potato dextrose agar adalah media, non padat – budaya nutrisi selektif. Spesies bakteri dan jamur dapat tumbuh di dalamnya, tetapi penggunaannya terutama diindikasikan untuk isolasi jamur dan khamir berfilamen. Ia juga dikenal sebagai media PDA untuk ekspresi bahasa Inggris Potato Dextrose Agar.
Ini sangat berguna untuk isolasi jamur fitopatogen, yaitu jamur yang mempengaruhi tanaman. Untuk menabur sampel dari sayuran yang terinfeksi, cara lain seperti agar Sabouraud atau malta-agar dapat digunakan, namun untuk penggunaan rutin, agar kentang dekstrosa lebih disukai karena diperoleh sporulasi yang lebih besar.
Aspergillus niger dan Sinemas masing-masing pada agar kentang dekstrosa. Sumber: Alextrevelian 006 di Wikipedia bahasa Inggris [Domain publik] / Joselrojas [CC BY-SA 4.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0)]
Ini juga digunakan untuk menghitung koloni jamur dalam sampel kosmetik, produk farmasi dan beberapa makanan susu. Demikian juga, sangat cocok untuk menabur sampel kerokan kulit untuk mencari dermatofita, yang tumbuh sangat baik di media ini, mengembangkan pigmen karakteristiknya.
Media dekstrosa kentang adalah media yang sangat sederhana dan mudah disiapkan di laboratorium. Berisi, seperti namanya, infus kentang, dekstrosa dan agar-agar. Selain itu, zat penghambat dapat ditambahkan untuk mencegah pertumbuhan bakteri dan meningkatkan selektivitas untuk spesies jamur.
Indeks artikel
Dasar
Agar kentang dekstrosa adalah media kultur yang menyediakan unsur nutrisi yang diperlukan untuk pengembangan jamur dan ragi berfilamen.
Kombinasi infus kentang dengan glukosa menyediakan sumber energi yang sempurna untuk pertumbuhan jamur yang memuaskan. Sedangkan agar-agar adalah yang memberikan kekentalan pada medium.
Medium itu sendiri tidak menghambat pertumbuhan bakteri , oleh karena itu merupakan medium yang tidak selektif. Untuk membuatnya selektif, perlu penambahan zat penghambat seperti asam tartarat atau antibiotik.
Persiapan
– Pembuatan agar-agar dekstrosa kentang (non-komersial) buatan sendiri
cawan petri
Ini disiapkan sebagai berikut:
Pertama-tama, kentang dicuci dengan sangat baik, menghilangkan tanah yang mereka miliki. Mereka dipotong menjadi irisan tipis dengan segala sesuatu dan cangkang. 200 gram kentang ditimbang dan direbus dalam satu liter air suling selama setengah jam.
Di akhir waktu, saring atau saring semua persiapan melalui kain tipis.
Cairan yang diperoleh diisi dengan aquades hingga mencapai satu liter. Tambahkan 20 g agar-agar dan 20 g dekstrosa ke dalam infus, aduk rata dan autoklaf pada 121 ° C, pada tekanan 15 pon selama 15 menit.
Biarkan dingin hingga 50 ° C dan sajikan dalam cawan Petri steril. Piring yang disiapkan disimpan di lemari es.
irisan
Irisan agar dekstrosa kentang juga bisa disiapkan.
Dalam hal ini, sebelum mensterilkan dalam autoklaf, 12 hingga 15 ml media ditempatkan dalam tabung, kemudian diautoklaf dan ketika meninggalkan mereka berbaring di atas penyangga khusus sampai memadat. Simpan di lemari es.
Medium tetap pada pH 5,6 ± 0,2, namun beberapa laboratorium menambahkan asam tartarat 10% untuk menurunkan pH menjadi 3,1 ± 0,1 untuk menghambat pertumbuhan bakteri.
