Tes Voges-Proskauer adalah tes biokimia yang digunakan untuk membantu mengidentifikasi bakteri yang termasuk dalam famili Enterobacteriaceae . Hal ini sangat berguna untuk membedakan strain Escherichia coli dari Klebsiella dan Enterobacter , antara lain.
Pengujian dilakukan dalam media kultur cair yang disebut Methyl Red – Voges Proskauer atau lebih dikenal dengan singkatan RM/VP. Medium ini terdiri dari buffered polypeptone, glukosa, dipotassium phosphate, dan air suling .
Media komersial Methyl Red-Voges Proskauer (RM / VP) / Uji VP positif dan negatif masing-masing. Sumber: Foto diambil oleh penulis MSc. Marielsa Gil / Sudipta.nov15 [CC BY-SA 3.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0)], dari Wikimedia Commons
Media RM / VP saat ini adalah modifikasi dari media Clark dan Lubs, yang awalnya mengandung konsentrasi pepton dan glukosa yang lebih rendah. Jadi, lebih sedikit ion hidrogen, yang diperlukan untuk reaksi Voges-Proskauer positif, yang dihasilkan.
Tes ini didasarkan pada kemampuan mikroorganisme untuk menggunakan glukosa melalui rute butilena-glikol, dan membentuk produk akhir netral yang disebut asetoin, dengan adanya oksigen dan pH basa.
Pada media RM/VP, selain dapat mengungkap uji Voges-Proskauer, uji methyl red juga dapat terungkap.
Indeks artikel
Dasar
Dasar tes Voges-Proskauer
Pluripeptones hadir dalam media menyediakan kebutuhan nutrisi penting untuk pertumbuhan bakteri. Untuk bagiannya, glukosa adalah senyawa utama. Banyak bakteri memiliki kemampuan untuk memetabolisme glukosa dan membentuk asam piruvat.
Asam piruvat adalah titik tengah dalam metabolisme glukosa dan dari sana setiap mikroorganisme dapat mengambil rute yang berbeda. Beberapa akan membentuk asam campuran, seperti asam laktat, asam asetat, asam format, dan asam suksinat, dan lainnya akan membentuk produk netral seperti 2,3-butanediol.
Tes Voges-Proskauer mengungkapkan kemampuan mikroorganisme untuk membentuk asetil metil karbinol (asetoin), produk antara 2,3-butanediol dalam kondisi aerobik.
Asetoin direduksi dan membentuk 2,3-butanediol, tetapi reaksi ini reversibel, oleh karena itu jika 2,3-butanediol dioksidasi, terbentuk asetoin. Oleh karena itu, oksigen sangat penting.
Dipotassium phosphate adalah buffer yang menyangga campuran hingga pH 6,9 ± 0,2.
Pengungkapan bukti dan dasar interpretasi
Untuk mendemonstrasikan reaksi tersebut, harus dilakukan pengembangan dengan menggunakan dua reagen (pereaksi Barrit), yang dikenal sebagai Voges A dan Voges B.
Voges A adalah larutan 5% -naftol, dan Voges B adalah sediaan kalium hidroksida 40%. Jika kalium hidroksida tidak tersedia, dapat diganti dengan 40% natrium hidroksida.
-Naphthol merupakan katalis yang akan meningkatkan intensitas warna reaksi, sehingga pengujian menjadi lebih sensitif. -naftol harus selalu ditambahkan terlebih dahulu, mengocok tabung sehingga media bersentuhan dengan oksigen. Dengan cara ini acetoin yang ada dioksidasi menjadi diacetyl, dan 2,3-butanediol dioksidasi menjadi acetoin, meneruskannya ke diacetyl.
Ini adalah bagaimana -naftol akan mengikat diacetyl, yang pada gilirannya telah bergabung dengan inti guanidin yang ada dalam asam amino arginin, yang terakhir berasal dari pluripeptones.
Untuk bagiannya, kalium atau natrium hidroksida bertanggung jawab untuk menyerap CO 2 dan bereaksi dengan pepton. Reaksi ini menyebabkan pembentukan warna salmon-pink, terlihat jelas setelah mengocok tabung dengan sangat baik.
