Kromatografi interaksi hidrofobik (HIC) adalah alat berharga yang digunakan dalam aplikasi pemurnian protein. HIC digunakan dalam pemurnian protein pada berbagai skala-dalam aplikasi skala analitik dan persiapan.
Bagaimana cara kerja kolom HIC?
Bagaimana HIC Bekerja? Singkatnya, HIC (juga dikenal sebagai ‘salting out’) memisahkan molekul protein menggunakan sifat hidrofobisitas. Dalam metode ini, protein yang mengandung daerah hidrofilik dan hidrofobik diterapkan pada kolom HIC dalam kondisi buffer garam tinggi.
Apa interaksi hidrofobik dalam kromatografi fase terbalik?
Protein dengan derajat hidrofobisitas permukaan yang berbeda dapat dipisahkan menggunakan kromatografi interaksi hidrofobik. Protein terikat pada ligan hidrofobik pada resin HIC dalam buffer pengikat dengan konsentrasi garam yang tinggi. Ketika kekuatan ionik buffer berkurang, interaksi dibalik.
Bagaimana fase terbalik bekerja di HPLC?
Kromatografi fase terbalik menggunakan fase gerak polar (berair). Akibatnya, molekul hidrofobik pada fase gerak polar cenderung teradsorpsi ke fase diam hidrofobik, dan molekul hidrofilik pada fase gerak akan melewati kolom dan terelusi terlebih dahulu.
Apa perbedaan antara HPLC dan RP HPLC?
Perbedaan utama antara HPLC fase balik dan fase normal adalah bahwa HPLC fase balik menggunakan fase diam nonpolar dan fase gerak polar sedangkan HPLC fase normal menggunakan fase diam polar dan fase gerak yang kurang polar.
Apa itu kolom interaksi hidrofobik?
Kromatografi interaksi hidrofobik (HIC) memisahkan molekul berdasarkan hidrofobisitasnya. HIC adalah teknik pemisahan yang berguna untuk memurnikan protein sambil mempertahankan aktivitas biologis karena penggunaan kondisi dan matriks yang beroperasi pada kondisi denaturasi yang lebih rendah.
Bagaimana interaksi hidrofobik bekerja?
Efek hidrofobik menggambarkan preferensi energetik dari permukaan molekul nonpolar untuk berinteraksi dengan permukaan molekul nonpolar lainnya dan dengan demikian menggantikan molekul air dari permukaan yang berinteraksi. Efek hidrofobik disebabkan oleh efek entalpik dan entropik.
Jenis kromatografi mana yang paling mahal?
Kromatografi afinitas adalah metode kromatografi yang paling mahal, karena seringkali protein yang sangat murni (antibodi) juga harus diproduksi sebelum protein target.
Apakah pH mempengaruhi interaksi hidrofobik?
Pengaruh pH pada interaksi hidrofobik tidak diremehkan. Memang, pengurangan yang jelas dari hidrofobisitas permukaan protein pada pH rendah telah dijelaskan dan retensi protein yang lebih tinggi pada sorben hidrofobik telah diamati pada pH tinggi.
Apa yang dilakukan molekul hidrofobik?
Molekul dan permukaan hidrofobik menolak air. Cairan hidrofobik, seperti minyak, akan terpisah dari air. Molekul hidrofobik biasanya nonpolar, artinya atom penyusun molekul tidak menghasilkan medan listrik statis. … Efek hidrofobik disebabkan oleh molekul nonpolar yang menggumpal.
Bagaimana cara memisahkan molekul hidrofobik?
Kromatografi interaksi hidrofobik memisahkan molekul berdasarkan hidrofobisitasnya. Matriks stasioner memiliki gugus hidrofobik yang berinteraksi dengan daerah hidrofobik molekul, tetapi mereka harus menemukan satu sama lain terlebih dahulu. Ingat eksperimen “campur minyak dan air”?
Bagaimana cara memisahkan protein hidrofobik?
