Persiapan media kultur: tujuan dan langkah-langkah

Persiapan media kultur: tujuan dan langkah-langkah

preparasi media kultur adalah metodologi rutin digunakan di laboratorium untuk pertumbuhan mikroorganisme yang diinginkan. Media kultur adalah sediaan padat, cair atau semi padat yang memiliki semua nutrisi yang diperlukan untuk perkembangan populasi mikroba.

Secara umum, sarana budidaya mikroorganisme kaya akan protein dan asam amino dan biasanya mengandung beberapa komponen yang mendukung pertumbuhan organisme yang akan dipelajari, seperti vitamin, darah, serum, dan lain-lain.

Sumber: pixabay.com

Tidak ada media kultur umum atau universal, karena komposisinya bervariasi tergantung pada kebutuhan mikroorganisme yang diinginkan. Beberapa bakteri dapat tumbuh di media kultur apa pun, tetapi yang lain memiliki persyaratan khusus.

Indeks artikel

Terdiri dari apa?

Mikroorganisme, seperti jamur dan bakteri, tidak dapat dipelajari secara individual karena ukurannya yang kecil. Untuk alasan ini, mereka harus dibudidayakan dengan cara buatan yang memungkinkan peningkatan populasi yang signifikan.

Misalnya, jika kita ingin mempelajari bakteri, kita harus menyediakan kondisi yang tepat agar mereka dapat berkembang biak dan membentuk koloni (yang dapat diamati dengan mata telanjang).

Persiapan media kultur sangat bervariasi tergantung pada jenis mikroorganisme yang akan dibudidayakan. Sebelum menyiapkannya, perlu diketahui kebutuhan nutrisi dasar organisme kerja.

Komponen yang paling umum digunakan dalam media kultur akan dijelaskan di bawah ini untuk mendapatkan gambaran umum tentang persiapannya:

Agar

Ini digunakan dalam kultur sebagai agen pembentuk gel dan ditambahkan ketika mencari media padat atau semi-padat. Bahan pengental pertama yang digunakan dalam pembuatan media adalah gelatin, tetapi pada tahun 1883 agar-agar diperkenalkan ke dunia bakteriologi oleh W. Hesse.

Agar bakteriologis memiliki komponen utama polisakarida dengan cabang kompleks yang diekstraksi dari alga. Senyawa ini digunakan sebagai pengental pada makanan umum seperti es krim dan selai.

Ini adalah unsur yang sangat berharga dalam mikrobiologi karena beberapa alasan. Terutama karena mikroorganisme tidak dapat mendegradasinya, ia mencair pada suhu 100 ° C dan tetap dalam keadaan cair hingga mencapai 45 ° C atau kurang.

Jika Anda ingin menyiapkan media padat, konsentrasi agar-agar harus sekitar 1,5%, sedangkan semipadat harus disiapkan dari 0,3 hingga 0,5%.

cairan

Budidaya organisme patogen membutuhkan cairan tubuh agar dapat berkembang seperti di lingkungan alaminya. Untuk alasan ini, darah utuh atau defibrilasi ditambahkan. Cairan diambil dari hewan yang sehat dan, setelah disterilkan, ditambahkan ke media kultur.

kutipan

Mereka diperoleh dari bagian hewan yang berbeda (seperti daging atau hati) atau sayuran (biji) dan diproses untuk mendapatkan konsentrat padat dalam bentuk pasta atau bubuk. Yang paling umum adalah ragi, malt, dan daging.

Pepton

Ini senyawa organik diperoleh dengan hidrolisis enzimatik atau kimiawi jaringan hewan atau tumbuhan. Tujuannya adalah untuk menambahkan kandungan yang kaya akan asam amino, yang merupakan unit dasar protein.

peredam

Buffer atau sistem buffer mencegah perubahan pH yang tiba-tiba dan membantu menjaga kisaran optimal yang dapat ditoleransi tubuh.

