Air pepton adalah media pengayaan cair, nonselektif, terutama digunakan sebagai sampel makanan pengencer atau bahan lainnya. Media ini dari sudut pandang kimia sangat sederhana, mengandung pepton daging, natrium klorida dan air.
Ini memiliki nilai gizi tertentu, memungkinkan untuk memperkaya sampel. Jika ada bakteri yang disalahgunakan , media ini memiliki kekuatan untuk memperbaiki viabilitas. Hal ini sangat berguna dalam pemulihan bakteri milik keluarga Enterobacteriaceae.
Air pepton dalam botol. Sumber: MSc. Marielsa Gil
Dalam kasus pemulihan Salmonella, penggunaan varian air pepton buffer dianjurkan; Ini berfungsi sebagai media pra-pengayaan untuk sampel, dalam hal ini mengandung unsur-unsur lain seperti dinatrium fosfat dan dipotassium fosfat.
Biasanya, air pepton dibuat pada pH netral, namun ada varian lain yang memerlukan pH 8,5 ± 0,2 (basa), karena bakteri yang akan diisolasi bersifat alkalifilik, seperti Vibrio cholerae.
Selanjutnya media ini dapat digunakan sebagai media dasar untuk pengujian fermentasi karbohidrat.
Indeks artikel
Dasar
Pepton menyediakan nutrisi yang dibutuhkan untuk pertumbuhan bakteri, terutama nitrogen dan asam amino rantai pendek, sementara natrium klorida menjaga keseimbangan osmotik.
Selanjutnya, media memungkinkan untuk membubarkan, menghomogenkan dan memperbaiki sel bakteri yang telah rusak oleh proses industri.
Sebagai pengencer sangat ideal, secara efektif menggantikan larutan fisiologis (SSF) atau buffer fosfat (PBS).
Pertumbuhan bakteri terbukti dengan mengamati kekeruhannya.
Persiapan
Persiapan buatan sendiri (bukan komersial)
Timbang 1 g pepton dan 8,5 g natrium klorida, larutkan dalam 1 liter air suling . pH harus disesuaikan menjadi 7,0. Untuk ini, 1N natrium klorida dapat digunakan.
Persiapan menggunakan media komersial
Timbang 15 g media dehidrasi dan larutkan dalam satu liter air suling. Homogenkan campuran. Jika perlu, campuran direbus selama 1 menit untuk membantu pembubaran total. Sajikan dalam botol 100 ml atau tabung 10 ml sesuai kebutuhan. Autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit.
Dinginkan dan gunakan atau simpan di lemari es. PH akhir media adalah 7,2 ± 0,2.
Warna media yang dikeringkan adalah krem muda dan media yang disiapkan berwarna kuning muda.
Persiapan untuk tes fermentasi
Pada sediaan sebelumnya -sebelum disterilkan- karbohidrat harus ditambahkan dengan konsentrasi akhir 1%, ditambah indikator Andrade (asam fuchsin) atau phenol red (0,018 g/L). Tabung harus dilengkapi dengan lonceng Durham untuk pengamatan pembentukan gas.
Varian lain dari air pepton
Air pepton buffer atau buffer
Ini mengandung hidrolisat enzimatik kasein, natrium klorida, dihidrogen kalium fosfat dan natrium hidrogen fosfat dodekahidrat. PH akhir adalah 7,0 ± 0,2.
Untuk persiapannya, timbang 20 g media dehidrasi dan larutkan dalam 1 liter air suling. Diamkan selama kurang lebih 5 menit. Panaskan selama 1 menit sampai benar-benar larut.
Tuang ke dalam stoples yang sesuai sesuai kebutuhan. Sterilkan menggunakan autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit.
-Air pepton alkali
Timbang 25 g media dehidrasi dan larutkan dalam 1 liter air. Lanjutkan seperti yang dijelaskan di atas. pH berkisar dari 8,3 hingga 8,7.
Menggunakan
Inokulum dilakukan dengan menempatkan sampel secara langsung.
Digunakan untuk mengencerkan sampel, terutama jika diduga ada bakteri yang rusak. Biasanya pengenceran adalah 1:10 dan 1:100.