Protein hidrofobik dapat berhasil dipisahkan dengan pemulihan lebih dari 90% dengan elusi gradien amonium sulfat dari 0,3-0,5 M menjadi 0 dalam buffer fosfat 50 mM (pH 6,8) dengan menggunakan pendukung yang hidrofobiknya disesuaikan secara individual untuk setiap protein.
Asam amino manakah yang bersifat hidrofobik?
Asam Amino Hidrofobik
Sembilan asam amino yang memiliki rantai samping hidrofobik adalah glisin (Gly), alanin (Ala), valin (Val), leusin (Leu), isoleusin (Ile), prolin (Pro), fenilalanin (Phe), metionin (Met), dan triptofan (Trp).
Dengan apa asam amino hidrofobik berinteraksi?
Ikatan hidrofobik dalam protein muncul sebagai konsekuensi dari interaksi asam amino hidrofobiknya (yaitu, “tidak suka air”) dengan pelarut polar, air. Asam amino hidrofobik adalah gly, ala, val, leu, ile, met, pro, phe, trp (lihat struktur asam amino untuk referensi).
Mengapa terjadi interaksi hidrofobik?
Penjelasan: Efek hidrofobik membutuhkan air untuk terjadi. Alasan kelompok hidrofobik cenderung berkelompok adalah karena dengan demikian, jaringan molekul air di sekitar mereka tetap utuh. Tidak ada kekuatan khusus lain yang bermain di antara kelompok hidrofobik.
Apa contoh hidrofobik?
Contoh molekul hidrofobik termasuk alkana, minyak, lemak, dan zat berminyak pada umumnya. Bahan hidrofobik digunakan untuk menghilangkan minyak dari air, pengelolaan tumpahan minyak, dan proses pemisahan kimia untuk menghilangkan zat non-polar dari senyawa polar.
Bagaimana Anda mengidentifikasi interaksi hidrofobik?
Interaksi hidrofobik menggambarkan hubungan antara air dan hidrofob (molekul larut air rendah). Hidrofob adalah molekul nonpolar dan biasanya memiliki rantai panjang karbon yang tidak berinteraksi dengan molekul air. Pencampuran lemak dan air adalah contoh yang baik dari interaksi khusus ini.
Apakah PO4 3 hidrofilik atau hidrofobik?
Empat “ekor” asam lemak hidrofilik dan kepala hidrofobik yang terdiri dari gugus fosfat (PO4-3) yang melekat pada karbon gliserol ketiga.
Apakah GFP hidrofobik atau hidrofilik?
GFP dimurnikan dari lisat bakteri menggunakan kolom kromatografi interaksi hidrofobik (HIC) yang disediakan dalam kit ini. Protein fluoresen hijau sangat hidrofobik dibandingkan dengan protein bakteri.
Apa itu Hipofobik?
Hidrofobik adalah sifat zat yang menolak air. Artinya kurang afinitas terhadap air, dan cenderung menolak atau tidak menyerap air. Molekul hidrofobik cenderung menjadi molekul non-polar dan berkelompok bersama. Minyak dan lemak bersifat hidrofobik.
Apakah silika bersifat polar atau nonpolar?
Silica gel hanyalah pasir murni yang sangat halus. Perlu dicatat bahwa silika gel sangat polar dan mampu mengikat hidrogen. Pertimbangkan tampilan samping dari pengembangan pelat TLC di bawah ini.
Apa prinsip dasar HPLC?
Prinsip pemisahan HPLC didasarkan pada distribusi analit (sampel) antara fase gerak (eluen) dan fase diam (bahan pengemas kolom). Bergantung pada struktur kimia analit, molekul terbelakang saat melewati fase diam.
Detektor apa yang digunakan dalam HPLC?
Detektor HPLC
- Detektor UV-Vis. SPD-20A dan SPD-20AV adalah detektor UV-Vis serba guna yang menawarkan tingkat sensitivitas dan stabilitas yang luar biasa. …
- Detektor Indeks Bias. …
- Detektor Fluoresensi. …
- Detektor Hamburan Cahaya Penguapan. …
- Detektor Konduktivitas.