agar Vogel-Johnson merupakan media selektif dan diferensial budaya yang solid, diformulasikan khusus untuk isolasi Staphylococcus aureus . Media ini diciptakan oleh Vogel dan Johnson pada tahun 1960 dari modifikasi agar tellurite glisin yang diformulasikan pada tahun 1955 oleh Zebovitz, Evans dan Niven.
Modifikasi terdiri dalam meningkatkan konsentrasi manitol hadir dalam media dan penggabungan indikator pH. Formula saat ini terdiri dari triptein, ekstrak ragi, manitol, dipotassium phosphate, lithium chloride, glycine, phenol red, agar, 1% larutan potassium tellurite, dan air.
Sumber: Pixinio.com/Laboratorio de la Clínica ProcreaTec. Flickr.
Perlu dicatat bahwa ada media lain yang, seperti agar Vogel-Johnson, selektif untuk isolasi S. aureus , seperti agar manitol asin dan agar Baird Parker. Dalam pengertian ini, dapat dikatakan bahwa dasar agar Vogel-Johnson adalah campuran antara agar-agar manitol asin dan agar-agar Baird Parker.
Pertama, koloni S. aureus dibedakan dengan memfermentasi manitol dan mengubah indikator pH menjadi kuning. Di sisi lain, yang kedua, S. aureus dicirikan dengan mereduksi telurit menjadi telurium dan membentuk koloni abu-abu hingga hitam. Kedua sifat tersebut diamati pada agar Vogel-Johnson.
Media ini, seperti rekan-rekannya, berguna untuk mendeteksi Staphylococcus aureus dalam sampel makanan, kontrol sanitasi produk industri dan sampel klinis.
Indeks artikel
Dasar
Pasokan nutrisi
Medium Vogel-Johnson mengandung triptein dan ekstrak ragi; Kedua zat tersebut menyediakan asam amino rantai panjang yang berfungsi sebagai sumber karbon dan nitrogen yang diperlukan untuk pertumbuhan bakteri. bakteri mampu tumbuh di media ini mengambil nutrisi dari zat ini.
Kekuatan selektif
Agar Vogel-Johnson mampu menghambat pertumbuhan bakteri Gram negatif dan bahkan beberapa bakteri Gram positif, mendukung perkembangan staphylococci koagulase positif. Zat penghambatnya adalah kalium telurit, litium klorida dan glisin.
Kekuatan diferensial
Zat yang membuat perbedaan medium ini adalah manitol dan kalium tellurit. Manitol adalah karbohidrat, dan ketika difermentasi, asam diproduksi yang membuat media berubah dari merah menjadi kuning, yang terjadi berkat adanya indikator pH fenol merah.
Sedangkan, tellurite yang tidak berwarna ketika direduksi menjadi telurium logam bebas, mengambil warna abu-abu gelap hingga hitam.
Staphylococcus aureus fermentasi manitol dan mengurangi tellurite untuk telurium. Untuk alasan ini, koloni khas S. aureus pada media ini berwarna abu-abu atau hitam yang dikelilingi oleh media kuning.
Bakteri yang tumbuh dalam media ini dan tidak mereduksi telurit atau memfermentasi manitol, akan membentuk koloni transparan yang dikelilingi oleh media berwarna merah, bahkan lebih intens dari warna aslinya, karena alkalinisasi media dengan menggunakan pepton.
Di sisi lain, bakteri yang mereduksi telurit tetapi tidak memfermentasi manitol akan tumbuh sebagai koloni abu-abu atau hitam yang dikelilingi oleh media merah tua.
Jika media dibuat tanpa penambahan kalium tellurit, koloni S. aureus akan berkembang sebagai koloni kuning, dikelilingi oleh media kuning, seperti pada agar manitol asin.
Keseimbangan osmotik dan zat pemadatan
Dipotassium phosphate menjaga keseimbangan osmotik medium dan mengatur pH ke netralitas 7.2. Sedangkan agar-agar memberikan konsistensi padat pada media kultur.