Dalam pengertian yang sama, laboratorium lain lebih suka menambahkan antibiotik untuk membuatnya selektif untuk budidaya jamur dan mencegah pertumbuhan bakteri.
-Persiapan komersial agar kentang dekstrosa
Timbang 39 g media dehidrasi yang tersedia secara komersial dan larutkan dalam satu liter air suling. Biarkan selama 5 menit.
Campuran dipanaskan dengan sering diaduk sampai benar-benar larut. Selanjutnya disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit.
Piring atau irisan bisa disiapkan. Lanjutkan seperti yang dijelaskan sebelumnya.
PH tetap pada 5,6 ± 0,2. Jika pH 3,1 diinginkan, 14 ml asam tartarat 20% steril harus ditambahkan sebelum disajikan ke piring.
Medium mentah berwarna krem dan medium yang disiapkan berwarna kuning muda dengan tampilan agak keruh atau opalescent.
Kegunaan
Proses untuk menabur sampel tanaman pada agar kentang dekstrosa
-Untuk daun bernoda
Daunnya dipotong -potong.
Dalam gelas 50 cc dengan alkohol 50%, letakkan potongan daun (potongan yang bernoda dan sehat), untuk mendisinfeksi permukaan selama 20 hingga 30 detik. Buang alkoholnya dan tambahkan 20% natrium hipoklorit selama 40 hingga 50 detik jika daunnya tipis dan tambahkan waktu menjadi 80 detik jika itu adalah kulit kayu dan kayu gelondongan.
Buang natrium hipoklorit dan ambil potongan yang telah didesinfeksi dengan forsep steril dan letakkan di atas permukaan media (maksimal 10 buah). Atur tanggal dan inkubasi pada 20-30 ° C.
-Untuk buah-buahan dan umbi-umbian
Jika buahnya berdaging, buka buah yang terkena jamur dan ambil potongan dengan pisau bedah steril, baik dari bagian yang sakit maupun yang sehat, dan letakkan di permukaan agar-agar.
Jika buahnya jeruk, seperti lemon atau jeruk, itu harus dibuka dan bijinya ditaburkan.
Ketika permukaan buah terpengaruh dan spora diamati, yang ideal adalah menggunakan metode kisi di piring; Ini terdiri dari menyentuh spora dengan spatula berbentuk “L” yang disterilkan dan didinginkan, dan kemudian membuat penyemaian zigzag 2 hingga 3 kali pada agar-agar.
-Untuk biji-bijian
Mereka didesinfeksi seperti yang dijelaskan dalam daun dan kemudian ditempatkan pada agar-agar.
-Untuk cabang dan batang
Sebuah goresan dari kulit dibuat dan kemudian potongan bagian yang sehat dan sakit diambil dan ditaburkan langsung pada agar-agar.
Pelat benih diinkubasi secara aerobik pada suhu 20-30 ° C selama 72 jam.
Proses untuk menyemai sampel kulit, rambut atau kuku pada kentang dekstrosa agar
Sampel harus diambil menggunakan pisau skalpel No. 11, baik untuk memotong rambut yang terkena, sisik kulit atau kuku untuk mencari dermatofit. Sebelum mengambil sampel, area tersebut harus didesinfeksi dengan alkohol 70%.
-Sampel kulit
Pada lesi bersisik, tepi lesi harus dikerok, karena jamur lebih mungkin ditemukan di sana.
Pada lesi eksudatif, sampel diambil dengan swab kering atau basah. Taburkan segera pada agar kentang dekstrosa atau agar Sabouraud. Hindari alat transportasi.
Cara pengambilan sampel lainnya adalah melalui teknik bujur sangkar dari Mariat dan Adan Campos. Dalam hal ini, area yang terkena digosok 5 kali dengan sepotong wol steril untuk budidaya selanjutnya.
Sampel dapat ditempatkan langsung ke dalam media kultur.
-Sampel rambut
Tergantung pada patologinya, bagian yang terkena dapat dipotong atau dicabut. Tempatkan sampel di media kultur.
