Sebuah kultur bakteri adalah hasil dari menabur mikroorganisme tersebut pada media nutrisi, agar mereka untuk mereproduksi, sehingga menimbulkan penampilan koloni bakteri di media padat dan kekeruhan pada media cair.
Metode penyemaian sangat penting untuk dapat mendistribusikan inokulum sedemikian rupa sehingga bakteri yang ada tersebar dan dapat mengembangkan koloni yang terisolasi dengan baik.
Aneka tanaman yang ditanam penulis di Laboratorium Bakteriologi Gedung Ilmu Biomedis dan Teknologi Universitas Carabobo. Sumber: komposisi foto yang diambil oleh penulis MSc. Marielsa Gil.
Koloni yang diperoleh pada media kultur padat merupakan akibat dari perkembangbiakan mikroorganisme yang disemai. Setiap koloni dimulai dari satu bakteri, yang dapat berkembang biak secara eksponensial untuk membentuk populasi yang terlihat secara makroskopis.
Hal yang sama terjadi pada media kultur cair tetapi dalam hal ini pertumbuhan bakteri diamati dengan kekeruhan.
Pertumbuhan bakteri dimungkinkan bila media kultur yang dipilih memenuhi kondisi nutrisi dan pH yang diperlukan untuk perkembangan bakteri tertentu. Selain itu, perlu untuk mengontrol variabel lain, seperti suhu, waktu inkubasi, konsentrasi oksigen, CO 2 , antara lain.
Tidak semua populasi bakteri membutuhkan persyaratan yang sama, meskipun beberapa mungkin sama untuk hampir semua, seperti media mengandung pepton, juga benar bahwa ada mikroorganisme yang lebih menuntut yang juga membutuhkan zat spesifik lainnya, yang disebut faktor pertumbuhan.
Sebagai contoh, dapat disebutkan bahwa beberapa Haemophilus membutuhkan kehadiran faktor X (hemin) dan faktor V (NAD) untuk tumbuh.
Indeks artikel
Jenis kultur bakteri
Kultur bakteri dapat berupa polimikrobial, murni atau campuran.
Kultur bakteri polimikroba
Kultur polimikroba adalah kultur yang berasal dari penaburan sampel yang diperoleh dari tempat yang memiliki mikrobiota normal, di mana patogen tertentu juga dapat ditemukan.
Contoh: bila biakan usap tenggorokan dikembangkan, patogen seperti Streptococcus pyogenes dapat ditemukan , tetapi akan disertai oleh mikrobiota umum di daerah tersebut.
Dalam hal ini, lurik yang baik sangat penting untuk memungkinkan pertumbuhan berbagai jenis bakteri yang ada dalam isolasi.
Koloni yang memiliki karakteristik yang sesuai dengan strain Streptococcus pyogenes akan disentuh secara hati-hati dengan platina loop dan kemudian ditaburkan dalam media kultur perawan sehingga diperoleh kultur murni dari mikroorganisme tersebut.
Dari biakan murni ini, semua tes yang diperlukan untuk identifikasi bakteri dapat dilakukan.
Kultur bakteri murni
Untuk mengidentifikasi mikroorganisme secara efisien, seseorang harus bekerja dari kultur murni.
Kultur murni dapat diperoleh seperti dalam kasus contoh sebelumnya dengan menanam kembali koloni terisolasi dari kultur polimikroba, atau ketika sampel ditaburkan yang berasal dari tempat yang biasanya steril dan di sini hanya ada satu patogen (pertumbuhan satu jenis dari bakteri). Contoh: ketika CSF berasal dari pasien dengan meningitis bakteri.
Cara lain adalah dengan melakukan reseeding dari kultur murni lama untuk mendapatkan kultur murni yang diperbarui.
Kultur bakteri campuran
Kultur ini terdiri dari campuran mikroorganisme, seperti yang terjadi di alam. Dalam beberapa proses industri penggunaan tanaman campuran nyaman.
Ini dapat diperoleh melalui penyatuan beberapa kultur murni, karena ini memungkinkan studi tentang hubungan timbal balik bakteri.
Mereka berguna, misalnya, dalam degradasi xenobiotik dalam air limbah industri, karena mereka bertindak sebagai agen biodegradable.