Sebagian besar organisme dapat berkembang pada pH 7, meskipun beberapa bakteri lebih menyukai media basa. Namun, ada bakteri yang tahan terhadap variasi pH antara nilai 6 dan 9.

Pada spesies yang peka terhadap pH, kerusakan tidak disebabkan oleh jumlah ion hidrogen atau hidroksil yang berlebihan, tetapi oleh peningkatan asam atau basa lemah yang dapat masuk ke dalam sel.

Begitu juga dengan indikator pH yang ditambahkan untuk dapat memonitoring dan menghindari penyimpangan yang disebabkan oleh fermentasi atau proses lainnya.

sasaran

Tujuan utama saat menyiapkan media kultur adalah untuk menambahkan semua komponen yang diperlukan untuk memungkinkan keberhasilan perkembangan organisme yang ingin diisolasi. Kombinasi komponen dan nutrisi yang paling efektif untuk mencapai media yang diinginkan harus diidentifikasi.

Persiapan dan penyimpanan media sangat penting untuk memastikan keberhasilan pertumbuhan, karena komposisi media dan ketersediaan nutrisi bergantung pada langkah-langkah ini.

Harus diperhitungkan bahwa budidaya mikroorganisme adalah tugas yang dipengaruhi oleh beberapa faktor di luar media kultur, seperti intensitas cahaya yang diterima, suhu dan tingkat keasaman atau alkalinitas media. Oleh karena itu, masing-masing variabel ini harus diperhitungkan.

Jenis media

Berdasarkan komposisinya

Berdasarkan komposisinya, ada tiga jenis utama tanaman: alami atau empiris, semi-sintetis, dan media sintetis atau kimia yang ditentukan.

Lingkungan alami

Di lingkungan alami komposisi yang tepat tidak diketahui. Ini termasuk bahan-bahan seperti susu, darah encer, jus sayuran, ekstrak dan infus daging dan pepton. Untuk alasan ekonomi, komponen murah seperti ekstrak kedelai, whey, molase, dll sering ditambahkan.

Media semi sintetis

Disebut medium semi sintetik jika komposisinya diketahui sebagian. Setiap media yang mengandung agar-agar menjadi media semi-sintetik.

Di antara mereka kita memiliki agar kentang dekstrosa, agar czapek-dox, agar oat, dan agar pepton daging, antara lain.

Media yang ditentukan secara sintetis atau kimia

Dalam hal ini komposisi medium – dalam hal jumlah sumber karbon, nitrogen, belerang, fosfor dan faktor pertumbuhan lain yang dibutuhkan – diketahui sepenuhnya. Ini sangat berguna jika Anda ingin mendapatkan hasil yang dapat direproduksi untuk peneliti lain.

Untuk apa yang disebut “mikroorganisme dengan persyaratan pertumbuhan khusus” perlu menambahkan komponen yang diperlukan. Contoh dari jenis ini adalah Lactobacillus .

Berdasarkan jenis mikroorganismenya

Demikian pula, ada klasifikasi lain untuk media kultur berdasarkan jenis mikroorganisme yang dapat tumbuh di atasnya. Mengikuti prinsip ini, kita memiliki cara umum, pengayaan, selektif, dan diferensial berikut. Masing-masing dijelaskan di bawah ini:

media umum

Ini mendukung pengembangan berbagai macam mikroorganisme. Jika ada organisme yang membutuhkan kondisi khusus untuk pertumbuhannya, ia tidak akan dapat berkembang dengan sukses dalam jenis kultur ini.

Media pengayaan

Media Pengayaan mendukung pertumbuhan jenis mikroorganisme tertentu, tetapi tidak ada zat yang ditambahkan untuk mencegah jenis mikroba lain tumbuh di dalamnya.

Media selektif

Mereka mencari pertumbuhan spesifik suatu mikroorganisme, sebut saja jamur, bakteri, protozoa, dan lain-lain. Untuk melakukan ini, mereka menghambat perkembangan orang lain.

