Apa fungsi tubulin?
Tubulin adalah protein yang berpolimerisasi menjadi rantai panjang atau filamen yang membentuk mikrotubulus, serat berongga yang berfungsi sebagai sistem kerangka sel hidup. Mikrotubulus memiliki kemampuan untuk berpindah melalui berbagai formasi yang memungkinkan sel untuk mengalami mitosis atau mengatur transportasi intraseluler.
Apakah tubulin termasuk mikrotubulus?
Mikrotubulus adalah polimer tubulin yang membentuk bagian dari sitoskeleton dan memberikan struktur dan bentuk pada sel eukariotik. Mereka dibentuk oleh polimerisasi dimer dua protein globular, alfa dan beta tubulin menjadi protofilamen yang kemudian dapat bergabung secara lateral untuk membentuk tabung berongga, mikrotubulus.
Apakah tubulin merupakan protein globular?
Berbeda dengan filamen menengah, yang terdiri dari berbagai protein berserat yang berbeda, mikrotubulus terdiri dari satu jenis protein globular, yang disebut tubulin. Tubulin adalah dimer yang terdiri dari dua polipeptida 55-kd yang terkait erat, -tubulin dan -tubulin.
Mengapa protein berbentuk bulat?
Struktur bola diinduksi oleh struktur tersier protein. Asam amino apolar (hidrofobik) molekul terikat ke bagian dalam molekul sedangkan asam amino polar (hidrofilik) terikat ke luar, memungkinkan interaksi dipol-dipol dengan pelarut, yang menjelaskan kelarutan molekul.
Apakah aktin merupakan protein globular?
Aktin adalah protein globular yang ada dalam bentuk monomer (G-aktin) dan bentuk filamen polimer (F-aktin).
Apakah tubulin merupakan kontrol pemuatan yang baik?
Saat ini, protein housekeeping (HKP) seperti aktin, tubulin, atau GAPDH sering digunakan untuk memeriksa pemuatan yang sama atau untuk mengkompensasi perbedaan pemuatan potensial. Pewarnaan protein total pada membran blotting telah muncul sebagai kontrol pemuatan yang lebih baik.
Mengapa aktin digunakan dalam Western blots?
Beta-aktin, biasanya digunakan sebagai kontrol pemuatan untuk Western Blot untuk menormalkan kadar protein yang terdeteksi dengan mengonfirmasi bahwa pemuatan protein sama di seluruh gel.
Mengapa protein housekeeping digunakan di Western blot?
Antibodi yang mendeteksi protein yang diekspresikan tinggi dalam sel atau tipe sampel tertentu. Dikodekan oleh ‘gen rumah tangga’, protein ini dipilih karena keterlibatan penting mereka dalam mempertahankan fungsi seluler.
Berapa banyak protein yang harus saya muat dalam western blot?
Muat sampel yang mengandung protein dalam jumlah yang sama (protein 10-50 g/jalur dari lisat sel atau protein murni 10-100 ng/jalur) yang disiapkan dalam buffer sampel ke dalam sumur SDS-PAGE. Sertakan penanda berat molekul di salah satu jalur.
Bagaimana Anda menormalkan data Western blot?
Ada dua pendekatan untuk normalisasi saat mengevaluasi western blot: deteksi protein tunggal dan normalisasi protein total. Sejauh ini pendekatan yang paling umum untuk deteksi protein tunggal adalah dengan menggunakan protein rumah tangga. Kelimpahan mereka dalam sampel berfungsi sebagai proksi untuk seluruh populasi protein.
Apakah vinculin kontrol pemuatan yang baik?
Protein sitoskeletal lain, vinculin, telah digunakan sebagai kontrol pemuatan Western blot juga. Ini adalah protein besar; berat molekul vinculin manusia adalah 117 kDa dengan 1066 asam amino. Ini dapat digunakan sebagai kontrol pemuatan untuk protein dengan berat molekul tinggi.