Karakteristik kultur bakteri
Karakteristik morfologi koloni yang diperoleh dalam kultur bakteri dapat sangat bervariasi.
Koloni bisa sangat kecil, sedang, atau besar dan tampak kering atau berlendir, mengkilat atau kusam. Tergantung pada teksturnya, itu bisa bervariasi antara halus dan kasar dan, tergantung pada bentuknya, mereka bisa melingkar, datar, cembung.
Tergantung pada warna mereka dapat: tidak berwarna, putih, kuning, merah muda, fuchsia, merah, oranye, krem, keabu-abuan, kehijauan, coklat, hitam atau dengan kilau logam, tergantung pada bakteri yang terlibat dan media kultur yang digunakan.
Batas koloni bisa teratur atau tidak teratur. Lainnya, di sisi lain, dapat menyajikan film seragam yang didistribusikan di hampir seluruh media yang disebut “bergerombol”. Ini adalah karakteristik dari Proteus sp.
Beberapa kultur bakteri mengeluarkan bau yang cukup khas dari spesies yang terlibat. Misalnya, kultur Pseudomonas aeruginosa memiliki bau buah yang khas, sedangkan genus Proteus memiliki bau busuk yang khas.
Contoh koloni menurut ukurannya
Sangat kecil: Mycoplasma pneumoniae, Francisella tularensis.
Kecil: Streptococcus sp, Enterococcus sp.
Sedang: Keluarga Enterobacteriaceae
Besar: Bacillus cereus, Pseudomonas aeruginosa.
Contoh koloni menurut penampilannya
Kering: Lactobacillus confusus.
Lendir: Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa.
Cemerlang: Klebsiella pneumoniae.
Buram: Enterococcus faecalis, beberapa galur Neisseria gonorrhoeae.
Contoh koloni menurut teksturnya
Koloni halus: Micrococcus luteus
Koloni kasar: Sarcina ventriculi pada agar nutrisi.
Contoh koloni menurut bentuknya
Edaran: Listeria murrayi dan Micrococcus luteus pada agar nutrisi.
Datar: Staphylococcus equorum pada agar nutrisi.
Cembung: Staphylococcus aureus , Klebsiella pneumoniae .
Contoh koloni menurut batasnya
Tepi membulat: Staphylococcus aureus, Escherichia coli .
Batas tidak teratur: Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa .
Tepi berlobus : Bacillus sp.
Contoh koloni menurut warnanya
Transparan atau tidak berwarna: Shigella sp pada agar XLD.
Putih: Staphylococcus hominis pada agar darah.
Beige: Bacillus sphaericus dan Lactobacillus confusus pada agar nutrisi.
Kuning: Staphylococcus aureus dan Elizabethkingia meningoseptica pada agar darah, Pediococcus sp , Staphylococcus lentus pada agar nutrisi,
Merah muda: Escherichia coli pada agar XLD, Micrococcus roseus pada agar nutrisi.
Fuchsia: Escherichia coli pada agar Mac Conkey.
Ungu: Chromobacterium violaceum.
Kemerahan: Serratia marcescens pada suhu kamar pada agar nutrisi.
Oranye: Kurthia zopfii pada agar nutrisi.
Keabu-abuan : Sporosarcina ureae dalam agar ekstrak tanah.
Kehijauan: Pseudomonas aeruginosa pada agar BHI.
Coklat: Enterococcus sp pada agar esculin empedu.
Hitam: Salmonella enteritidis pada agar SS.
Dengan kilau logam: Escherichia coli pada agar Endo.
Metode kultur bakteri
Kultur bakteri aerob atau anaerob fakultatif
Ini adalah metode budidaya yang paling banyak digunakan. Ini karena, pertama-tama, sebagian besar bakteri patogen bagi manusia adalah aerob atau anaerob fakultatif; dan kedua, jauh lebih murah dan lebih mudah daripada kultur anaerobik. Contoh: Mycoplasma pneumoniae dan Escherichia coli berturut-turut.
Kultur bakteri anaerob
Kultur jenis ini membutuhkan supresi oksigen lengkap. Media kultur untuk bakteri anaerob umumnya harus mengandung zat pereduksi seperti: asam askorbat, tioglikolat, sistein, atau belerang untuk menghilangkan efek toksik oksigen di udara.
