BHI agar atau Otak Jantung Infusion agar media adalah budaya yang solid gizi. Dalam bahasa Spanyol kita menyebutnya sebagai agar infus jantung otak. Ini adalah media kultur non-selektif, yang berarti bahwa semua jenis bakteri Gram positif dan Gram negatif dapat berkembang, serta beberapa ragi dan jamur berfilamen.
Ini terdiri dari infus otak anak sapi dan jantung, hidrolisat peptik dari jaringan hewan, hidrolisat pankreas kasein, natrium klorida, glukosa, dinatrium fosfat dan agar-agar.
piring BHI. Sumber: Foto diambil oleh penulis MSc. Marielsa Gil.
Perlu dicatat bahwa agar BHI adalah salah satu media kultur yang paling sering digunakan di laboratorium bakteriologi. Ini dapat digunakan tanpa suplemen sebagai kultur primer, subkultur koloni yang diperoleh pada media selektif lainnya, atau untuk pemeliharaan galur di laboratorium.
Di sisi lain, ini adalah media yang ideal untuk digunakan sebagai dasar dalam pembuatan media yang diperkaya, seperti agar darah dan agar coklat . Keduanya ideal untuk mengisolasi mikroorganisme yang menuntut dari sudut pandang nutrisi. Namun, perlu dicatat bahwa karena mengandung glukosa, tidak cocok untuk mengamati pola hemolisis.
Demikian juga agar BHI dapat digunakan untuk pembuatan media khusus isolasi mikroorganisme patogen yang sulit tumbuh pada media umum, antara lain: Haemophilus sp , Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae dan Histoplasma capsulatum.
Dengan aditif antibiotik, agar BHI menjadi media selektif untuk isolasi jamur.
Indeks artikel
Dasar
Ini adalah media kultur bergizi untuk mengisolasi mikroorganisme yang menuntut sedang, dan pengayaannya dapat ditingkatkan dengan penambahan darah dan suplemen nutrisi lainnya.
Ini adalah media kultur non-selektif, oleh karena itu memungkinkan pertumbuhan sebagian besar bakteri Gram positif dan Gram negatif, serta beberapa jamur. Namun, itu bisa menjadi selektif dengan penambahan antibiotik.
Media mengandung infus otak dan jantung anak sapi, hidrolisat peptik jaringan hewan dan hidrolisat kasein pankreas; Semua senyawa ini berperan sebagai sumber vitamin, asam amino, nitrogen, dan karbon.
Glukosa adalah karbohidrat yang menyediakan energi bagi mikroorganisme setelah mereka memfermentasinya. Sementara itu, natrium klorida dan dinatrium fosfat menjaga keseimbangan osmotik dan memberikan pH mendekati netralitas. Akhirnya, agar-agar memberikan media konsistensi yang solid.
Persiapan
Timbang 52 gram media dehidrasi dan larutkan dalam satu liter air suling. Bawa campuran ke sumber panas sampai mendidih, aduk terus selama proses pembubaran.
Pelat atau irisan agar BHI dapat dibuat tanpa bahan tambahan.
irisan
Untuk menyiapkan irisan, sajikan sediaan sampai setengah dari setiap tabung terisi, tutup dan sterilkan dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit, ketika meninggalkan, berbaring di alas sampai mengeras. Nanti simpan di kulkas sampai digunakan.
BHI wedges untuk bacterioteca. Sumber: Foto diambil oleh penulis MSc. Marielsa Gil.
piring
Campuran terlarut diautoklaf pada 121 ° C selama 15 menit, biarkan hingga dingin hingga 50 ° C dan sajikan 20 ml media dalam cawan Petri steril. Mereka dibiarkan mengeras, dibalik dan disimpan di lemari es sampai digunakan. Biarkan piring mencapai suhu kamar sebelum disemai.
PH media harus tetap pada 7,4 ± 0,2.
Media mentah berwarna krem dan media yang disiapkan berwarna kuning muda.
Pembuatan agar darah
Setelah media disterilkan, dinginkan hingga suhu kurang lebih 45-50 °C, lalu tambahkan darah (50 ml), aduk perlahan hingga homogen dan sajikan secara aseptik 20 ml di setiap cawan Petri. Jika gelembung terbentuk di piring, nyala api yang lebih ringan harus dilewatkan dengan cepat di atas gelembung untuk menghilangkannya.
Demikian juga, media khusus dapat dibuat dengan menambahkan aditif yang sesuai ketika campuran mencapai suhu 45 hingga 50 ° C.
Medianya berwarna merah ceri.
Kegunaan
Gunakan tanpa suplemen
Agar BHI tanpa aditif berguna sebagai kultur primer dan untuk menabur galur murni mikroorganisme yang menuntut rendah atau sedang untuk identifikasi selanjutnya.