Bahkan dengan pemuatan sampel yang konsisten dan normalisasi yang akurat, replikasi masih diperlukan. Replikasi membantu Anda membedakan apakah perbedaan dalam kuantisasi relatif disebabkan oleh perubahan nyata dalam ekspresi protein, atau mungkin perbedaan kecil dalam teknik Western blotting.
Apa yang dilakukan kontrol pemuatan?
Kontrol pemuatan adalah protein yang digunakan sebagai kontrol dalam percobaan Western blotting. Biasanya, kontrol pemuatan adalah protein dengan ekspresi tinggi dan ada di mana-mana, seperti beta-aktin atau GADPH. Mereka digunakan untuk memastikan bahwa protein telah dimuat secara merata di semua sumur.
Mengapa Anda memerlukan kontrol pemuatan?
Kontrol pemuatan biasanya berupa protein yang menunjukkan ekspresi konstitutif tingkat tinggi dalam jenis sel atau sampel yang Anda pelajari. Kontrol pemuatan sangat penting untuk memastikan keandalan data Anda saat membandingkan ekspresi protein dalam sampel yang berbeda.
Mengapa Gapdh digunakan sebagai kontrol?
GAPDH umumnya digunakan oleh peneliti biologi sebagai kontrol pemuatan untuk western blot dan sebagai kontrol untuk qPCR, karena gen GAPDH sering diekspresikan secara stabil dan konstitutif pada tingkat tinggi di banyak jaringan dan sel, yang dianggap sebagai gen rumah tangga.
Apa yang dimaksud dengan kontrol pemuatan di blot utara?
Abstrak. Pemilihan kontrol pemuatan yang benar dalam normalisasi Northern blot adalah sesuatu yang penting untuk mendapatkan hasil yang valid. Gen housekeeping banyak digunakan sebagai kontrol pembebanan dan asumsi dibuat bahwa gen tersebut melawan perbedaan beban antar sampel.
Apa itu antibodi Gapdh?
Produk seperti antibodi GAPDH mendeteksi protein “housekeeping” yang banyak didistribusikan dalam sel. Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase, atau GAPDH, adalah enzim metabolisme stabil yang terdiri dari empat subunit 30-40 kDa. Ini sangat diekspresikan di sebagian besar sel, memainkan peran penting dalam jalur glikolitik.
Apa fungsi dari Gapdh?
GAPDH menstabilkan Siah, memfasilitasi degradasi protein nuklirnya seperti inti represor (N-CoR). GAPDH inti diasetilasi oleh protein pengikat p300/CREB (CBP), yang selanjutnya merangsang aktivitas katalitik p300/CBP.
Apa itu antibodi p53?
Anti-p53 Antibodi (DO-1) direkomendasikan untuk mendeteksi p53 tipe liar dan mutan dalam kondisi denaturasi dan non-denaturasi tikus, tikus dan manusia asal oleh WB, IP, IF, IHC(P) dan FCM.
Gapdh ukuran berapa?
146 kDa
Berapa kDa Gapdh?
Molekul GAPDH adalah homotetramer yang terdiri dari 36 kDa subunit. Jadi berat molekul untuk keseluruhan molekul adalah 144 kDa.
Apa yang dimaksud dengan kontrol pemuatan Western blot?
Kontrol pemuatan adalah antibodi yang digunakan untuk mendeteksi protein dalam sampel. Ketika western blot digunakan untuk menentukan tingkat ekspresi protein dalam sampel, kontrol pemuatan memastikan bahwa hasilnya bukan karena kesalahan pemuatan atau transfer protein.
Gel apa yang digunakan dalam Western blotting?
Elektroforesis gel Western blot menggunakan dua jenis gel agarosa yang berbeda: gel susun dan gel pemisah. Gel susun yang lebih tinggi sedikit asam (pH 6,8) dan memiliki konsentrasi akrilamida yang lebih rendah membuat gel berpori, yang memisahkan protein dengan buruk tetapi memungkinkan mereka untuk membentuk pita tipis yang berbatas tegas.