Untuk mencapai tujuan ini, senyawa kimia yang mematikan bagi kelompok mikroorganisme yang luas dan tidak berbahaya bagi organisme yang diinginkan dapat ditambahkan, atau dengan menambahkan sumber energi yang hanya dapat diasimilasi oleh mikroba target.

Media selektif digunakan saat mengambil sampel medis untuk menumbuhkan mikroorganisme patogen. Di sini perlu untuk mendorong pertumbuhan patogen dan menghambat perkembangan flora mikroba normal dari pasien.

Agar bismut sulfit, misalnya, tidak memungkinkan pertumbuhan bakteri gram positif dan sejumlah besar bakteri yang ditemukan di rongga gastrointestinal. Untuk alasan ini, digunakan untuk menumbuhkan bakteri gram negatif yang menyebabkan demam tifoid, Salmonella typhi dalam sampel tinja.

media diferensial

Jenis ini menggunakan beberapa karakteristik diagnostik organisme yang diinginkan (kekhususan dalam metabolismenya, misalnya) untuk dapat mengidentifikasi mereka terhadap spesies lain yang tumbuh di lingkungan yang sama.

Media diferensial dan media selektif sangat berguna di bidang mikrobiologi klinis dan kesehatan masyarakat, karena disiplin ilmu ini perlu mendeteksi keberadaan mikroorganisme spesifik yang terkait dengan patologi atau kondisi kebersihan yang buruk.

Zat indikator dapat ditambahkan ke dalam kultur yang memberikan ciri khas pada koloni sasaran. Misalnya, laktosa dan indikator pH ditambahkan ke agar-eosin-metilen biru (disingkat EMB) dan agar MacConkey.

Jadi, ketika koloni berkembang di media ini dengan kemampuan untuk memfermentasi laktosa dan menghasilkan aldehida, mereka dapat diamati dalam warna khusus.

Langkah

Saat ini media kultur dapat dibeli dalam bentuk lyophilized. Untuk alasan ini, persiapannya lebih mudah dan hanya tersisa untuk merehidrasi produk. Isi harus ditimbang (dengan mempertimbangkan jumlah akhir yang harus disiapkan) dan dilarutkan dalam air suling mengikuti semua indikasi produk.

Isi media cair harus dibagi ke dalam wadah yang diinginkan (cawan petri, tabung, dll) untuk sterilisasi selanjutnya. Untuk mendistribusikan media padat, perlu untuk melelehkannya menggunakan microwave atau memasukkan bahan ke penangas air. pH media harus disesuaikan.

Biasanya agar-agar digunakan dalam tabung reaksi atau dalam cawan Petri. Jika agar-agar mengeras dalam posisi miring, pada sudut yang tepat sehingga ujung terminal akhir diagonal, susunan ini dikenal sebagai paruh seruling atau tabung miring. Ketika agar-agar memadat dalam posisi yang benar-benar vertikal, itu disebut “dalam”.

Setelah mensterilkan media – menggunakan autoklaf – dibiarkan dingin. Ini harus ditangani di lingkungan yang bebas dari mikroorganisme, yang paling umum adalah bekerja dengan korek api yang menyala yang memastikan lingkungan aseptik di sekitarnya.

Referensi

  1. Celis, JE (2006). Biologi sel: buku pegangan laboratorium (Vol. 2). lain.
  2. Finegold, SM, Bailey, WR, Baron, EJ, Fineglod, SM, & Scott, EG (1991). Bailey Scott: diagnosis mikrobiologi . Medis Pan Amerika.
  3. Olivas, E. (2004). Pedoman Praktikum Mikrobiologi I dan II dan Parasitologi . Universitas Otonom Ciudad Juarez.
  4. Schlegel, HG, & Zaborosch, C. (1993). mikrobiologi umum . Pers Universitas Cambridge.
  5. Tortora, GJ, Funke, BR, & Kasus, CL (2007). Pengantar mikrobiologi . Ed. Medis Panamerika.