Jumlah diacetyl, peptone, dan -naphthol yang benar harus dicampur agar warna muncul seketika. Jika ini tidak terjadi, selang didiamkan selama 15 menit sebelum diinterpretasikan.
Biasanya tes positif setelah 2 sampai 5 menit, ketika warna merah muda samar dapat terlihat. Jika didiamkan selama 30 menit sampai 1 jam intensitas warna akan maksimal (merah intens).
Tes negatif akan muncul ketika kaldu berubah menjadi kuning. Setelah 1 jam, jika tes negatif, warna tembaga dapat terbentuk sebagai akibat dari reaksi kalium hidroksida pada -naftol.
Persiapan
MR / VP sedang
Timbang 17 g media kultur dehidrasi dan larutkan dalam satu liter air suling. Biarkan selama 5 menit. Panaskan hingga mendidih hingga larut sempurna. Sajikan 3 sampai 4 ml dalam tabung dan sterilkan dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit.
Media kultur yang dikeringkan berwarna krem dan media yang disiapkan berwarna kuning muda.
PH akhir media adalah 6,9 ± 0,2.
Reagen Voges A
Timbang 5 g -naftol dan larutkan dalam 50 ml etil alkohol (absolut). Kemudian dilanjutkan penambahan etil alkohol hingga mencapai 100 ml.
Reagen Voges B
Timbang 40 g kalium hidroksida dan larutkan dalam 50 ml air suling dalam gelas kimia. Gelas harus ditempatkan dalam penangas air dingin untuk mengontrol suhu, karena ketika sediaan dilarutkan, suhu naik tajam.
Setelah larutan dingin, dipindahkan ke labu ukur dan ditepatkan hingga 100 mL dengan aquades.
Prosedur tes Voges-Proskauer
Untuk melakukan uji Voges-Proskauer, kaldu RM / VP diinokulasi dengan mikroorganisme yang diteliti, dari kultur murni selama 18 hingga 24 jam.
Inokulum tidak boleh terlalu padat. Itu diinkubasi pada 35-37 ° C selama 24 hingga 48 jam, meskipun inkubasi selama beberapa hari kadang-kadang diperlukan. Cowan dan Steel berpendapat bahwa 5 hari adalah waktu inkubasi minimum yang diperlukan untuk mendeteksi semua spesies Voges-Proskauer (VP) positif dari famili Enterobacteriaceae.
Pengembangan tes
Pisahkan 1 mL alikuot ke dalam tabung dan kembangkan sebagai berikut: Tempatkan 12 tetes (0,6 mL) reagen Voges A dan 4 tetes (0,2 mL) Voges B. Campur hingga diangin-anginkan dan biarkan mengendap selama 5 – 10 menit sebelum ditafsirkan. Namun, jika tes masih negatif, diamkan dan amati tabung setelah 30 menit hingga 1 jam.
Munculnya warna merah muda-merah muda menunjukkan bahwa reaksi Voges-Proskauer positif. Jika media tetap kuning, reaksinya negatif.
Menambahkan pengembang dalam urutan dan jumlah yang ditunjukkan sangat penting untuk menghindari negatif palsu.
Menggunakan
Tes Voges-Proskauer berguna untuk membedakan antara strain E. coli yang VP negatif, dari genus Klebsiella, Enterobacter, Serratia, antara lain yang VP positif.
Sumber: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosa Mikrobiologi. edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.
QA
Strain kontrol dapat digunakan untuk menguji kualitas media yang disiapkan, termasuk Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Proteus mirabilis ATCC 43071, Salmonella typhimurium dan Enterobacter cloacae ATCC 13047.
Hasil yang diharapkan adalah reaksi Voges-Proskauer positif hanya untuk K. pneumoniae dan E. cloacae . Selebihnya memberikan reaksi negatif.
Referensi
- Laboratorium Britannia. MR-VP Medium. 2015.Tersedia di: www.britanialab.com
- Laboratorium Mikrokit. M-Ident Voges Proskauer. 2014. Tersedia: http://www.medioscultivo.com
- Mac Faddin J. (2003). Tes biokimia untuk identifikasi bakteri yang penting secara klinis. edisi ke-3 Editorial Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosa Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 edisi Editorial Panamericana SA Argentina.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosa Mikrobiologi. edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.
