agar hijau brilian adalah media kultur padat dengan tingkat tinggi selektivitas. Ini digunakan secara eksklusif untuk isolasi strain genus Salmonella, namun ada beberapa pengecualian, seperti spesies typhi dan paratyphi yang tidak tumbuh pada media ini.
Pencarian genus Salmonella sering dilakukan pada sampel tinja, air atau makanan. Dalam hal ini, media ini bisa sangat berguna. Agar ini dibuat pada tahun 1925 oleh Kristensen, Lester dan Jurgens, kemudian dimodifikasi oleh Kauffmann.
Agar-agar hijau cerah. Koloni fermentasi dan non-fermentasi masing-masing. Sumber: MJ Richardson / Pameran Dunia Tak Terlihat – 2012geograph.org.uk/photo/2815842 Lisensi Creative Commons.
Ini terdiri dari pluripeptones dari pencernaan jaringan hewan dan pencernaan pankreas kasein, juga mengandung ekstrak ragi, natrium klorida , laktosa, sukrosa, fenol merah, hijau cerah dan agar-agar.
Hal ini ditandai dengan menjadi lingkungan yang cukup tidak ramah bagi sebagian besar bakteri , mendukung pertumbuhan Salmonella, namun beberapa coliform mampu hidup di dalamnya, berkembang dengan lemah.
Yang penting dalam media ini tidak tumbuh genus Shigella, maupun Salmonella typhimurium , dan Salmonella paratyphi. Oleh karena itu, jika ingin mengisolasi mikroorganisme tersebut, sebaiknya digunakan media lain, antara lain agar XLD.
Indeks artikel
Dasar
agar-agar hijau cerah
Masing-masing komponen yang membentuk media memenuhi fungsi tertentu yang menentukan karakteristik dan sifat agar-agar.
Pluripeptones dan ekstrak ragi adalah sumber nutrisi dari mana mikroorganisme mengambil nitrogen dan mineral yang diperlukan untuk perkembangannya. Laktosa dan sukrosa merupakan sumber energi bagi mikroorganisme yang mampu memfermentasinya.
Hijau terang adalah zat penghambat yang mencegah pertumbuhan bakteri Gram positif dan sejumlah besar mikroorganisme Gram negatif.
Natrium klorida memberikan stabilitas osmotik pada medium. Sementara fenol merah adalah indikator pH, berubah warna ketika mendeteksi produksi asam dari fermentasi karbohidrat.
Koloni laktosa dan sukrosa yang tidak mengalami fermentasi tumbuh pada media ini dalam warna putih merah muda atau transparan, dengan latar belakang merah. Misalnya bakteri dari genus Salmonella.
Sedangkan bakteri yang memfermentasi laktosa atau sukrosa yang mampu tumbuh pada media ini mengembangkan koloni kuning-hijau atau kuning-hijau dengan latar belakang kuning kehijauan. Misalnya Escherichia coli dan Klebsiella pneumoniae .
Varian agar hijau terang (BGA)
Ada varian lain agar hijau cerah; Agar Novobiocin Brilliant Green Glucose (NBG) dan Agar Novobiocin Brilliant Green Glycerol Lactose (NBGL).
Novobiosin Bright Green Glucose Agar (NBG)
Mengandung Trypticase Soy Agar, Ferric Ammonium Sitrat, Sodium Thiosulfate Pentahydrate, Phenol Red, Glucose, Bright Green, Novobiocin, dan Distilled Water.
Ini digunakan untuk isolasi koloni Salmonella dari sampel tinja.
Dalam hal ini, hijau terang dan novobiocin adalah zat penghambat yang mencegah pertumbuhan bakteri Gram positif dan beberapa mikroorganisme Gram negatif.
Natrium tiosulfat adalah sumber sulfida dan besi sitrat adalah sumber besi, keduanya diperlukan untuk mengungkapkan produksi hidrogen sulfida melalui pembentukan endapan besi sulfida hitam.
Glukosa adalah karbohidrat yang dapat difermentasi dan fenol merah adalah indikator pH.
