agar BIGGY adalah selektif medium padat dan budaya diferensial. Itu dirancang untuk mengisolasi dan membantu dalam identifikasi spesies Candida utama. Namanya BIGGY berasal dari akronim dalam bahasa Inggris Bismuth Glucose Glycine Yeast.
Formula asli diciptakan oleh Nickerson, itulah sebabnya media ini juga dikenal sebagai agar Nickerson. Saat ini terdiri dari ekstrak ragi, glisin, dekstrosa, amonium sitrat, bismut sitrat, natrium sulfit dan agar.
Representasi grafis agar BIGGY. Sumber: Flickr.com
Agar BIGGY diformulasikan untuk diferensiasi spesies Complex C. albicans, C. tropicalis, C. krusei dan C. kefyr, tetapi spesies lain juga tumbuh seperti Candida glabrata, C. parapsilosis, C. guilliermondii, Trichosporun sp, Geotrichum candidum dan Saccharomyces cerevisiae.
Ini memiliki sensitivitas dan spesifisitas yang baik, namun jika dibandingkan dengan media lain dengan fungsi serupa, ia berada di urutan kedua, dilampaui oleh CHROMagar. Untuk alasan ini, banyak laboratorium lebih memilih yang terakhir, meskipun jauh lebih mahal.
Harus jelas bahwa penggunaan agar BIGGY, serta cara serupa lainnya, membantu identifikasi dugaan cepat, tetapi tidak pernah konfirmasi. Oleh karena itu, metode identifikasi tambahan harus tersedia; misalnya, sistem identifikasi Vitek 32 dan API 20.
Indeks artikel
Dasar
Agar BiGGY dianggap sebagai media selektif sebagian untuk isolasi ragi, terutama dari genus Candida, meskipun genera lain dapat tumbuh.
Ini juga merupakan media diferensial karena tergantung pada spesies yang terlibat, karakteristik yang berbeda akan diamati dalam hal penampilan, warna, bentuk dan ukuran. Ini dianggap sebagai media kromogenik, karena perkembangan beragam warna di koloni.
Warna koloni khamir disebabkan oleh adanya bismut sulfit dalam agar. Nickerson menyadari bahwa ragi dari genus Candida melakukan pengurangan ekstraseluler bismut sulfit, mengubahnya menjadi bismut sulfida (zat hitam yang tidak larut). Ini menghasilkan koloni coklat muda sampai hitam.
Agar-agar ini mengandung ekstrak ragi dan dekstrosa, yang menyediakan sumber nutrisi dasar dan energi untuk pengembangan ragi. Glycine adalah stimulan pertumbuhan ragi, sementara itu menghambat pertumbuhan bakteri tertentu .
Dalam pengertian yang sama, amonium dan bismut sitrat, serta natrium sulfit bertindak sebagai penghambat pertumbuhan bakteri. Agar adalah zat yang memberikan konsistensi padat sedang.
Persiapan
Timbang 45 g media kultur dehidrasi dan larutkan dalam satu liter air suling. Kocok dan panaskan campuran, didihkan selama 1 menit sampai benar-benar larut. Media kultur ini tidak diautoklaf.
Setelah pendinginan hingga sekitar 45 ° C dalam penangas air, tuangkan 20 ml ke cawan Petri steril.
Warna media dehidrasi adalah abu-abu kekuningan dan disiapkan adalah gel putih kekuningan, di mana sedikit endapan flokulasi dapat diamati.
PH harus 6,8 ± 0,2.
Media yang disiapkan harus disimpan dalam lemari es (4 ° C) dan terlindung dari cahaya. Karena ini adalah media yang tidak dapat diautoklaf, itu harus digunakan sesegera mungkin. Penggunaannya dianjurkan dalam waktu 3 hari dari persiapannya.
Menggunakan
Pelat diinkubasi pada suhu kamar (25 ° C) selama 24, 48 dan 72 jam, dan waktu inkubasi dapat diperpanjang hingga 5 hari.
Setiap spesies Candida mengembangkan karakteristik tertentu yang membedakan satu dari yang lain. Produsen media menggambarkan karakteristik berikut untuk setiap spesies:
-Candida albicans complex: berkembang pada agar ini sebagai koloni halus, bulat, coklat atau hitam, dengan sedikit batas miselium. Dengan pengecualian bahwa warna gelap tidak menyebar ke tengah.
-Candida tropicalis: terang, koloni kecil, berwarna coklat tua, dengan pusat hitam dan batas miselium sedikit. Warna gelap menyebar ke arah tengah, ciri khas spesies ini, setelah diinkubasi selama 72 jam.
-Candida krusei mengembangkan koloni besar, rata, tampak kasar dengan batas coklat sampai kehitaman.
-Candida parakrusei : koloni berukuran sedang, sebagian besar kasar, rata. Warnanya bisa bervariasi dari coklat kemerahan gelap terang sampai coklat kemerahan muda. Perbatasan koloni memiliki miselium kekuningan yang luas.
-Candida stellatoidea : mengembangkan koloni sedang, rata, coklat tua, hampir hitam. Perkembangan miselium sangat langka.
Sebuah penelitian yang dilakukan oleh Yücesoy dan Marol pada tahun 2003, menunjukkan bahwa media CHROMagar memiliki sensitivitas dan spesifisitas yang lebih baik untuk diferensiasi dan identifikasi spesies Candida yang berbeda dari agar BIGGY.
QA
Untuk pengendalian sterilitas, plat yang tidak diinokulasi diinkubasi pada suhu 25 ° C, dalam gelap selama 24 hingga 48 jam, diharapkan tidak ada pertumbuhan apa pun, atau perubahan warna.
Strain ATCC yang direkomendasikan untuk kontrol kualitas media adalah:
Candida albicans ATCC 60193 kompleks , Candida glabrata ATCC 2001, Candida krusei ATCC 34135. Pada semua, pertumbuhan diharapkan seperti dijelaskan di atas.
Strain berikut juga dapat digunakan:
Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 dan Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. Dalam dua yang pertama, penghambatan total diharapkan, tetapi dalam kasus pertumbuhan sebagian koloni akan berwarna krem.
Pada kasus S. aureus, diharapkan dapat menghambat total, tetapi jika tumbuh sebagian, koloninya berwarna putih.
Keterbatasan
Beberapa bakteri mampu tumbuh dalam media ini dan bahkan dapat berubah warna menjadi gelap, meniru koloni Candida, tetapi ketika membuat noda koloni dan mengamatinya di bawah mikroskop, bakteri tersebut mudah dibuang.
Tabel: Karakteristik koloni beberapa khamir pada agar BIGGY menurut karya Yücesoy M dan Marol S.
Sumber: Yücesoy M, Marol S. Kinerja CHROMAGAR candida dan agar BIGGY untuk identifikasi spesies ragi. Ann Clin Mikrobiol Antimikroba. 2003; 2 (8): 1-7
Referensi
- Yücesoy M, Marol S. Kinerja CHROMAGAR candida dan agar BIGGY untuk identifikasi spesies ragi. Ann Clin Mikrobiol Antimikroba . 2003; 2 (8): 1-7.
- LAB MCD. Lembar Data Teknis Agar BIGGY. Tersedia di: mcdlab.net/
- Laboratorium Neogen. Agar-agar. Tersedia di: foodsafety.neogen.com
- Laboratorium Conda Pronadisa. agar-agar. Tersedia di: condalab.com
- Laboratorium BD. BD BiGGY Agar (Bismuth Glucose Glycine Yeast Agar). 2011.Tersedia di: bd.com
