Selenite adalah media kultur cair selektif. Ini dirancang oleh Leifson untuk pengayaan sampel di mana keberadaan bakteri enteropatogen genus Salmonella dicurigai.
Media ini memenuhi persyaratan American Public Health Association (APHA), dan oleh karena itu diterima untuk penyelidikan keberadaan Salmonella dalam sampel feses, urin, makanan cair atau padat, air, dan lain-lain.
Kaldu selenit. Sumber: Foto diambil oleh penulis MSc. Marielsa Gil
Komposisi kimianya mendukung pemulihan mikroorganisme ini dan pada gilirannya menghambat pertumbuhan mikroorganisme lain. Ini terutama beracun bagi sebagian besar bakteri milik Keluarga Enterobacteriaceae. Namun, ini juga memungkinkan pemulihan strain Shigella dan tidak menghambat pertumbuhan Pseudomonas dan Proteus.
Ini terdiri dari natrium hidrogen selenit anhidrat, natrium fosfat anhidrat, pepton, dan laktosa. Ada juga varian yang ditambahkan sistin, oleh karena itu namanya kaldu selenit-sistin.
Saat ini, penggunaan kaldu selenit-sistin lebih disukai, karena persentase perolehan Salmonella yang diperoleh lebih tinggi, setara dengan yang diamati dengan media selektif lainnya untuk tujuan yang sama, seperti kaldu natrium tetrationat.
Indeks artikel
Dasar
Pepton yang terkandung dalam kaldu berfungsi sebagai nutrisi untuk perkembangan mikroorganisme yang tepat. Strain Salmonella menggunakan pepton sebagai sumber nitrogen, vitamin, dan asam amino.
Laktosa adalah karbohidrat yang dapat difermentasi, sedangkan natrium selenit adalah zat penghambat yang menghentikan pertumbuhan bakteri Gram positif dan sebagian besar bakteri yang ada di flora usus, terutama dari Keluarga Enterobacteriaceae. Natrium fosfat adalah buffer yang menstabilkan pH medium.
Dalam kasus varian kaldu selenit yang mengandung L-sistin, senyawa tambahan ini adalah zat pereduksi yang meminimalkan toksisitas selenit, meningkatkan pemulihan Salmonella.
Persiapan
-kaldu selenite
Jika Anda memiliki komponen campuran, Anda dapat menimbang:
4 g natrium hidrogen selenit anhidrat.
10 g natrium fosfat anhidrat.
5 gram pepton.
4 gram laktosa.
Larutkan senyawa dalam 1 liter air suling steril. Itu bisa dipanaskan sedikit untuk larut sepenuhnya.
Beberapa laboratorium memaparkan media selama 10 menit dalam uap yang lancar untuk mensterilkannya, karena autoklaf tidak boleh digunakan. Jika media disterilkan, dapat disimpan di lemari es sampai digunakan.
Dapat juga disiapkan nonsteril dan disajikan langsung 10-15 ml ke tabung reaksi steril.
Dalam hal ini, harus dibiarkan beristirahat dan segera digunakan. Karena media tidak steril, maka tidak dapat disimpan di lemari es untuk digunakan nanti.
–Persiapan lingkungan komersial
Jika media komersial tersedia, timbang 23 g media dehidrasi dan larutkan dalam satu liter air suling steril. Panaskan sebentar untuk menyelesaikan pelarutan. Jangan autoklaf. Sajikan 10 atau 15 ml secara aseptik dalam tabung reaksi steril.
PH akhir media harus 7,0 ± 0,2.
Perlu dicatat bahwa warna media yang dikeringkan adalah krem dan sediaannya berwarna kuning terang dan tembus cahaya.
Varian kaldu selenite-cystine
Ini mengandung senyawa yang sama seperti kaldu selenit, tetapi 10 mg sistin ditambahkan. Sisa prosedurnya persis sama seperti yang dijelaskan di atas.
