agar Baird Parker adalah selektif medium padat dan budaya diferensial. Itu dibuat pada tahun 1962 untuk deteksi dan penghitungan staphylococci koagulase positif ( Staphylococcus aureus ).
Ini terdiri dari hidrolisat pankreas kasein, ekstrak daging, ekstrak ragi, litium klorida, glisin, natrium piruvat, kalium telurit, agar dan emulsi kuning telur.
Koloni Staphylococcus aureus yang khas pada agar Baird Parker. Sumber: Daizy John [CC BY 4.0 (https://creativecommons.org/licenses/by/4.0)]
Baird Parker Agar didasarkan pada kemampuan S. aureus untuk mereduksi telurit dan menghasilkan lesitinase. Kedua sifat tersebut menghasilkan koloni dengan karakteristik khusus untuk spesies ini. Oleh karena itu, sangat efektif dalam mendeteksi mikroorganisme ini.
Koloni khas S. aureus berwarna hitam atau abu-abu gelap, dengan batas tidak berwarna dan lingkaran cahaya yang mengelilinginya, membedakannya dari mikroorganisme lainnya. Patogen ini dapat ditemukan dalam sampel klinis, air, kosmetik, dan makanan mentah atau dimasak.
Diagnosis atau deteksinya sangat penting, karena berbagai patologi yang dihasilkannya, seperti keracunan makanan, sindrom kulit tersiram air panas, sindrom syok toksik, abses, meningitis, septikemia, endokarditis, dan lain-lain.
Indeks artikel
Dasar
Kekuatan nutrisi
Hidrolisat kasein pankreas, ekstrak daging dan ekstrak ragi adalah sumber nutrisi, vitamin dan mineral yang diperlukan untuk perkembangan mikroba secara umum, sedangkan piruvat dan glisin adalah senyawa yang mendorong pertumbuhan spesifik Staphylococcus aureus .
Selektif
Baird Parker Agar selektif karena mengandung zat yang menghambat pertumbuhan flora yang menyertainya, sekaligus mendorong perkembangan S. aureus. Senyawa penghambatnya adalah litium klorida dan kalium tellurit.
Diferensial
Media ini memungkinkan untuk membedakan S. aureus dari Staphylococci negatif koagulase lainnya. S. aureus memiliki kemampuan mereduksi telurit menjadi telurium hitam metalik bebas, membentuk koloni abu-abu tua atau hitam.
Demikian juga, kuning telur menyediakan substrat untuk menunjukkan adanya enzim lesitinase dan lipase. S. aureus adalah lesitinase positif dan oleh karena itu halo yang jelas akan terlihat di sekitar koloni, menunjukkan bahwa lesitin telah terhidrolisis.
Dalam pengertian ini, penampakan koloni hitam mengkilap atau abu-abu gelap pada agar-agar dengan lingkaran cahaya di sekelilingnya menunjukkan adanya S. aureus.
Jika zona presipitasi terbentuk, ini menunjukkan aktivitas lipase. Beberapa strain S. aureus adalah lipase positif dan yang lainnya negatif.
Dalam kasus S. aureus adalah lipase positif, area buram akan diamati di sekitar koloni hitam atau abu-abu gelap, dan kemudian lingkaran cahaya terang karena aksi lesitinase.
Koloni bakteri selain S. aureus yang mampu tumbuh pada media ini akan membentuk koloni tidak berwarna atau coklat tanpa lingkaran halo di sekitarnya.
Koloni hitam atipikal juga dapat terlihat dengan atau tanpa batas yang tidak berwarna, tetapi tanpa lingkaran cahaya. Koloni ini tidak boleh diperhitungkan, mereka tidak sesuai dengan S. aureus .
Persiapan
Emulsi kuning telur
Ambil telur ayam segar, cuci bersih dan masukkan ke dalam alkohol 70% selama 2 hingga 3 jam. Telur kemudian dibuka secara aseptik dan putih telur dipisahkan dengan hati-hati dari kuning telur. Selanjutnya diambil 50 ml kuning telur dan dicampur dengan 50 ml larutan fisiologis steril.
Kalium telurit 1% b / v
Beberapa rumah komersial menjual 1% potassium tellurite siap pakai. Ini ditambahkan ke media sebelum media mengeras.
Untuk menyiapkan larutan ini di laboratorium, 1,0 g kalium tellurit ditimbang dan dilarutkan dalam satu bagian air. Selanjutnya jumlah air ditampung hingga mencapai 100 ml. Solusinya harus disterilkan dengan metode filtrasi.
Persiapan media kultur
Timbang 60 g media dehidrasi dan larutkan dalam 940 ml air suling. Biarkan campuran selama kurang lebih 5-10 menit.
Terapkan panas dengan mengaduk media sering untuk meningkatkan proses pembubaran. Didihkan selama satu menit. Sterilkan dalam autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit.
