EC kaldu atau kaldu Escherichia coli adalah medium kultur cair selektif. Media ini direkomendasikan oleh Metode Standar untuk menghitung total dan feses coliform, dengan teknik angka yang paling mungkin (MPN) dalam sampel makanan dan air, di mana agen utama yang terlibat adalah Escherichia coli.
Kaldu EC terdiri dari triptein, laktosa, garam empedu, dipotassium phosphate, monopotassium phosphate, sodium chloride, dan air. Formulanya dirancang secara strategis untuk mendorong pertumbuhan total dan fekal coliform dan mencegah perkembangan mikroorganisme lain yang menyertainya.
Representasi figuratif dari persiapan kaldu EC. Sumber: Pixabay.com
Escherichia coli bakteri adalah utama fecal coliform hadir sebagai kontaminan dalam air dan makanan sumber, menyebabkan gangguan pencernaan yang signifikan.
Perlu dicatat bahwa ada banyak serotipe Escherchia coli; Di antara mereka kita dapat menyebutkan enterohemorrhagic (EHEC), enteroinvasive (EIEC), enteopathogenic (EPEC), enterotoxigenic (ETEC) dan enteroaggregative (EAEC).
Media ini memiliki kemampuan untuk memungkinkan pengembangan semuanya, tetapi tanpa dapat membedakan satu sama lain. Ini membutuhkan pengujian tambahan.
Kajian mikrobiologi air dan makanan dengan angka kemungkinan terbesar (MPN) untuk mencari total dan fekal coliform adalah protokol yang terdiri dari beberapa fase; fase dugaan, fase konfirmasi, dan fase penyelesaian. Kaldu EC digunakan dalam fase konfirmasi.
Indeks artikel
Dasar
kaldu EC
Media EC didasarkan pada penyediaan unsur nutrisi yang diperlukan untuk perkembangan optimal total dan fekal coliform, di mana bakteri Escherichia coli termasuk .
Unsur-unsur nutrisi ini disediakan oleh triptein, menjadi sumber peptida dan asam amino yang sangat baik. Selain itu, juga mengandung laktosa, karbohidrat yang dapat difermentasi yang menyediakan energi dan menunjukkan apakah bakteri menghasilkan gas.
Di sisi lain, media mengandung garam empedu yang memberikan karakter selektif, karena menghambat pertumbuhan mikroorganisme Gram positif yang mungkin ada dalam sampel.
Demikian juga, dipotassium phosphate dan monopotassium phosphate bertindak sebagai sistem penyeimbang pH. Sistem ini diperlukan, karena laktosa yang terkandung dalam kaldu cenderung mengasamkan media ketika difermentasi oleh mikroorganisme, tetapi ini dikompensasi oleh garam fosfat.
Oleh karena itu, unsur-unsur ini sangat penting, karena keasaman yang tidak terkontrol dapat mempengaruhi perkembangan yang tepat dari mikroorganisme yang dicari.
Untuk bagiannya, natrium klorida menstabilkan media secara osmotik, sementara air adalah pelarut untuk zat terlarut yang ada dan memberikan konsistensi cair ke media.
Novobiosin Modified EC Broth
Okrend dan Rose menciptakan berbagai kaldu EC, yang disebut kaldu EC yang dimodifikasi novobiocin. Modifikasi terdiri dari pengurangan konsentrasi garam empedu dan penambahan 20 mg/dl novobiocin.
Modifikasi ini mendukung pemulihan galur Escherichia coli enterohemoragik (O157: H7).
Serotipe bakteri ini menyebabkan kolitis hemoragik parah yang dapat menyebabkan sindrom uremik hemolitik (HUS); yang pada gilirannya dapat menimbulkan gagal ginjal akut, dengan angka kematian tinggi yang dapat mencapai hingga 50% pada lansia.
Karena morbiditas dan mortalitas yang disebabkan oleh bakteri ini setiap tahun karena konsumsi makanan yang terkontaminasi, Departemen Pertanian Amerika Serikat (USDA) sangat merekomendasikan penggunaan media ini.