Kegunaan
Media ini khusus digunakan dalam studi epidemiologi, dalam kasus di mana penyakit tidak dalam tahap akut, pasien tanpa gejala atau karier yang sehat.
Isolasi genus Salmonella umumnya sulit, karena biasanya hanya sampel yang mengkontaminasi dengan buruk. Berada dalam jumlah kecil, mudah tumpang tindih dengan pertumbuhan genera bakteri lain yang ditemukan dalam jumlah yang lebih besar.
Di sisi lain, bahan baku yang digunakan untuk membuat makanan olahan sering kali terpapar panas, proses dehidrasi, penggunaan disinfektan, radiasi, dan pengawet, antara lain.
Oleh karena itu, Salmonella yang ada dalam bahan mentah disalahgunakan dengan menjadikan produk tersebut proses industri yang disebutkan di atas. Demikian pula, dalam kasus sampel klinis seperti feses, strainnya mungkin lemah jika berasal dari pasien yang telah diobati dengan antibiotik.
Oleh karena itu, setiap sampel yang diduga mengandung Salmonella harus diperkaya terlebih dahulu dalam kaldu laktosa, dan selanjutnya diperkaya dalam kaldu selenit untuk mengoptimalkan pemulihannya dalam media selektif, seperti agar SS, agar xylose, lisin deoksikolat (XLD ), enterik. Agar hektoen (HE) dan agar hijau cerah, antara lain.
Ditaburkan
Untuk sampel tinja, ambil 1 g sampel dan suspensikan dalam tabung dengan 10 hingga 15 ml kaldu selenit. Jika tinja cair, ambil 1 ml dan suspensikan dalam kaldu. Untuk swab rektal, buang bahan swab ke dalam kaldu.
Dalam sampel makanan padat ambil 1 gr dan suspensikan dalam kaldu selenite.
Dalam makanan cair, campur dalam bagian yang sama dengan kaldu selenite dengan konsentrasi ganda.
Untuk sampel urin, sentrifus, buang supernatan, ambil semua endapan dan suspensikan dalam kaldu selenit.
Kaldu diinkubasi pada suhu 37 ° C selama 24 jam inkubasi. Pertumbuhan bakteri dibuktikan dengan kekeruhan. Tabung tambahan per sampel juga dapat dimasukkan untuk inkubasi pada 42 ° C. Selanjutnya, penyemaian media padat selektif dari kaldu selenit.
QA
Untuk mengontrol sterilitas, kaldu selenit dari setiap batch yang tidak diinokulasi diinkubasi pada suhu 37 ° C selama 24 jam. Diharapkan tidak terjadi kekeruhan atau perubahan warna pada medium.
Untuk mengontrol berfungsinya media, strain yang diketahui dapat digunakan, seperti:
Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 dan Proteus mirabilis ATCC 43071.
Hasil yang diharapkan adalah:
- Untuk tiga strain bakteri pertama, pertumbuhan harus memuaskan.
- Untuk penghambatan parsial Escherichia coli .
- Untuk Proteus pertumbuhan cararat.
Keterbatasan
Media kaldu selenite beracun bagi kulit manusia, oleh karena itu kontak langsung harus dihindari.
Referensi
- Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Perbandingan media kultur sodium selenite dan sodium tetrathionate, keduanya diinkubasi pada suhu 37°C dan 42°C untuk isolasi Salmonella spp dari kotoran pembawa. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220
- Laboratorium Britannia. Kaldu Selenito. 2015.Tersedia di: britanialab.com
- Laboratorium Neogen. Kaldu selenit. Tersedia di: foodsafety.neogen.com
- González -Pedraza J, Pereira -Sanandres N, Soto -Varela Z, Hernández -Aguirre E, Villarreal- Camacho J. Isolasi mikrobiologi Salmonella spp . dan alat molekuler untuk pendeteksiannya. Kesehatan, Barranquilla 2014; 30 (1): 73-94. Tersedia dari: http://www.scielo.org.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosa Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 edisi Editorial Panamericana SA Argentina.
