kaldu thioglycollate adalah media diperkaya konsistensi cairan. Ia dikenal dengan akronim FTM untuk akronimnya dalam Bahasa Inggris Fluid Thioglycollate Medium. Itu dibuat oleh Brewer dan dimodifikasi pada tahun 1944 oleh Vera, yang menambahkan kasein pepton ke dalamnya.
Media ini memiliki potensi oksidasi – reduksi yang rendah, oleh karena itu tidak direkomendasikan untuk pengembangan bakteri aerob ketat, tetapi sangat ideal untuk memulihkan bakteri aerob fakultatif, anaerob ketat, dan mikroaerofilik ringan.
Kaldu tioglikolat tanpa indikator. Menunjukkan keputihan. Sumber: Bobjgalindo [CC BY-SA 4.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0)]
Kinerja tinggi yang diamati dengan media ini dalam isolasi dan pemulihan berbagai macam mikroorganisme, telah membuatnya diterima oleh Farmakope Amerika Serikat (USP), oleh Asosiasi Resmi Ahli Kimia Pertanian (AOAC) dan oleh Farmakope Eropa ( EP) .
Direkomendasikan oleh organisasi-organisasi ini untuk pengujian pengendalian sterilitas produk farmasi dan untuk pengayaan berbagai jenis sampel.
Cado tioglikolat terdiri dari ekstrak ragi, pencernaan kasein pankreas, dekstrosa anhidrat, L-sistin, natrium klorida, natrium tioglikolat, resazurin, dan agar dalam jumlah kecil.
Ada beberapa versi media ini, antara lain: kaldu tioglikolat dengan indikator, kaldu tioglikolat tanpa indikator, kaldu tioglikolat dengan indikator yang diperkaya dengan hemin dan vitamin K 1, dan kaldu tioglikolat dengan kalsium karbonat.
Perlu dicatat bahwa varian kaldu tioglikolat yang diperkaya dengan hemin dan vitamin K berfungsi untuk meningkatkan pertumbuhan bakteri anaerob yang rewel, dan varian kaldu tioglikolat yang mengandung kalsium karbonat berguna untuk melawan asam yang dihasilkan selama pertumbuhan mikroba.
Indeks artikel
Dasar
Kaldu tioglikolat dianggap sebagai media pengayaan non-selektif karena memungkinkan pertumbuhan sebagian besar bakteri yang tidak rewel. Kebutuhan nutrisi disediakan oleh ekstrak ragi, cerna pankreas, dan glukosa.
Di sisi lain, media ini, meskipun berupa kaldu, mengandung sedikit agar-agar; Ini berarti bahwa ia memiliki potensi oksidasi-reduksi yang rendah, karena fakta bahwa ia memperlambat masuknya oksigen, sedemikian rupa sehingga oksigen berkurang saat masuk lebih dalam ke dalam tabung.
Itulah mengapa media ini sangat ideal untuk pengembangan bakteri aerobik fakultatif, mikroaerofilik dan anaerobik ketat, yang terakhir 2 tanpa perlu diinkubasi dalam kondisi ini. Media yang sama mengatur jumlah oksigen di dalam media, tidak ada di bagian bawah tabung dan dalam jumlah yang cukup di permukaan.
Demikian juga, tioglikolat dan L-sistin bertindak sebagai zat pereduksi, membantu mencegah akumulasi zat yang berbahaya bagi perkembangan bakteri, seperti peroksida. Selain itu, senyawa ini mengandung gugus sulfhidril (-SH-), menetralkan efek penghambatan turunan merkuri, arsenik, di antara logam berat lainnya.
Untuk bagiannya, resazurin adalah indikator reduksi oksida. Zat ini tidak berwarna bila direduksi dan berwarna merah muda bila dioksidasi. Terdapat varian kaldu tioglikolat indikator dan non indikator. Penggunaannya akan tergantung pada jenis sampel dan preferensi laboratorium.
Sementara itu, natrium klorida menjaga keseimbangan osmotik kaldu tioglikolat dan penggunaan glukosa dalam bentuk anhidrat mencegah kelebihan air dalam media dehidrasi.
Persiapan
Kaldu Thioglikolat dengan Indikator
Timbang 29,75 g media dehidrasi dan larutkan dalam 1 liter air suling . Campuran didiamkan selama kurang lebih 5 menit. Bawa ke sumber panas dan kocok sering sampai benar-benar larut.
Tuang media ke dalam tabung reaksi dan autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit. Biarkan dingin sebelum digunakan. Periksa sisipan rumah komersial untuk konservasinya. Beberapa merekomendasikan penyimpanan pada suhu kamar di tempat yang gelap, dan yang lain di lemari es yang terlindung dari cahaya.
PH media yang disiapkan adalah 7,1 ± 0,2.
Warna media yang didehidrasi adalah krem muda dan media yang disiapkan berwarna kuning muda dengan sedikit opalescence.
Thioglycollate kaldu dengan indikator diperkaya dengan hemin dan vitamin K 1
Ada media komersial yang sudah mengandung hemin dan vitamin K 1 , terutama untuk budidaya anaerob.