-Sampel kuku
Bagian tertentu dari kuku yang terkena dapat digores atau dipotong. Itu akan tergantung pada jenis cedera.
Potong sampel menjadi potongan 1 mm sebelum disemai untuk meningkatkan kemungkinan kontak jamur dengan media kultur.
Prosedur identifikasi
Koloni yang diperoleh pada cawan diisolasi dalam tabung yang berisi agar kentang dekstrosa untuk melakukan studi makroskopik koloni (penampilan, warna, konsistensi, derajat perkembangan.
Studi mikroskopis (pengamatan struktur dan pembentukannya), dapat dilakukan dengan kultur mikro atau pengamatan langsung di bawah mikroskop antara lamina dan lamela.
jumlah koloni
Media ini juga dapat digunakan untuk menentukan jumlah jamur dan ragi yang ada dalam sampel tanaman, makanan, kosmetik, atau obat-obatan. Untuk tujuan ini, agar kentang dekstrosa yang dilengkapi dengan antibiotik, seperti: (kloramfenikol, klorotetrasiklin atau keduanya).
Tuang 1 ml sampel – sebaiknya diencerkan – ke dalam cawan Petri steril dan kosong, kemudian lelehkan agar kentang dekstrosa dan biarkan dingin hingga 45 ° C. Tuang ke dalam cawan petri dan putar hingga homogen. Biarkan istirahat sampai mengeras.
Inkubasi secara aerob pada suhu 20-25°C (cetakan) atau 30-32°C (ragi) selama 5 sampai 7 hari atau lebih, tergantung jenis jamur yang dicari dan jenis sampelnya. Dua piring dapat digunakan untuk menetaskan di kedua rentang suhu.
Menghitung koloni jamur dalam sampel makanan. Agar kentang dekstrosa dilengkapi dengan antibiotik. Sumber: Foto Pxhere.com / 777267
Pemeliharaan strain jamur
Potato Dextrose Agar dapat digunakan untuk mempertahankan strain jamur yang hidup selama beberapa tahun.
Untuk ini, jamur ditanam pada irisan agar kentang dekstrosa dan setelah jamur tumbuh, ditutupi dengan minyak mineral. Minyak harus disterilkan dalam autoklaf selama 45 menit, dan memiliki viskositas sekitar 300 hingga 330 Saybolt. Minyak harus 1 sampai 2 cm di atas ujung bevel.
QA
Dari setiap batch yang disiapkan, 1 atau 2 piring harus diambil dan diinkubasi pada suhu 25 ° C selama 48 jam atau pada suhu 20 ° C selama 96 jam. Kontrol sterilitas yang baik adalah kontrol di mana perkembangan koloni tidak diamati.
Strain kontrol yang dikenal atau bersertifikat seperti:
Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. Pertumbuhan yang baik diharapkan pada semua kasus.
Referensi
- Laboratorium Britannia. Agar kentang glukosa. 2015.Tersedia di: britanialab.com
- Laboratorium Neogen. agar kentang dekstrosa. Tersedia di: foodsafety.neogen.com
- Laboratorium Insumolab. agar kentang dekstrosa. Tersedia di: insumolab.cl
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosa Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 edisi Editorial Panamericana SA Argentina.
- Casas-Rincón G. Mikologi Umum. 1994. Edisi ke-2 Universitas Pusat Venezuela, Edisi Perpustakaan. Venezuela Caracas.
- Aceituno M. Evaluasi Mutu Mikrobiologi Eyeshadow Jenis Bedak Kompak di Laboratorium Produksi Nasional Menurut Metode Rujukan Pharmacopea Usp 2005. Skripsi untuk memenuhi syarat sebagai Ahli Kimia Farmasi. Universitas San Carlos Guatemala.
- Cuétara M. Pengolahan sampel permukaan. Jurnal Mikologi Ibero-Amerika. 2007; hal. 1-12
