MRS agar adalah budaya medium padat selektif digunakan untuk isolasi dan enumerasi bakteri asam laktat, terutama dari genus Lactobacillus. Agar ini dibuat pada tahun 1960 oleh Man, Rogosa dan Sharpe, dengan nama yang sama, tetapi karena kerumitannya, singkatan MRS sering digunakan.
Ini terdiri dari proteosa pepton, ekstrak daging, ekstrak ragi, glukosa, sorbitan monoleat, dipotassium fosfat, natrium asetat, amonium sitrat, magnesium sulfat, mangan sulfat, dan agar.
Man Rogosa dan Sharpe Agar (MRS) diunggulkan dengan Lactobacillus sp. Sumber: Foto yang disumbangkan untuk artikel ini oleh penulis: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Foto yang diambil selama investigasi berjudul: Evaluasi bakteri asam laktat dan Bifidobacteria dengan potensi probiotik dalam ASI dan kotoran bayi .
Komposisi ini memungkinkan perkembangan bakteri asam laktat yang tepat dari sampel klinis, seperti feses, keputihan, sampel oral dan ASI, serta makanan susu dan daging.
Ini tidak digunakan secara rutin di laboratorium klinis, karena bakteri asam laktat jarang terlibat dalam proses penyakit. Namun, di bidang mikrobiologi makanan, penggunaan agar MRS lebih sering.
Di sisi lain, media ini digunakan oleh beberapa Pusat Penelitian yang bertujuan untuk mempelajari bakteri asam laktat.
Indeks artikel
Dasar
Agar Man, Rogosa dan Sharpe memiliki komposisi yang cukup kompleks. Dengan merinci fungsi masing-masing komponennya, alasannya dapat dijelaskan.
Proteosa pepton, ekstrak daging, ekstrak ragi dan glukosa adalah nutrisi yang menyediakan sumber karbon, nitrogen, vitamin dan mineral yang diperlukan untuk pertumbuhan bakteri. Selanjutnya, glukosa adalah sumber energi universal yang digunakan di sebagian besar media kultur.
Di sisi lain, untuk mendorong pertumbuhan bakteri asam laktat, keberadaan kofaktor (kation) penting dalam metabolisme Lactobacillus dan bakteri terkait diperlukan; Senyawa ini adalah garam natrium, magnesium dan mangan.
Demikian juga, sorbitan monoleat atau polisorbat 80 merupakan sumber penting asam lemak karena diserap sebagai nutrisi.
Selanjutnya, sorbitan monoleat dan amonium sitrat bekerja dengan menghambat perkembangan flora yang menyertainya, terutama bakteri Gram negatif, memberikan karakter selektif agar ini.
Terakhir, agar-agar adalah yang memberikan konsistensi padat pada medium.
Ada varian lain dari agar Man Rogosa Sharpe; salah satunya adalah yang dilengkapi dengan sistein (MRSc), sangat berguna untuk isolasi bifidobacteria, antara mikroorganisme lainnya. Di sisi lain, ada media MRS yang dilengkapi dengan neomisin, paromomisin, asam nalidiksat dan litium klorida, terutama untuk penghitungan selektif bifidobakteri dalam produk susu.
Persiapan
Timbang 68,25 gram media dehidrasi dan larutkan dalam satu liter air suling. Biarkan selama 5 menit. Untuk larut sepenuhnya, beralih ke sumber panas, aduk sering, dan didihkan selama 1 sampai 2 menit. Sterilkan dalam autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit.
Saat meninggalkan autoklaf, diamkan selama beberapa menit dan distribusikan saat masih panas dalam cawan Petri steril.
Biarkan piring mengeras dan balikkan piring, pesan di rak piring dan dinginkan sampai digunakan. Biarkan piring mencapai suhu kamar sebelum digunakan.
PH media harus tetap pada 6,4 ± 0,2. Beberapa rumah komersial merekomendasikan pH antara 5,5 hingga 5,9.
Media yang dikeringkan berwarna krem dan media yang disiapkan berwarna kuning gelap.
Media yang dikeringkan dan pelat yang disiapkan harus disimpan pada 2 hingga 8 ° C.
Kegunaan
Pelat agar MRS dapat diunggulkan di permukaan (exhaustion atau spatula Drigalski). Itu juga bisa ditaburkan dengan kedalaman. Pelat harus diinkubasi pada 37 ° C di microaerophilicity (4% O 2 dan 5-10% CO 2 ) selama 24 sampai 72 jam.
Metode penaburan dipilih sesuai dengan tujuan yang dimaksudkan (isolasi atau penghitungan).
Ciri-ciri koloni
Dugaan koloni Lactobacillus tumbuh berwarna keputihan dan memiliki penampilan mukoid atau krim pada agar-agar ini. Mereka selanjutnya harus diidentifikasi.
Isolasi bakteri asam laktat
Untuk ini, penyemaian permukaan digunakan. Sampel yang akan ditaburkan memerlukan prosedur sebelumnya.
Dalam kasus sampel ASI, dianjurkan untuk sentrifugasi 1 ml sampel pada 14.000 rpm selama 10 menit, untuk menghilangkan lapisan lemak. 900 l dibuang, dan sisa 100 l endapan disuspensikan dan dituang pada permukaan agar MRS, kemudian diratakan dengan spatula Drigalski.