Inkubasi selama 24 jam secara aerobiosis pada suhu 35-37°C.
Sampel tinja
Untuk sampel feses yang mencari Salmonella, disarankan penggunaan buffered atau buffered water sebagai media pra-pengayaan.
Untuk melakukan ini, lanjutkan sebagai berikut:
Jika tinja terbentuk, ambil 1 g sampel. Jika berbentuk cair, ambil 1 ml feses dan suspensikan dalam tabung berisi 10 ml air pepton yang telah dibubuk. Untuk swab rektal, keluarkan bahan swab ke dalam tabung dengan buffered peptone water.
Dalam semua kasus, campur dan homogenkan sampel dengan sangat baik.
Inkubasi pada suhu 37°C selama 18 hingga 24 jam. Selanjutnya subkultur dalam kaldu pengayaan seperti kaldu selenit sistin atau kaldu tetrationat pada suhu 37°C selama 18-24 jam lebih. Terakhir, tanam dalam media selektif untuk Salmonella, seperti agar SS, agar XLD, agar Hektoen, dan lain-lain.
Sampel makanan
Air pepton digunakan sebagai media pengayaan atau sebagai pengencer sederhana, tetapi jika spesies Salmonella dicari, digunakan sebagai media pra-pengayaan, seperti yang telah dijelaskan.
Dalam makanan, lakukan sebagai berikut:
Untuk makanan padat timbang 25 g sampel dan untuk makanan cair ukur 25 ml. Tempatkan bagian tersebut dalam botol yang berisi 225 ml air pepton. Campur dan homogenkan sampel.
Jika beban mikroba diduga tinggi, pengenceran serial atau desimal dapat dibuat untuk memfasilitasi penghitungan unit pembentuk koloni (CFU).
Jumlah pengenceran akan tergantung pada jenis sampel dan pengalaman analis.
Sebaliknya, jika diduga beban mikroba sangat rendah, tidak perlu dilakukan pengenceran. Selanjutnya dilakukan subkultur pada media selektif.
Dalam hal makanan dari laut, seperti kerang, ikan, antara lain untuk mencari Vibrio cholerae atau spesies Vibrio lainnya, air pepton yang disesuaikan dengan pH 8,5 (air pepton alkali) harus digunakan.
QA
Dari setiap batch yang disiapkan, satu hingga dua tabung harus diinkubasi tanpa inokulasi selama 24 jam dalam aerobiosis pada suhu 37 ° C. Pada akhir waktu, tidak ada kekeruhan atau perubahan warna yang harus diamati.
Strain kontrol yang diketahui juga dapat digunakan untuk mengevaluasi efektivitasnya:
Strain bakteri berikut dapat digunakan untuk ini: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076 .
Dalam semua kasus, perkembangan mikroba yang memuaskan diharapkan, yang diamati dengan kekeruhan media.
Keterbatasan
-Media dehidrasi sangat higroskopis, sehingga harus dijauhkan dari kelembaban.
-Media tidak boleh digunakan jika ada jenis kerusakan yang diamati.
-Media kultur yang dikeringkan harus disimpan antara 10 – 35 ° C
-Media yang disiapkan harus disimpan dalam lemari es (2-8 ° C).
Referensi
- Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B dan Velázquez O. Teknik untuk Analisis Mikrobiologi Makanan. 2009, edisi ke-2. Fakultas Kimia UNAM. Meksiko. Versi Manuals and Documents Administrator (AMyD) Fakultas Kimia UNAM 1. Tersedia di: http://depa.fquim.unam.mx
- Laboratorium Britannia. Air pepton buffer. 2015.Tersedia di: britanialab.com
- Laboratorium Neogen. air pepton. Tersedia di: foodsafety.neogen.com
- Laboratorium Britannia. air pepton. 2015.Tersedia di: britanialab.com
- Laboratorium Merck. Air pepton buffer. Tersedia di: merckmillipore.com
- Laboratorium Conda Pronadisa. Air pepton alkali. Tersedia di: condalab.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosa Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 edisi Editorial Panamericana SA Argentina.