Diamkan hingga mencapai suhu 45°C dan tambahkan 50 ml emulsi kuning telur dan 10 ml tellurite 1%. Aduk rata dan tuangkan 15-20 ml ke dalam cawan Petri steril.
Biarkan memadat, pesan dibalik dalam plakat dan simpan di lemari es sampai digunakan.
PH akhir dari media yang disiapkan harus 6,8 ± 0,2.
Sebelum menyemai sampel, tunggu piring mencapai suhu kamar. Taburkan piring dengan menggores atau dengan penyemaian permukaan dengan spatula Drigalski.
Warna media yang dikeringkan adalah cokelat muda dan warna media yang disiapkan adalah kuning muda.
Menggunakan
Sampel klinis
Sampel klinis ditaburkan langsung dengan membuang sebagian bahan di salah satu ujung pelat, dan dari sana digores karena kelelahan. Inkubasi selama 24 hingga 48 jam pada suhu 35-37°C.
Sampel makanan
Timbang 10 g sampel makanan dan homogenkan dalam 90 ml air pepton 0,1%, dari sana pengenceran disiapkan jika perlu. Inokulasi pelat dalam rangkap tiga dengan 0,3 ml larutan yang disiapkan, dan benih di permukaan dengan spatula Drigalski. Inkubasi selama 24 hingga 48 jam pada suhu 35-37°C.
Metodologi ini memungkinkan untuk menghitung koloni khas yang diperoleh dan ideal bila keberadaan S. aureus dicurigai di atas 10 CFU per g / ml sampel.
Jika jumlah S. aureus diduga sedikit atau banyak flora yang menyertainya, disarankan untuk memperkaya sampel dalam kaldu kedelai trypticase dengan NaCl 10% dan natrium piruvat 1%. Ini akan mendorong pertumbuhan S. aureus dan menghambat perkembangan flora yang menyertainya. Tabung keruh diunggulkan pada agar Baird Parker.
Sampel air
Dalam sistem penyaringan vakum yang disterilkan, 100 ml air studi disaring, dan selanjutnya membran mikropori 0,4 mikron dihilangkan dengan forsep steril dan ditempatkan pada pelat Baird Parker. Inkubasi selama 24 hingga 48 jam pada suhu 35-37°C. Teknik ini memungkinkan penghitungan koloni S. aureus yang khas .
QA
Strain yang diketahui seperti Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 atau Proteus mirabilis ATCC 43071 dapat digunakan untuk mengevaluasi kualitas agar Baird Parker .
Dalam kasus strain S. aureus ATCC, diketahui mereduksi tellurite, dan mereka adalah lipase dan lecithinase positif. Oleh karena itu, harus ada perkembangan yang memuaskan dan menumbuhkan koloni cembung dengan pusat hitam dan batas tidak berwarna, dengan halo buram dan lingkaran cahaya terluar.
Untuk bagiannya, S. epidermidis diperkirakan berkembang buruk pada media ini, dengan koloni abu-abu kecoklatan sampai hitam, tanpa lingkaran cahaya.
Untuk E. coli dan P. mirabilis diharapkan dapat dihambat seluruhnya atau sebagian. Dalam hal pertumbuhan, koloni coklat akan berkembang tanpa area kusam atau lingkaran cahaya.
rekomendasi
-Media tidak boleh dipanaskan setelah menambahkan telurit dan kuning telur.
-Pembuatan emulsi kuning telur dan penambahannya di tengah merupakan langkah yang sangat rentan terhadap kontaminasi. Perawatan ekstrim harus diambil.
-Jika terdapat koloni khas S. aureus, harus dipastikan dengan memasang uji koagulase pada galur tersebut.
-Jika ada hasil yang meragukan dengan koagulase, tes konfirmasi lainnya harus dipasang.
-Hati-hati untuk tidak mengacaukan keberadaan koloni khas S. aureus dengan koloni hitam atipikal.
Referensi
- Kontributor Wikipedia. Agar Baird-Parker. Wikipedia, ensiklopedia gratis. 15 Maret 2017, 19:36 UTC. Tersedia di: wikipedia.org/ Diakses pada 18 Februari 2019.
- Laboratorium BD. Agar Baird Parker. 2006. Tersedia di: bd.com
- Laboratorium Britannia. Basis agar Baird Parker. 2015.Tersedia di: britanialab.com
- Laboratorium Francisco Soria Melguizo. 2009. Agar Baird Parker. Tersedia di: http://f-soria.es/Inform
- Laboratorium Britannia. telurit kalium. 2015.Tersedia di: britanialab.com
- Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Pengangkutan enterotoksigenik Staphylococcus aureus tipe A, pada noda nasofaring pada penjamah makanan. Rev Med Chili 2017; 145: 1559-1564
- Kovenan Standar Venezuela 1292-89. (1989). Makanan. Isolasi dan enumerasi Staphylococcus aureus. Tersedia di: sencamer.gob.ve
