Czapek (CZA) adalah medium padat selektif dirancang khusus untuk budidaya bakteri saprofit dan jamur. Itu dibuat oleh ahli botani Friedrich Johann Franz Czapek, asal Polandia, dan ahli kimia Amerika Arthur Wayland Dox; Untuk alasan ini, agar-agar ini juga dikenal sebagai media Czapek-Dox.
Media aslinya cair, tetapi kemudian ditambahkan agar-agar untuk membuatnya menjadi media padat. Medium Czapek terdiri dari natrium nitrat, dipotassium fosfat, magnesium sulfat, kalium klorida, besi sulfat, sukrosa, agar, dan air suling .
Czapek agar A. Aspergillus parasiticus B. Aspergillus fumigatus Sumber: A. Medmyco [CC BY-SA 4.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0))/ B. Foto: Dr. David Midgley. Wikipedia.com
PH agar Czapek adalah 7,3, tetapi ada varian yang ditambahkan 10% asam laktat, yang pH-nya tetap 3,5. Medium asam ini digunakan untuk budidaya mikroorganisme asidofilik.
Di sisi lain, beberapa rumah komersial memodifikasi komposisi agar Czapek dengan mengubah magnesium sulfat dan bipotassium fosfat dengan gliserofosfat; Modifikasi ini mencegah pembentukan endapan magnesium fosfat yang diamati dengan formula konvensional. Demikian juga, ada varian lain yang ditambahkan ekstrak ragi.
Akhirnya, agar Czapek direkomendasikan oleh American Public Health Association APHA untuk studi Actinomycetes sp, Aspergillus sp, Paecilomyces sp dan Penicillium sp. Spesies ini dicirikan sebagai mikroorganisme lingkungan dan patogen oportunistik.
Indeks artikel
Dasar
Media ini mengandung sukrosa; karbohidrat ini berfungsi sebagai sumber karbon, sedangkan natrium nitrat adalah sumber nitrogen, tetapi tidak seperti media lain, nitrogen yang disediakan adalah anorganik.
Untuk alasan ini, media Czapek dianggap selektif, karena hanya mikroorganisme yang mampu menggunakan senyawa anorganik sebagai satu-satunya sumber nitrogen yang dapat berkembang .
Sebagai pengatur osmolaritas medium adalah bipotassium phosphate. Untuk bagian mereka, magnesium sulfat, kalium klorida dan besi sulfat menyediakan mineral penting untuk pertumbuhan mikroorganisme saprofit (hidup bebas). Formula ini membentuk endapan magnesium fosfat.
Akhirnya, agar-agar adalah senyawa yang memberikan konsistensi padat pada medium dan air adalah pelarut untuk semua komponen.
Dengan formula agar Czapek yang dimodifikasi tidak ada pembentukan endapan dan meningkatkan kinerja pertumbuhan beberapa jamur.
Keasaman yang ekstrim dari Acid Czapek Agar membuatnya menjadi media yang lebih selektif, hanya memungkinkan pertumbuhan mikroorganisme acidophilic, yang mampu memanfaatkan nitrogen anorganik. Sementara itu, agar ragi Czapek meningkatkan kinerja jamur tertentu.
Persiapan
Czapek-Dox sedang
Timbang 49 g media kultur dehidrasi dan larutkan dalam air suling. Oleskan panas sampai mendidih. Kocok campuran sering sampai benar-benar larut.
-Czapek Agar Wedges
Mendistribusikan campuran terlarut ke dalam tabung dan autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit. Saat mengeluarkan dari autoklaf, homogenkan sebelum meletakkan tabung dan biarkan memadat.
-Czapek agar piring
Autoclave campuran terlarut pada 121 ° C selama 15 menit dan biarkan dingin hingga 50 ° C, homogenkan dan tuangkan 20 ml ke dalam cawan Petri steril. Biarkan mengeras, balikkan dan simpan di lemari es sampai digunakan.
pH harus 7,3 ± 0,2. Warna media yang dikeringkan adalah putih dan media yang disiapkan berwarna kuning muda, sedikit keruh karena adanya endapan flokulasi.
Czapek medium pada pH asam
Siapkan seperti yang telah dijelaskan, tetapi tambahkan 10 ml asam laktat 10% steril untuk setiap liter media yang disiapkan. Media Czapek yang dimodifikasi harus tetap pada pH 3,5 ± 0,2.
Modifikasi Czapek Medium
Timbang 45,4 g media dehidrasi dan larutkan dalam 1 liter air. Persiapan lainnya sama seperti yang dijelaskan di atas. Warna media yang dikeringkan adalah putih dan media yang disiapkan berwarna keputihan. PH akhir media adalah 6,8 ± 0,2.
Czapek-ragi medium
Juga disebut Czapek Yeast Extract Agar (CYA). Mengandung unsur agar Czapek klasik ditambah ekstrak ragi.