Jika media anaerobik yang diperkaya tidak tersedia, kaldu tioglikolat dasar dapat disiapkan. Untuk ini, 10 mg hemin hidroklorida dan 1 mg vitamin K 1 ditambahkan untuk setiap liter media. Namun, jika darah atau serum ditambahkan ke kaldu tioglikolat, penambahan hemin atau vitamin K tidak diperlukan.
Kaldu tioglikolat dengan kalsium karbonat
Itu datang secara komersial dan disiapkan mengikuti instruksi pada sisipan.
Kaldu tioglikolat tanpa indikator
Ini memiliki komposisi tioglikolat dasar yang sama, tetapi tidak mengandung resazurin.
Timbang 30 g media dehidrasi dan larutkan dalam satu liter air suling. Persiapan lainnya sama dengan yang dijelaskan untuk kaldu tioglikolat dengan indikator.
Menggunakan
Kaldu tioglikolat berguna untuk pengayaan sampel klinis, terutama yang berasal dari tempat steril. Ini juga berguna untuk sampel non-klinis, seperti kosmetik, obat-obatan, dll.
Untuk inokulasi sampel cair (seperti CSF, cairan sinovial, dan lain-lain), sampel terlebih dahulu disentrifugasi dan kemudian 2 tetes sedimen diambil dan ditempatkan dalam kaldu tioglikolat. Inkubasi pada suhu 35 °C selama 24 jam. Jika selama ini tidak ada pertumbuhan (kekeruhan), diinkubasi maksimal 7 hari.
Jika sampel diambil dengan swab, media kultur pertama diinokulasi dalam piring dan akhirnya swab dimasukkan ke dalam kaldu, bagian yang menonjol dibelah dan tabung ditutup, meninggalkan swab di dalam. Inkubasi pada suhu 35°C selama 24 jam, maksimal 7 hari.
Untuk sampel padat, homogenkan dalam larutan garam fisiologis (SSF) dan kemudian inokulasi kaldu tioglikolat dengan 2 tetes suspensi.
Kadang-kadang dapat digunakan sebagai media transportasi untuk sampel di mana diduga adanya anaerob yang ketat atau sebagai kaldu pengayaan cadangan.
Varian kaldu tioglikolat dengan kalsium karbonat digunakan untuk pemeliharaan galur kontrol untuk waktu yang lebih lama, karena memiliki kemampuan untuk menetralkan asam yang dihasilkan oleh penggunaan glukosa; Asam ini beracun bagi bakteri tertentu.
Pertumbuhan kaldu tioglikolat akan diamati dengan kekeruhan media. Direkomendasikan untuk melakukan pewarnaan Gram dan kemudian subkultur dalam media non-selektif dan selektif, tergantung pada jenis sampel dan mikroorganisme yang dicurigai.
QA
Untuk pengendalian sterilitas dianjurkan untuk menginkubasi satu atau dua kaldu tanpa inokulasi. Hasil yang diharapkan adalah kuah bening, tanpa perubahan warna, meskipun normal untuk melihat sedikit warna merah muda pada permukaan tabung.
Untuk kontrol kualitas, antara 10 – 100 CFU strain kontrol bersertifikat, seperti Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCC 19404, Clostridium 11437, Bacteroides vulgatus .
Inkubasi pada suhu 30-35 ° C secara aerobiosis selama 24 jam hingga maksimal 3 hari, karena mikroorganisme ini tumbuh cepat.
Perkembangan yang baik diharapkan pada semua kasus, dengan pengecualian Micrococcus luteus dan Bacillus subtilis, di mana mungkin ada perkembangan sedang.
Untuk pengendalian mutu kaldu tioglikolat yang diperkaya dengan hemin dan vitamin K 1 , dapat digunakan strain kontrol Bacteroides vulgatus ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 dan Bacteroides fragilis ATCC 25285. Hasil yang diharapkan adalah pertumbuhan yang memuaskan.
rekomendasi
-Kadang-kadang dapat diamati bahwa permukaan kaldu tioglikolat dengan indikator berubah menjadi merah muda; Ini karena oksidasi medium. Jika warna merah muda menutupi 30% atau lebih dari total kaldu, dapat dipanaskan dalam penangas air selama 5 menit, didinginkan kembali, dan digunakan.
Ini akan menghilangkan oksigen yang diserap, mengembalikan media ke warna aslinya. Prosedur ini hanya dapat dilakukan sekali.
-Untuk meningkatkan pertumbuhan bakteri aerob, harus diinkubasi dengan tutup agak longgar. Namun, untuk tujuan ini lebih baik menggunakan kaldu infus otak-jantung atau kaldu kedelai trypticase untuk pengembangan aerob ketat yang tepat.
-Pembekuan media atau panas berlebih harus dihindari, karena kedua kondisi tersebut merusak media.
-Cahaya langsung merusak media kultur, harus disimpan terlindung dari cahaya.
Referensi
- Laboratorium Britannia. Thioglycollate USP dengan indikator. 2015. Tersedia di: labBritania.com.
- Laboratorium Chios Sas. 2019. Kaldu tioglikolat. Tersedia di: quios.com.co
- Laboratorium BD Fluid Thioglycollate Medium (FTM). 2003.Tersedia di: bd.com/Europe
- Media BBL disiapkan dalam tabung untuk budidaya mikroorganisme anaerob. media tioglikolat. 2013.Tersedia di: bd.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosa Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 edisi Editorial Panamericana SA Argentina.