Persiapan
kaldu EC
Timbang 37,4 g media dehidrasi dan larutkan dalam 1 liter air suling. Campuran harus dibiarkan mengendap selama 5 menit. Selanjutnya, dalam sumber panas, itu selesai larut dengan sering mengocok.
Setelah dilarutkan, itu dibagikan ke dalam tabung reaksi yang sudah dikondisikan dengan tabung Durham di dalamnya. Sterilkan dalam autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit.
PH media harus tetap pada 6,9 ± 0,2. Warna media yang dikeringkan adalah krem dan media yang disiapkan berwarna kuning muda.
Kaldu disimpan di lemari es sampai digunakan. Pada saat digunakan, kaldu harus pada suhu kamar.
Di sisi lain, kaldu EC juga dapat dibuat dengan konsentrasi ganda.
Novobiosin Modified EC Broth
Timbang 36,7 g media dehidrasi dan larutkan dalam 1 liter air. Persiapan lainnya sama seperti yang dijelaskan di atas.
Menggunakan
Analisis coliform total dan tinja
Kaldu EC sangat ideal untuk fase konfirmasi studi koliform dengan metode NMP, baik dalam sampel air, maupun dalam produk farmasi dan makanan.
Kaldu laktosa yang keruh dan menghasilkan gas yang diperoleh pada fase dugaan harus ditanam kembali dalam 2% kaldu empedu hijau terang dan kaldu EC.
Untuk total coliform, EC broth diinkubasi secara aerob selama 24 sampai 48 jam pada suhu 37°C, dan untuk fecal coliform diinkubasi secara aerobik selama 24 sampai 48 jam pada suhu 44°C.
Dalam kedua kasus itu ditafsirkan sebagai berikut: tabung keruh dengan produksi gas dianggap positif. Jika tidak ada produksi gas dalam 24 jam, inkubasi berlanjut hingga 48 jam.
Kaldu EC positif masuk ke fase konfirmasi penuh, yang terdiri dari penyemaian ulang pada media selektif seperti agar Mac Conkey, agar EMB atau agar Endo.
Jika kaldu yang digunakan adalah EC termodifikasi novobiocin, tabung positif direkomendasikan untuk ditanam kembali pada agar Mac Conkey dengan sorbitol.
QA
Kontrol kualitas harus dilakukan pada setiap batch media yang disiapkan. Pertama, sterilitas media harus dievaluasi. Dalam pengertian ini, satu atau dua kaldu diinkubasi tanpa inokulasi dalam aerobiosis selama 24 jam pada 37 ° C. Hasil yang diharapkan adalah kaldu transparan, tanpa kekeruhan atau perubahan warna.
Kedua, pertumbuhan galur yang diketahui harus dievaluasi, untuk ini bakteri berikut dapat digunakan: Escherichia coli , ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.
Dalam semua kasus, perkembangan mikroba yang memuaskan diharapkan, mengamati kaldu keruh dengan produksi gas untuk E. coli dan tidak ada gas untuk Salmonella.
Strain lain yang dapat dimasukkan dalam kontrol adalah: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Strain ini harus dihambat secara total.
rekomendasi
– Penempatan tabung Durham sangat penting untuk mempelajari koliform.
-Distribusikan media dalam tabung reaksi sebelum mensterilkan, tidak pernah sesudahnya.
-Jangan gunakan jika media lebih dari 3 bulan.
-Jangan gunakan jika ada perubahan dalam karakteristik biasa dari media yang diamati.
Referensi
- Laboratorium Britannia. Media EC. 2015.Tersedia di: britanialab.com
- E. coli enterohemoragik . Pusat ketahanan pangan dan kesehatan masyarakat. 2010.Tersedia di: cfsph.iastate.edu
- Perusahaan Neogen. EC tengah Tersedia di: foodsafety.neogen.com
- neon. Media EC termodifikasi Novobiosin. Tersedia di: foodsafety.neogen.com
- Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, de Castillo M. Deteksi, isolasi dan karakterisasi Escherichia coli yang memproduksi toksin Shiga dari daging giling segar dari tukang daging di Concepción, provinsi dari Tucumán. Mikrobiol Rev Arg; 2010, 42 (4): 284-287. Tersedia di: www.scielo.org.
