kaldu malonat adalah medium cairan biakan yang digunakan untuk tes diagnostik (malonat), digunakan untuk membedakan beberapa genera dari keluarga Enterobacteriaceae. Itu dibuat oleh Leifson pada tahun 1933 dan kemudian dimodifikasi oleh Ewing, yang menambahkan sejumlah kecil dekstrosa dan ekstrak ragi ke formula aslinya.
Medium saat ini terdiri dari ekstrak ragi, amonium sulfat, dipotassium phosphate, monopotassium phosphate, natrium klorida, natrium malonat, dekstrosa, dan bromotimol biru. Tes ini umumnya termasuk dalam baterai identifikasi biokimia untuk Enterobacteriaceae, membantu membedakan genera dan spesies tertentu.
Representasi grafis dari tes malonat. A. Uji negatif, B. (Pengasaman) Uji negatif, C. (Alkalisasi sedang) Uji positif. Sumber: Tabung warna publicdomainpictures.net
Uji malonat terutama didasarkan pada kemampuan beberapa mikroorganisme untuk menggunakan natrium malonat sebagai satu-satunya sumber karbon dan amonium sulfat sebagai sumber nitrogennya.
Tes malonat biasanya positif pada beberapa spesies genus Enterobacter, Klebsiella, dan Citrobacter. Sedangkan sebagian besar spesies dari genus Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus dan Providencia, memberikan reaksi negatif.
Indeks artikel
Dasar
Uji malonat terdiri dari menunjukkan bakteri yang mampu menggunakan natrium malonat sebagai satu-satunya sumber karbon dan amonium sulfat sebagai sumber nitrogen.
Sebagian besar enterobakteri yang tidak menggunakan malonat dapat tumbuh pada media ini, dengan nutrisi dekstrosa dan ekstrak ragi.
Dalam hal ini, setiap usaha alkalinisasi dengan menggunakan pepton akan dilawan oleh produksi asam yang dihasilkan oleh fermentasi dekstrosa. Demikian juga, dipotassium dan monopotassium phosphate bertindak sebagai buffer, menjaga pH pada 6,7.
Itu sebabnya, ketika tes negatif, warna kaldu tetap sama (hijau). Pada kesempatan langka medium dapat menjadi asam karena fermentasi dekstrosa; Tanpa menggunakan pepton dan indikator pH akan mengubah warna medium menjadi kuning. Agar ini terjadi, pH harus turun menjadi 6.
Sekarang, ketika tes ini positif, dikatakan bahwa mikroorganisme masing-masing menggunakan malonat dan amonium sulfat sebagai sumber karbon dan nitrogen, tanpa menggunakan komponen lain.
Dalam hal ini, media menjadi basa karena pelepasan natrium dan pembentukan NaOH. Dalam pengertian ini, indikator pH (bromotimol biru) mengubah warna media dari hijau menjadi biru ketika pH sama dengan atau lebih besar dari 7,6. Biru bisa terang atau dalam (biru Prusia).
Akhirnya, natrium klorida mempertahankan osmolaritas media dan air adalah pengencer semua komponen.
Penafsiran
Kaldu Warna Sama (Hijau) – Uji Negatif
Kaldu kuning: tes negatif
Kaldu biru muda atau biru tua: tes positif
Ada varian yang disebut kaldu fenilalanin malonat, juga disebut medium Shaw dan Clarke. Dalam hal ini, dua tes dapat dianalisis, penggunaan malonat sebagai sumber karbon dan produksi asam piruvat dari fenilalanin.
Persiapan
Kaldu malonat
Jumlah gram yang ditentukan oleh sisipan dari perusahaan komersial yang dipilih ditimbang (dapat bervariasi dari satu ke yang lain). Berat gram disuspensikan dalam satu liter air suling. Panaskan sedikit sampai benar-benar larut. Distribusikan 3 ml media ke dalam tabung reaksi 13/100 dengan tutup kapas.
Sterilkan dalam autoklaf pada suhu 121 ° C selama 15 hingga 20 menit.
Dinginkan sebelum digunakan. Jika tidak akan segera digunakan, simpan di lemari es sampai digunakan. Bawa kaldu ke suhu kamar sebelum diinokulasi.
PH media harus 6,7 ± 0,2. Warna media yang disiapkan adalah hijau botol.
Kaldu Fenilalanin Malonat
Timbang 11 g media dehidrasi dan larutkan dalam 1 liter air suling. Persiapan lainnya sama seperti yang dijelaskan sebelumnya.
