 45-50 ° C, kocok campuran agar homogen sebelum disajikan. Tuang 20 ml ke dalam cawan petri steril.
Biarkan piring mengeras, balikkan dan simpan dalam saku rok atau bungkus dengan kertas gelap sebelum disimpan di lemari es. Sangat penting untuk melindungi media yang disiapkan dari cahaya langsung. Praktik terbaik adalah menyiapkan jumlah yang tepat yang Anda perlukan.
Jika disimpan di lemari es, piring harus dibiarkan memanas sebelum digunakan.
PH media harus antara 7,2 hingga 7,6 dan warna media yang disiapkan adalah merah muda pucat.
Varian M-endo agar
Ada versi lain dari Endo agar (m-Endo) yang mengikuti formula McCarthy, Delaney dan Grasso, yang mengandung lebih banyak senyawa dan bervariasi dalam bentuk sediaan.
Varian ini mengandung: laktosa, triptosa, cerna enzimatik kasein, cerna enzimatik jaringan hewan, natrium klorida, kalium fosfat dibas, natrium sulfit, ekstrak ragi, kalium fosfat monobasa, fuchsin dasar, natrium deoksikolat, natrium lauril sulfat dan agar.
Dalam hal ini, 51 g media dehidrasi ditimbang dan disuspensikan dalam 1 liter air suling yang mengandung 20 ml etanol.
Panaskan sedikit sambil diaduk sampai medium larut sempurna. Itu tidak boleh terlalu panas dan tidak boleh diautoklaf. Setelah campuran homogen, sajikan dalam cawan Petri steril dan biarkan memadat.
Menggunakan
Di beberapa negara masih digunakan untuk menghitung total dan fekal coliform dalam sampel makanan dan air, terutama keberadaan Escherichia coli sebagai indikator utama kontaminasi tinja.
M-Endo Agar direkomendasikan oleh American Public Health Association (APHA) untuk pemantauan dan pengendalian program desinfeksi dan pengolahan air limbah, serta dalam evaluasi kualitas air minum.
Metode yang paling banyak digunakan adalah filtrasi membran, setelah memperkaya sampel dengan kaldu Lauryl sulfate selama 2 sampai 4 jam.
Ini juga dapat digunakan sebagai pengganti agar EMB dalam analisis mikrobiologis makanan dan air dengan teknik angka paling mungkin (MPN), khususnya dalam fase konfirmasi lengkap untuk menguatkan keberadaan E. coli dari kaldu EC keruh.
QA
Strain kontrol yang dikenal atau bersertifikat ditaburkan untuk menilai kualitas batch agar Endo yang disiapkan.
Di antara strain yang dapat digunakan untuk tujuan ini adalah: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11.775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus mirabilis ATCC 14153 dan Enterococcus faecalis ATCC 11700 .
Strain diunggulkan oleh kelelahan dan diinkubasi pada 37 ° C selama 24 jam dalam aerobiosis.
Hasil yang diharapkan adalah:
- Untuk Escherichia coli: koloni merah kuat, dengan kilau logam.
- Untuk E. cloacae dan K. pneumoniae koloni harus berwarna merah muda mukoid.
- Dalam kasus S. typhimurium, S. flexneri dan P. mirabilis koloni biasanya berwarna merah muda pucat atau tidak berwarna.
- Akhirnya, E. faecalis diperkirakan akan terhambat sebagian, oleh karena itu pertumbuhannya harus buruk dengan koloni merah muda yang sangat kecil dan kuat.
Keterbatasan
Media -Endo memiliki daya selektif yang rendah, sehingga dimungkinkan beberapa mikroorganisme Gram positif seperti Staphylococcus, Enterococcus bahkan khamir dapat tumbuh.
-Bacilli lain yang tidak termasuk dalam famili Enterobacteriaceae dapat berkembang pada media ini, seperti Pseudomonas sp dan Aeromonas sp . Ciri-ciri galur ini adalah koloni tidak beraturan yang tidak berwarna.
-Media yang disiapkan ini sangat sensitif terhadap cahaya, oleh karena itu, paparan yang terlalu lama akan merusak sistem indikator, merusak media secara permanen.
-Komponen media dianggap karsinogenik, oleh karena itu kontak langsung harus dihindari.
-Media dehidrasi sangat higroskopis dan harus disimpan dalam wadah aslinya pada suhu kamar, tertutup rapat dan di lingkungan yang kering.
Referensi
- Laboratorium BD. Endo Agar. 2013.Tersedia di: bd.com
- Laboratorium Neogen. M Endo Agar. Tersedia di: foodsafety.neogen.com
- “Agar Endo.” Wikipedia, Ensiklopedia Bebas . 7 Sep 2017, 08:27 UTC. 28 Februari 2019, 22:55. Tersedia di: en.wikipedia.
- Laboratorium Merck. Endo agar. 2019.Tersedia di: merckmillipore.com
- Laboratorium Lembar Teknis. M-Endo Agar LES. 2015.Tersedia di: liofilchem.net