Pada media ini, koloni Salmonella berkembang menjadi besar dengan bagian tengah berwarna hitam yang dikelilingi oleh halo kemerahan dan diikuti dengan area yang terlihat jelas. Beberapa strain Citrobacter freundii menghasilkan koloni yang identik dengan Salmonella.
Novobiosin Brilliant Green Gliserol Laktosa Agar (NBGL)
Media ini mengandung trypticase soy agar, ferric ammonium citrate, sodium tiosulfat, laktosa, gliserol, hijau terang, novobiocin, dan air suling .
Perbedaan antara media ini dan yang sebelumnya adalah bahwa glukosa digantikan oleh laktosa dan gliserol dan fenol merah tidak digunakan.
Media juga digunakan untuk mengisolasi spesies Salmonella, koloni berkembang menjadi hitam, karena produksi hidrogen sulfida.
Hanya koloni yang tidak menghasilkan asam dari gliserol atau laktosa yang mencapai produksi H 2 S yang cukup , karena pH rendah mengganggu pembentukan H 2 S. Hal ini menyebabkan koloni tidak berwarna untuk sebagian besar spesies Proteus dan Citrobacter.
Persiapan
-Timbang 58 gram media dehidrasi yang diperoleh secara komersial. Tambahkan ke satu liter air suling. Campur, diamkan beberapa menit dan tempatkan campuran di atas sumber panas sampai benar-benar larut.
-Autoclave pada 121 ° C selama 15 menit, tidak melebihi waktu sterilisasi.
– Diamkan dan sajikan selagi panas dalam cawan Petri steril. PH akhir harus 6,9 ± 0,2.
-Biarkan mengeras dan simpan di lemari es sampai digunakan. Sebelum menyemai piring, mereka harus mengambil suhu kamar.
-Media bubuk berwarna hijau dan disiapkan mengambil warna oranye-coklat atau hijau kemerahan, tergantung pada pH dan perusahaan komersial. Warna yang sangat coklat menunjukkan bahwa agar-agar terlalu panas.
-Setelah agar-agar memadat, tidak disarankan untuk membentuk kembali, karena medianya akan rusak.
Penggunaan / aplikasi
Media ini digunakan untuk mencari strain genus Salmonella dari sampel tinja dan makanan susu, antara lain.
Karena ini adalah lingkungan yang agak tidak ramah, disarankan untuk menabur inokulum yang melimpah jika sampel langsung digunakan. Jika tidak, pra-pengayaan dan pengayaan spesimen harus dilakukan sebelum disemai di media ini.
Karena beberapa galur Salmonella dihambat atau tumbuh dengan susah payah, disarankan untuk menyertai media ini dengan agar selektif lainnya untuk Salmonella.
Setiap koloni dengan ciri khas Salmonella harus menjalani uji biokimia untuk identifikasi definitifnya.
QA
Untuk menguji kinerja yang baik dari media agar hijau terang, strain ATCC dapat digunakan untuk mengamati perkembangannya di atasnya.
Strain yang paling sering digunakan untuk kontrol kualitas adalah: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922, Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538.
3 yang pertama harus memberikan koloni putih merah muda atau transparan pada latar belakang merah. Salmonella dengan perkembangan yang baik dan Proteus dengan pertumbuhan yang sedikit atau teratur.
Untuk Klebsiella dan Escherichia, koloni kuning-hijau dengan latar belakang kuning diharapkan dan dalam kasus Shigella dan Staphylococcus mereka harus dihambat.
Media dehidrasi harus disimpan pada suhu kamar, di tempat yang kering, karena media sangat higroskopis.
Referensi
- Laboratorio Difco Francisco Soria Melguizo SA Agar Hijau Cemerlang. 2009
- Laboratorium Britannia. Agar Hijau Cerah. 2015.
- Laboratorium BD. BD Brilliant Green Agar. 2013.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosa Mikrobiologi. (edisi ke-5). Argentina, Editorial Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 edisi Argentina. Editorial Panamericana SA