Persiapan
Larutan telurit kalium 1% b / v
Larutan ini tidak termasuk dalam media dehidrasi, karena tidak dapat disterilkan dalam autoklaf. Untuk alasan ini disiapkan secara terpisah dan ditambahkan ke media yang sudah disterilkan.
Beberapa rumah komersial menjual larutan tellurite kalium 1% yang siap pakai. Jika Anda ingin mempersiapkan di laboratorium, lakukan sebagai berikut:
Timbang 1,0 g kalium tellurit dan ukur 100 ml air suling. Larutkan potasium tellurite dalam sebagian air lalu tambahkan air secukupnya hingga mencapai 100 ml. Sterilkan larutan dengan metode filtrasi.
Medium Dasar Agar Vogel-Johnson
Timbang 60 g media dehidrasi, dan larutkan dalam 1 liter air suling. Campuran dipanaskan sampai mendidih untuk membantu pembubaran lengkap. Selama proses pembubaran, media sering diaduk.
Sterilkan dalam autoklaf pada tekanan 15 pound dan 121°C selama 15 menit. Keluarkan dari autoklaf dan diamkan hingga media mencapai suhu kurang lebih 45 sampai 50 °C. Tambahkan 20 ml larutan tellurit kalium 1% yang telah disiapkan sebelumnya.
Campur dan tuang ke dalam cawan petri steril. Biarkan hingga memadat dan pesan dalam wadah piring terbalik untuk kemudian disimpan di lemari es sampai digunakan.
PH akhir dari media yang disiapkan harus 7,2 ± 0,2.
Sebelum menabur sampel, tunggu piring mencapai suhu kamar.
Warna media yang disiapkan adalah merah.
Menggunakan
Meskipun dapat digunakan untuk isolasi S. aureus dalam semua jenis sampel, ini terutama digunakan untuk analisis mikrobiologi produk farmasi, kosmetik dan makanan.
Disarankan agar inokulum padat. Pembibitan dapat dilakukan dengan penggoresan gagang platina atau permukaan dengan spatula Drigalski.
Pelat diinkubasi pada 35-37 ° C selama 24 hingga 48 jam dalam aerobiosis.
QA
Strain kontrol berikut dapat digunakan untuk melakukan kontrol kualitas pada media Vogel-Johnson:
Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 atau Proteus mirabilis ATCC 43071.
Hasil yang diharapkan adalah sebagai berikut: untuk galur S. aureus pertumbuhannya memuaskan dengan koloni hitam yang dikelilingi media kuning. Untuk S. epidermidis pertumbuhannya teratur dengan koloni tembus cahaya atau hitam dikelilingi media merah.
Demikian juga, penghambatan total diharapkan untuk E. coli , dan penghambatan sebagian atau total untuk Proteus mirabilis ; jika tumbuh ia akan melakukannya dengan hemat dan koloni akan berwarna hitam dikelilingi oleh warna merah.
Referensi
- Laboratorium BD. VJ (Vogel dan Johnson Agar). 2006. Tersedia di: bd.com
- Laboratorium Britannia. Vogel- Johnson Agar. 2015.Tersedia di: britanialab.com
- Laboratorium Britannia. telurit kalium. 2015.Tersedia di: britania.com
- Laboratorium Himedia. Medium Agar Vogel Johnson. 2018.Tersedia di: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
- Vogel-Johnson Agar Base. Manual Mikrobiologi Merck. Edisi ke-12, hal 502-503. Tersedia di: Pengguna / Tim / Unduhan
- Kontributor Wikipédia, “Ágar Vogel Jonhson”, Wikipédia sebuah ensiklopedia gratis, tersedia di: wikipedia.org.
- Kovenan Standar Venezuela 1292-89. (1989). Makanan. Isolasi dan enumerasi Staphylococcus aureus. Tersedia di: sencamer.gob.ve