Karena merupakan media berwarna terang, sangat ideal untuk pengamatan pigmen dan, karena tidak mengandung zat pengganggu, beberapa tes biokimia , seperti oksidase dan katalase, dapat dilakukan di atasnya , atau tes biokimia lainnya dapat dilakukan. dipasang dari koloni dari agar ini.
Demikian juga agar baji BHI banyak digunakan untuk pemeliharaan galur selama waktu tertentu di laboratorium (bacterioteca).
Pelat atau irisan yang diunggulkan oleh permukaan dengan strain bakteri diinkubasi pada 37 ° C selama 24 hingga 48 jam. Sedangkan pada jamur suhu dan waktu inkubasi akan tergantung pada jenis jamur yang dicari.
Sebagai dasar agar untuk pembuatan media lain
Dengan dasar ini, media yang diperkaya dan selektif dapat disiapkan.
Diperkaya
Fungsi utamanya adalah sebagai dasar pembuatan agar darah untuk penggunaan rutin di laboratorium mikrobiologi. Terutama, basa BHI kondusif untuk isolasi Streptococcus sp. Namun memiliki kekurangan yaitu tidak cocok untuk mengamati pola hemolisis karena mengandung glukosa.
Hal ini juga digunakan dalam persiapan agar darah kelinci atau kuda untuk isolasi Haemophilus sp . Untuk hasil terbaik, suplemen pengayaan (IsoVitaleX) dapat ditambahkan.
Jika sampel berasal dari saluran pernapasan, bacitracin dapat ditambahkan ke agar untuk menghambat flora yang menyertainya dan meningkatkan kemungkinan pemulihan Haemophilus sp .
Sebagai alternatif, agar darah (domba atau manusia) dengan sistin tellurit dapat disiapkan untuk mengisolasi Corynebacterium diphtheriae. Demikian juga, berguna untuk menyiapkan agar darah kelinci, dengan penambahan sistin dan glukosa untuk isolasi Francisella tularensis.
Penyemaian lempeng agar darah dilakukan sampai habis dan diinkubasi pada suhu 35-37 ° C selama 24-48 jam dalam mikroaerofilisitas (5-10% CO 2 ).
Selektif
Media ini dengan penambahan antibiotik dapat menggantikan agar Sabouraud untuk isolasi jamur.
Kombinasi agar BHI dengan kloramfenikol – gentamisin atau penisilin – , streptomisin dan darah kuda sangat ideal untuk isolasi Histoplasma capsulatum .
Tergantung pada mikroorganisme yang akan diisolasi, inkubasi pada 35-37 ° C atau pada suhu kamar dalam aerobiosis direkomendasikan. Terkadang inkubasi diperlukan di kedua rentang suhu, menggunakan 2 pelat untuk ini.
Beberapa jamur seperti Trichophyton mentagrophytes harus diinkubasi pada suhu kamar hingga 7 hari.
QA
Dari setiap batch yang disiapkan, direkomendasikan untuk menginkubasi 1 piring atau irisan pada 37 ° C selama 24 jam dan memverifikasi bahwa tidak ada pertumbuhan; Hal ini sangat penting ketika menyiapkan agar darah, karena merupakan media yang mudah terkontaminasi.
Di sisi lain, kualitas media dapat dievaluasi dengan menginokulasi strain standar yang diketahui atau bersertifikat dan mengamati perkembangannya.
Dalam hal ini, untuk mengevaluasi agar BHI tanpa aditif dapat digunakan strain Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 atau Candida albicans ATCC 10231. Mereka diinkubasi pada suhu 37 ° C dalam aerobiosis selama 24 hingga 48 jam. Pertumbuhan yang memuaskan diharapkan dalam semua kasus.
Strain Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 atau Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 dapat diunggulkan untuk mengevaluasi lempeng agar darah .
Strain bakteri diinkubasi pada suhu 37 ° C dalam mikroaerofilisitas selama 24 jam, sedangkan jamur diinkubasi pada suhu kamar di ruang lembab hingga 7 hari. Dalam semua kasus, pertumbuhan yang memuaskan diharapkan.
Referensi
- Laboratorium Britannia. Agar Infus Jantung Otak. 2015. Tersedia di: britanialab.com.
- Laboratorium BD. Agar Brain Heart Infusion (BHI). 2013. Tersedia di: bd.com.
- Laboratorios Difco Francisco Soria Melguizo, SA Brain Heart Infusion Agar. 2009.
- Laboratorium Neogen. Agar Infus Jantung Otak. Tersedia di: foodsafety.neogen.com
- Gil M. Agar darah: alas bedak, kegunaan dan persiapan. 2018.Tersedia di: lifeder.com.
- Kontributor Wikipedia. Infus jantung otak. Wikipedia, ensiklopedia gratis. 19 September 2018, 03:58 UTC. Tersedia di: wikipedia.org. Diakses pada 2 Maret 2019.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosa Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 edisi Editorial Panamericana SA Argentina.
