biuret adalah reagen yang digunakan untuk penentuan protein rantai panjang dan rantai pendek. Ini terutama digunakan di bidang kimia analitik dan urinalisis untuk menyelidiki konsentrasi protein total dalam serum, plasma, dan urin.
Nilai protein dapat meningkat atau menurun pada patologi tertentu. Gejala hipoproteinemia biasanya terjadi pada pasien dengan penyakit ginjal, pada pasien malnutrisi, dan pada pasien dengan infeksi kronis.
Struktur kimia kompleks yang terbentuk pada reaksi Biuret Uji Biuret Positif. Sumber: Yikrazuul [Domain publik] / flickr
Sementara hiperproteinemia diamati pada patologi seperti multiple myeloma, lupus eritematosus sistemik, endokarditis bakteri, meningitis bakteri, makroglobulinemia Waldenstrom, dan lainnya.
Di sisi lain, adanya protein dalam urin disebabkan oleh penyaringan albumin oleh ginjal. Ini adalah perilaku patologis yang harus dipelajari.
Dalam hal ini, Biuret sangat berguna, karena memungkinkan untuk mengukur keberadaan protein dalam serum, plasma, urin, di antara banyak sampel lainnya.
Bahkan Biuret dapat digunakan untuk menyelidiki keberadaan dan konsentrasi protein dalam sampel yang kurang dieksplorasi atau sampel dengan komposisi yang tidak diketahui. Oleh karena itu, banyak digunakan di daerah penelitian.
Tes Biuret didasarkan pada mendeteksi ikatan peptida. Tes berlangsung dalam media alkali. Sampel harus mengandung setidaknya dua ikatan peptida untuk membentuk kompleks ungu-ungu. Kompleks ini dibentuk oleh penyatuan ikatan dan ion tembaga.
Indeks artikel
Dasar
Reagen Biuret terdiri dari kalium hidroksida, tembaga sulfat, dan natrium dan kalium tartrat. Natrium hidroksida digunakan untuk membuat media menjadi basa, karena kondisi ini penting untuk berlangsungnya reaksi.
Zat yang bereaksi dengan protein adalah tembaga sulfat, sedangkan natrium tartrat berfungsi untuk mencegah terbentuknya tembaga hidroksida yang cenderung mengendap dan mengganggu reaksi.
Jika zat dengan ikatan peptida (polipeptida atau protein) ditemukan dalam sampel, tes akan positif.
Suatu reaksi diinterpretasikan sebagai positif ketika larutan berubah menjadi ungu. Warna dihasilkan oleh pembentukan kompleks antara setidaknya dua ikatan peptida yang memiliki gugus CO-NH dan kation tembaga.
Kompleks violet dapat dibentuk dengan dua cara: pertama dengan melepaskan proton dari gugus amida yang mengikat logam (depronotasi), dan yang lain dengan penyatuan elektron oksigen dan nitrogen yang bebas dan mengikat dengan tembaga. .
Reaksi ini dapat bervariasi dalam intensitas dan warna tergantung pada jenis protein.
Tes dapat dilakukan secara kualitatif atau kuantitatif. Dalam bentuk kualitatif, dilaporkan sebagai positif atau negatif. Sedangkan dalam bentuk kuantitatif konsentrasinya dapat diukur dengan metode spektrofotometri.
Reaksi dibaca antara 540-560 nm. Intensitas warna berbanding lurus dengan konsentrasi ikatan peptida dalam sampel.
Reagen
-20% natrium hidroksida (NaOH)
-Cupric sulfate pentahydrate 1% (CuSO 4. 5H 2 O)
-Campuran natrium dan kalium tartrat tetrahidrat (KNaC 4 H 4 O 6 · 4H 2 O)
Stabilitas reagen biuret
-Harus disimpan dalam lemari pendingin.
Proses
Teknik
-Tempatkan 100 l sampel atau standar yang akan dianalisis dalam tabung reaksi.
-Tambahkan 2 ml natrium hidroksida.
-Campur dengan sangat baik.
– Tambahkan 5 ml reagen Biuret.
-Campur dan biarkan selama 25 menit pada suhu kamar, tutup dan lindungi dari cahaya.
-Amati terbentuknya warna atau tidak dan ukur secara spektrofotometri.
Kurva kalibrasi
Albumin serum sapi dapat digunakan sebagai standar untuk melakukan kurva kalibrasi. Berbagai konsentrasi disiapkan darinya. Misalnya 25, 50, 75, 100, 125 dan 150%.
Reaksi diatur dengan semua konsentrasi yang diketahui ini dan absorbansi dibaca pada panjang gelombang 540 nm. Dengan data konsentrasi yang diketahui dan pembacaan absorbansi dibuat kurva kalibrasi.
Dalam setiap penentuan atau batch sampel yang diproses, disarankan untuk memasang standar. Albumin serum sapi 0,1-2 mg/ml dapat digunakan sebagai standar kalibrasi.