Menggunakan
Media Czapek digunakan untuk mencari mikroorganisme saprofit dalam sampel tanah, sayuran, biji-bijian, udara, serangga, dan lain-lain.
Agar Czapek pada pH asam digunakan untuk pertumbuhan mikroorganisme asidofilik, sedangkan agar Czapek yang dimodifikasi sangat berguna untuk pembentukan klamidospora pada spesies kompleks Candida albicans.
Terakhir, agar ragi Czapek sangat berguna untuk isolasi Aspergillus dan Penicillium.
Ditaburkan
-Agar Czapek
Untuk mencari Actinomycetes di dalam tanah, lakukan sebagai berikut: sampel diperlakukan dengan air terfenolisasi selama 30 menit dan kemudian 1 mL suspensi ditaburkan pada agar Czapek. Inkubasi pada suhu 28°C selama 5 sampai 7 hari.
Untuk sampel sayuran, biji-bijian dan serangga ditempatkan langsung pada agar-agar. Anda juga bisa membuat pengenceran dan menaburkan 0,1 ml di permukaan agar-agar.
-Czapek agar-agar yang dimodifikasi
Untuk pembibitan, digunakan loop atau jarum lurus, diresapi dengan kapas dan agar diinokulasi dengan membuat tusukan sampai menyentuh dasar piring. Inkubasi selama 24 jam pada suhu 28 ° C dan periksa di bawah mikroskop di atas dan di bawah piring untuk melihat apakah klamidospora telah terbentuk.
Suhu dan waktu inkubasi
Suhu dan waktu inkubasi bervariasi tergantung pada jenis mikroorganisme yang akan diisolasi. Pelat umumnya diinkubasi selama satu hingga dua minggu dalam kisaran suhu 20 hingga 25 ° C.
Namun, ada kondisi khusus untuk beberapa strain. Misalnya, sebagian besar spesies genus Aspergillus memiliki pertumbuhan optimal pada suhu 30°C; namun A. fumigatus tumbuh pada suhu 50 ° C.
Mengenai waktu inkubasi, satu atau dua minggu adalah normal, namun Candida albicans dapat berkembang dalam 24 hingga 48 jam pada suhu 25 ° C.
Karakteristik beberapa koloni pada media ini
-Penicillium atrovenetum
Ini berkembang dalam 12 hari inkubasi pada 27 ° C. Koloni mereka kecil (25 mm).
Koloni memiliki penampilan seperti beludru, dengan batas putih yang jelas dan di tengahnya memiliki rona biru-hijau yang berubah menjadi abu-abu seiring bertambahnya usia. Sisi sebaliknya dari koloni berwarna oranye, membuat bagian tengahnya berwarna sama karena produksi pigmen.
-Aspergillus niger
Ini berkembang dengan miselium putih ke kuning dan spora hitam.
-Candida albicans
Koloni krem muda muda berkembang. Dalam agar Czapek termodifikasi membentuk klamidospora.
-Aspergillus parasiticus
Miselium hijau tua berkembang dalam 7 hari pada 25 ° C.
QA
Untuk mengevaluasi kualitas media kultur, dapat ditanam galur kontrol bersertifikat, seperti: Aspergillus niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.
Aspergillus niger mengembangkan miselium putih hingga kuning dan spora hitam dalam waktu sekitar 5 hari, sedangkan Candida albicans akan memiliki pertumbuhan yang memuaskan dalam 24 jam inkubasi pada 25 ° C; koloni berwarna krem.
Keterbatasan
Beberapa penelitian telah mengungkapkan bahwa untuk pemulihan Actinomycetes, agar dengan hasil terbaik adalah agar kentang dekstrosa , dengan agar Czapek di tempat kedua, tetapi untuk pemulihan Aspergillus dan Penicillium, agar Czapek adalah yang memberikan tingkat pemulihan tertinggi.
Referensi
- Davila M, dkk. Actinomycetes antagonis terhadap jamur fitopatogen penting pertanian. Pdt. Sains. Agric 2013, 4 (8): 1187-1196. Tersedia di: scielo.org.
- Luna M, Lozada Y, Trigos . Isolasi strain Aspergillus niger , penghasil okratoksin A, pada kopi hijau (Coffea arabica) yang disimpan. Pdt. mikrofon . 2010; 32: 63-68. Tersedia di.scielo.org.
- Kontributor Wikipedia. Czapek sedang. Wikipedia, ensiklopedia gratis. 13 Januari 2019, 20:30 UTC. Tersedia di: en.wikipedia.org
- Laboratorium Conda Pronadisa. Agar Czapek-Dox Modifikasi. Tersedia di: condalab.com
- Mikrokit Media Kultur. Agar Czapek-Dox. Diosponible di: Medioscultivo.com