Dapat juga dibuat dengan menambahkan 2 g/L fenilalanin ke dalam media kaldu malonat sebelum disterilkan.
Menggunakan
Ini digunakan sebagai bagian dari baterai tes biokimia yang dirakit untuk identifikasi bakteri dari keluarga Enterobacteriaceae.
Membantu membedakan antara:
-Genus Klebsiella dan Enterobacter (+) dari genus Escherichia dan Serratia (-).
-spesies Salmonella enterica ssp arizonae , Salmonella enterica ssp salame dan Salmonella enterica ssp diarizonae (+), spesies Salmonella enterica ssp enterica (-).
-Dari genus Klebsiella umumnya (+) dari genus Actinobacillus (-).
-Kadang-kadang dapat membantu membedakan genus dan spesies bakteri yang tidak termasuk dalam famili Enterobacteriaceae, seperti di antara basil Gram negatif yang tidak memfermentasi Alcaligenes faecalis (+) dan Acinetobacter sp (-).
Sumber: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosa Mikrobiologi. edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.
Proses
Di bawah korek api, sebagian dari cologne murni diambil, menggunakan pegangan platinum yang disterilkan dan didinginkan dengan benar. Sampel yang diambil (inokulum ringan) dilarutkan dalam kaldu malonat. Inkubasi dengan tutup longgar dalam aerobiosis pada 35 ° C ± 0,2 selama 24 hingga 48 jam.
Kaldu malonat juga dapat diinokulasi dari kultur 18-24 jam dalam kaldu kedelai trypticase. Dalam hal ini, 0,01 ml diambil dengan pipet steril dan kaldu malonat diinokulasi. Inkubasi dengan tutup longgar dalam aerobiosis pada 35 ° C ± 0,2 selama 24 hingga 48 jam.
Pada akhir waktu, hasilnya ditafsirkan. Setiap jejak warna biru setelah 48 jam inkubasi harus dianggap positif. Tes tidak boleh ditafsirkan sebagai negatif sampai waktu inkubasi 48 jam telah berlalu.
Dalam kasus penggunaan varian kaldu fenilalanin malonat, malonat diinterpretasikan terlebih dahulu dan kemudian ditambahkan 5 tetes HCl 1N dan 3-5 tetes besi klorida 8%. Warna hijau tua ditafsirkan sebagai tes positif untuk fenilalanin. Sebaliknya, jika media berubah menjadi biru pucat, tes negatif untuk fenilalanin.
QA
Untuk melakukan kontrol sterilitas media, satu atau dua kaldu harus diinkubasi pada suhu 35°C ± 0,2 selama 24 jam inkubasi. Setelah waktu ini seharusnya tidak ada kekeruhan atau perubahan warna.
Untuk kontrol kualitas, strain yang dikenal atau bersertifikat dapat digunakan, seperti: Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, Salmonella enterica ssp arizonae ATCC 13314 dan Escherichia coli ATCC 25922.
Hasil yang diharapkan adalah:
- Enterobacter aerogenes , Klebsiella pneumoniae dan Salmonella enterica ssp arizonae memberikan reaksi positif (warna biru sedang).
- Untuk Escherichia coli hasilnya harus negatif yaitu diharapkan tidak terjadi perubahan warna (hijau) atau menjadi kuning karena fermentasi glukosa.
Keterbatasan
Jangan gunakan kaldu yang menunjukkan kekeruhan, endapan, perubahan warna atau tanda-tanda kerusakan.
Referensi
- Pedraza J, Sanandres N, Varela Z, Aguirre E, Camacho J. Isolasi mikrobiologi Salmonella spp . dan alat molekuler untuk pendeteksiannya. Kesehatan Uniorte. Barranquilla (Kol.) 2014; 30 (1): 73-94. Tersedia di: scielo.org.co
- BBL. Kaldu Malonat, Ewing dimodifikasi. 2007. Tersedia di: bd.com
- Laboratorium Senna. kaldu malonato. Tersedia di: cientificasenna.com
- RenyLab. kaldu malonato. 2013.Tersedia di: es.renylab.ind.br
- Diagnostik Mbiolog. kaldu malonato. Tersedia di: mbiolog.com
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosa Mikrobiologi. edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.
- Laboratorium Conda Pronadisa. Kaldu fenilalanin malonat. Tersedia di: condalab.com