Beberapa mengandung indikator seperti resazurin, yang berwarna biru dengan adanya oksigen dan tidak berwarna dalam anaerobiosis. Contoh: Clostridium tetani.
Kultur bakteri pada mikroaerofilia
Pelat kultur ditempatkan dalam tudung mikroaerofilik dengan lilin menyala, tertutup. Lilin mengkonsumsi oksigen dan padam. Dalam kondisi ini, beberapa bakteri tumbuh, seperti Streptococcus sp .
Bahan dan persyaratan
bahan
Bahan-bahan yang diperlukan untuk melakukan kultur bakteri adalah: cawan petri atau tabung dengan media kultur atau kaldu, platina loop, sampel, pembakar bunsen atau kompor.
Persyaratan untuk melakukan kultur bakteri
Budidaya bakteri membutuhkan banyak unsur yang harus diperhatikan, seperti nutrisi dalam media, pH, suhu, konsentrasi oksigen, CO2, kelembaban, dan lain-lain.
Nutrisi
Kultur bakteri membutuhkan media kultur yang mengandung unsur makro dan unsur mikro. Di antara makrounsur, zat organik seperti pepton, asam amino, karbohidrat sebagai sumber karbon dan nitrogen dapat disebutkan.
Di antara mikrounsur adalah zat anorganik atau unsur jejak mangan, seng, nikel, boron, klorin, selenium, silikon, kobalt, tembaga, dan lain-lain.
Konsentrasi ion hidrogen (pH)
Konsentrasi ion hidrogen (H + ) dan ion hidroksil (OH – ) dalam media di mana kultur akan berkembang sangat penting, karena ini menentukan pH.
PH yang paling umum digunakan adalah netral (pH = 7,0), namun mungkin ada media di mana pH asam atau basa cocok, misalnya jika Anda ingin mengisolasi bakteri asidofilik atau basa.
Suhu
Suhu merupakan faktor yang sangat penting yang mempengaruhi pertumbuhan kultur bakteri. Bakteri dapat bersifat psikrofilik (tumbuh pada suhu <20°C, mesofilik (antara 20°C dan 42°C), termofilik (40°C hingga 70°C), hipertermofilik (70°C – 105°C).
kebutuhan oksigen
Aerobik: mereka tumbuh dengan adanya oksigen.
Mikroaerofil: mereka tumbuh dengan adanya 5-10% CO2 .
Anaerob ketat: tumbuh tanpa adanya oksigen.
Anaerob fakultatif: tumbuh dengan adanya oksigen atau tanpa oksigen.
Aerotoleran: mereka tumbuh dengan baik tanpa oksigen dan mentolerir sedikit oksigen.
media budaya
Media kultur adalah preparat nutrisi khusus yang disiapkan di laboratorium untuk mendapatkan pertumbuhan atau kultur mikroba. Media ini bervariasi dalam konsistensi, komposisi, dan fungsi. Setiap laboratorium akan menyiapkan jenis media kultur yang sesuai dengan kebutuhannya.
Koleksi kultur bakteri
Ada lembaga atau organisasi yang didedikasikan untuk pengumpulan, karakterisasi, pemeliharaan dan distribusi strain bakteri kepentingan klinis, lingkungan atau industri.
Strain ini digunakan untuk pekerjaan penelitian dan untuk melakukan kontrol kualitas pada media kultur.
Contoh: strain American Type Culture Collection, Venezuelan Center for Collection of Microorganisms (CVCM) dan strain National Institute of Hygiene, Epidemiology and Microbiology of Cuba (INHEM), antara lain.
Referensi
- Benavides G, Hermida A. Isolasi dan identifikasi flora bakteri asli dari tanah Cruz Verde dan Guasca páramos. (Cundinamarca). 2008. Bogota. Tersedia di: javeriana.edu.co/biblos
- Hans S. Mikrobiologi Umum. Edisi Omega. 1991. Barcelona, Spanyol. Tersedia di: biolprokaryotes.files
- Weng Z, Junco R, Díaz R. Koleksi kultur mikroba: Catatan tentang perkembangannya. Rev Cubana Hig Epidemiol , 2003; 41 (1). Tersedia di: scielo.sld.cu/scielo.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosa Mikrobiologi. edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosa Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 edisi Editorial Panamericana SA Argentina.