Dalam kasus sampel tinja, satu (1) gram tinja ditimbang dan dihomogenkan dalam 9 mL air pepton steril 0,1%, sesuai dengan pengenceran 1/10. Kemudian dibuat pengenceran serial, sampai diperoleh pengenceran akhir 10 -4 .
Akhirnya, 100 l dari 10 -2 , 10 -3 dan 10 -4 pengenceran diambil dan setiap pengenceran diunggulkan pada agar MRS, didistribusikan secara merata dengan spatula Drigalski.
Jumlah bakteri asam laktat
Dalam hal ini penaburan dilakukan secara mendalam.
Untuk sampel ASI diambil 1 mL dan dimasukkan ke dalam tabung plastik berbentuk kerucut yang steril. Agar MRS ditambahkan pada suhu perkiraan 40 ° C hingga volume akhir 25 mL, memperoleh campuran yang homogen. Selanjutnya dituang ke dalam cawan petri steril secara merata dan didiamkan sampai polimerisasi.
Untuk sampel tinja, pengenceran dibuat, seperti yang dijelaskan sebelumnya. Ambil masing-masing 1 mL pengenceran dan masukkan ke dalam tabung plastik berbentuk kerucut yang steril. Cair MRS agar ditambahkan ke volume 25 mL.
Campuran dari masing-masing pengenceran dituangkan secara merata ke dalam cawan petri steril. Akhirnya dibiarkan mengendap sampai polimerisasi.
Jumlah koloni pada agar Man Rogosa dan Sharpe (MRS). Sumber: Foto disumbangkan untuk artikel ini. Penulis: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Foto diambil selama Penelitian berjudul: Evaluasi bakteri asam laktat dan Bifidobacteria dengan potensi probiotik dalam ASI dan kotoran bayi.
Di tingkat Riset
Setiap hari studi tentang bakteri asam laktat semakin menarik; Para peneliti terutama berusaha untuk belajar tentang strain baru dan potensinya sebagai fermentasi starter untuk standarisasi dalam pembuatan produk susu, di antara kegunaan lainnya.
Dalam hal ini, Alvarado et al. (2007) menggunakan agar MRS untuk melakukan penelitian di mana mereka mengisolasi, mengidentifikasi dan mengkarakterisasi bakteri asam laktat yang ada dalam keju Andes asap Venezuela artisanal.
Dalam keju, mereka menemukan adanya bakteri dari genus Lactococcus dan Lactobacillus , dan menyimpulkan bahwa campuran galur yang diisolasi cocok sebagai galur starter dalam pembuatan keju dari susu yang dipasteurisasi.
Di sisi lain, Sánchez dkk. (2017) menggunakan MRS agar untuk menyelidiki keberadaan bakteri asam laktat di saluran pencernaan anak babi, untuk menggunakannya sebagai probiotik asli yang meningkatkan produktivitas anak babi yang sehat.
Dengan media ini mereka mampu mengisolasi empat spesies: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae dan Pediococcus pentosaceus.
Demikian juga, Baez et al. (2019) menggunakan MRS agar untuk mengevaluasi bakteri asam laktat (BAL) dan bifidobacteria dengan potensi probiotik dalam ASI dan kotoran bayi.
Mereka berhasil mengisolasi 11 BAL dan 3 Bifidobacteria sp dalam ASI, serta 8 BAL dan 2 Bifidobacteria sp . dalam kotoran. Semua memenuhi parameter tertentu yang membuktikan mereka sebagai bakteri dengan aktivitas probiotik.
Para penulis menyimpulkan bahwa ASI dan kotoran bayi yang disusui secara eksklusif berfungsi sebagai sumber alami bakteri probiotik.
QA
Kontrol strain seperti:
Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli dan Bacillus cereus .
Hasil yang diharapkan adalah pertumbuhan yang memuaskan untuk 6 bakteri pertama, sedangkan E. coli dan Bacillus cereus harus benar-benar dihambat.
Referensi
- Alvarado C, Chacón Z, Otoniel J, Guerrero B, López G. Isolasi, Identifikasi dan Karakterisasi Bakteri Asam Laktat dari Keju Artisan Andes Asap Venezuela. Penggunaannya sebagai Budaya Pemula. pasien. (Maracaibo) 2007; 17 (3): 301-308. Tersedia di: scielo.org.
- Sánchez H, Fabián F, Ochoa G, Alfaro Isolasi Bakteri Asam Laktat dari Saluran Pencernaan Anak Babi. Pdt. investiga. dokter hewan. Peru 2017; 28 (3): 730-736. Tersedia di: scielo.org.
- Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Evaluasi bakteri asam laktat dan Bifidobacteria dengan potensi probiotik dalam ASI dan kotoran bayi di kotamadya Acevedo, Miranda 2017. Pekerjaan sarjana untuk memenuhi syarat untuk gelar Sarjana dalam Bioanalisis . Universitas Carabobo, Venezuela.
- Laboratorium Britannia. MRS agar. 2015.Tersedia di: britanialab.com
- Kontributor Wikipedia. MRS agar. Wikipedia, ensiklopedia gratis. 10 Januari 2018, 19:44 UTC. Tersedia di: wikipedia.org Diakses pada 17 Februari 2019.
- Roy D. Media untuk isolasi dan enumerasi bifidobacteria dalam produk susu. Mikrobiol Pangan Int J, 200128; 69 (3): 167-82.