Pengukuran dilakukan pada spektrofotometer pada 540 nm.
Linearitas terpenuhi hingga konsentrasi 12 g/dl.
Gangguan
Zat yang mengganggu uji Biuret
Meskipun tidak terlalu sering, perlu dicatat bahwa beberapa zat dapat mengganggu selama pelaksanaan tes ini. Misalnya, adanya amonia dapat menghambat pembentukan warna.
Demikian juga, zat lain dapat menyerap pada panjang gelombang yang sama, seperti pigmen tertentu.
Di sisi lain, interferensi dapat dihasilkan ketika zat selain ikatan peptida membentuk kompleks dengan garam tembaga. Contoh: beberapa karbohidrat dan lipid tertentu.
Jika sampel yang akan dianalisis menunjukkan beberapa jenis endapan, sampel tersebut harus disaring atau disentrifugasi sebelum memasang pengujian.
Zat yang tidak mengganggu uji Biuret
Tes ini tidak terpengaruh oleh adanya:
-Bilirubin sampai konsentrasi 20 mg/dl.
-Hemoglobin sampai konsentrasi 750 mg/dl.
-Dextran hingga konsentrasi 30 g/L.
-Trigliserida hingga konsentrasi 4000 mg/dl.
Keuntungan
-Ini adalah metode sederhana untuk dieksekusi.
-Ini adalah ujian ekonomi.
-Ini memiliki spesifisitas yang tinggi untuk protein.
– Sedikit gangguan.
Kekurangan
Ini memiliki sensitivitas yang buruk untuk mendeteksi jumlah protein yang rendah. Pekerjaan yang dilakukan oleh Fuentes et al menegaskan bahwa metode uji Biuret memiliki batas deteksi protein 1 mg / ml dan batas kuantifikasi 3 mg / ml.
Namun, penelitian lain yang dilakukan di University of Amazonia melaporkan nilai yang jauh lebih rendah. Batas deteksi yang dilaporkan oleh penelitian adalah 0,020 mg / ml dan batas kuantifikasi adalah 1,33 mg / ml.
Kegunaan
Reagen atau uji Biuret digunakan untuk penentuan protein dalam sampel klinis dan non-klinis di laboratorium rutin dan penelitian.
Patologi yang terjadi dengan peningkatan atau penurunan protein
Dalam banyak patologi, penting untuk menentukan konsentrasi protein total dalam sampel klinis, yang mungkin tinggi atau rendah.
Mereka diangkat dalam:
-Mieloma multipel,
– Lupus eritematosus sistemik
– Endokarditis bakterialis
-Bakteri meningitis,
makroglobulinemia Waldenstrom, antara lain.
Itu berkurang di:
-Insufisiensi ginjal
-Orang dengan tingkat kekurangan gizi yang parah,
-Pasien dengan infeksi kronis, antara lain.
Sampel klinis
Sampel klinis yang paling umum adalah serum, plasma, dan urin. Nilai normal protein dalam serum atau plasma adalah 6,0-8,8 gr/dl.
Konsentrasi protein dalam urin pada orang dewasa tidak melebihi 150 mg / 24 jam.
Protein urin / rasio kreatinin urin nilai normal
Bayi: <0,50 mg
Anak-anak 2 tahun dan lebih tua: indeks: 0,20 mg
Dewasa: <0,2 mg
Sampel non-klinis
Reaksi Biuret dapat digunakan untuk banyak jenis sampel non-klinis, seperti produk susu, antibisa, atau zat yang tidak diketahui yang ingin Anda selidiki keberadaan proteinnya.
Referensi
- Vázquez J, Guerra L, Quintana J, Ramírez J, Fernando Ry Vázquez Y. (2014). Karakterisasi fisikokimia dan kandungan protein cairan ekstrak tiram mangrove (Crassostrearizophorae). Jurnal Kimia Kuba , 26 (1), 66-74. Diakses pada 26 Juni 2019, dari http: //scielo.sld
- Chaparro S, Lara A, Sandoval A, Sosa S, Martínez J, Gil J. Karakterisasi fungsional almond dari biji mangga ( Mangifera indica L. ) Revista Ciencia en Desarrollo . 2015; 6 (1): 67-75
- “Biuret.” Wikipedia, Ensiklopedia Bebas . 19 Juni 2019, 16:37 UTC. 26 Jun 2019, 22:18 <en.wikipedia.org/
- Fuentes F, Quispe I, García J. Standarisasi metode Biuret untuk mengukur protein total dalam serum antibotropik polivalen yang diproduksi di INS National Center for Biological Products. Bol – Inst Nac Salud 2012; 18 (11-12). Tersedia di: repositorio.ins.gob.pe
- Laboratorium Anggur. Protein total. Metode kolorimetri untuk penentuan total protein dalam serum dan plasma. Tersedia di: wiener-lab.com.ar
