agar Hektoen atau Hektoen enteric agar media padat adalah selektif dan budaya diferensial. Itu dibuat di Institut Hektoen oleh King dan Metzger untuk isolasi bakteri enteropatogenik dari genus Shigella dan Salmonella.
Medium terdiri dari proteosa pepton, ekstrak ragi, garam empedu, laktosa, sukrosa, salisin, natrium tiosulfat, natrium klorida , besi sitrat, amonium sitrat, bromotimol biru, asam fuchsin, dan agar. Formulasi ini memungkinkan untuk membedakan genus Shigella dan Salmonella dari bakteri lain yang mampu tumbuh dalam media ini.
A. Agar Hektoen Perawan B. Agar Hektoen Berbiji. Sumber: Flickr.com/Pengunggah asli adalah Philippinjl di Wikipedia bahasa Prancis. [CC BY-SA 2.0 fr (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/2.0/fr/deed.en)]
Meskipun terdapat media lain yang memiliki fungsi yang sama dengan agar Hektoen, namun memiliki keunggulan yang lebih besar dibandingkan media lain, terutama bila ingin mendapatkan kembali spesies Shigella.
Spesies dari kedua jenis kelamin menghasilkan masalah pencernaan yang parah pada manusia karena konsumsi makanan yang terkontaminasi; oleh karena itu penularannya melalui feses – oral. Itulah sebabnya penggunaan agar Hektoen terutama ditunjukkan dalam analisis mikrobiologis sampel tinja dan makanan.
Indeks artikel
Dasar
Hektoen Agar mengandung pepton dan ekstrak ragi sebagai sumber nutrisi, menyediakan unsur penting untuk perkembangan mikroba.
Namun, ia juga memiliki garam empedu yang bekerja dengan menghambat pertumbuhan beberapa bakteri, terutama Gram positif dan beberapa Gram negatif. Karena alasan inilah ia dianggap sebagai media selektif.
Di sisi lain, agar Hektoen adalah media diferensial. Sifat ini diberikan oleh adanya karbohidrat yang dapat difermentasi seperti laktosa, sukrosa dan salisin, bersama dengan sistem indikator pH, yang diwakili oleh bromotimol biru dan asam fuchsin.
Semua bakteri yang mampu tumbuh pada media ini yang tidak termasuk genus Salmonella dan Shigella akan mengembangkan koloni salmon atau jingga kecuali genus Proteus. Ini karena fermentasi satu atau lebih karbohidrat yang ada, yang mengasamkan medium, yang membuat indikator pH berubah.
Untuk bagiannya, genus Shigella dan Salmonella tidak mampu memfermentasi karbohidrat apa pun yang ada, hanya menggunakan pepton sebagai sumber energi, yang membuat media menjadi alkali dan oleh karena itu koloninya berwarna biru-hijau.
Bakteri yang mampu membentuk hidrogen sulfida (gas tak berwarna) juga dapat dibedakan dalam media ini. Sodium tiosulfat bertindak sebagai sumber belerang sementara besi sitrat adalah pengembangnya. Kedua senyawa tersebut memungkinkan terbentuknya endapan hitam besi sulfida yang menunjukkan reaksi tersebut.
Endapan hitam di tengah koloni dengan lingkaran transparan di sekelilingnya memberikan tampilan seperti mata ikan. Karakteristik ini menunjukkan adanya genus Salmonella.
Akhirnya, natrium klorida mempertahankan keseimbangan osmotik dan agar-agar memberikan konsistensi padat pada medium.
Persiapan
Timbang 76 g media dehidrasi dan larutkan dalam satu liter air suling. Kocok campuran dengan kuat lalu diamkan selama 10 hingga 15 menit. Itu bisa dipanaskan dan direbus, memberikan gerakan putar sampai pembubaran totalnya. Media ini tidak dapat diautoklaf.
Ketika media mencapai suhu sekitar 45 ° C, volume 20 ml dituangkan langsung ke dalam cawan Petri steril.
Agar-agar dibiarkan memadat. Pada saat itu mereka siap untuk digunakan. Disarankan untuk segera menggunakannya. Jika ini tidak memungkinkan, mereka disimpan di lemari es sampai digunakan.
Piring harus dikeluarkan dari lemari es terlebih dahulu sebelum disemai untuk membawanya ke suhu kamar.
PH media harus 7,5 ± 0,2. Warna media yang dikeringkan adalah ungu dan media yang disiapkan berwarna hijau kecoklatan.
Menggunakan
Penggunaan agar Hektoen dianjurkan untuk mencari bakteri genus Shigella dan Salmonella pada sampel tinja dan makanan.
Kemungkinan mengisolasi bakteri ini sangat meningkat jika sampel sebelumnya diperkaya dalam kaldu khusus, seperti kaldu selenit, kaldu sistin selenit, kaldu tetrationat, dll.
Inokulum harus kuat dan penaburan dilakukan dengan cara digores. Pelat diinkubasi pada suhu 37 ° C selama 24 hingga 48 jam dalam aerobiosis.
Inkubasi selama 48 jam direkomendasikan karena karakteristik koloni lebih jelas untuk interpretasi dan diferensiasinya saat ini.
QA
Untuk melakukan kontrol kualitas pada media ini, digunakan strain bakteri bersertifikat, seperti: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 dan Shigella sonnei ATCC 25931.
Hasil yang diharapkan adalah sebagai berikut: Salmonella typhimurium dan Salmonella enteritidis harus mengembangkan koloni biru-hijau dengan atau tanpa pusat hitam. Sedangkan spesies Shigella akan tumbuh sebagai koloni berwarna biru kehijauan.
Strain Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis , Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 dan Staphylococcus aureus ATCC 25923 juga dapat dimasukkan.
Dalam kasus ini, ciri-ciri yang diamati adalah sebagai berikut: E. coli dan K. pneumoniae akan mengembangkan koloni salmon-oranye dalam media ini, dengan endapan dengan warna yang sama di sekelilingnya. Sedangkan, Proteus akan mengembangkan koloni biru-hijau dengan atau tanpa pusat hitam.
Sementara S. aureus dan E. faecalis harus dihambat, E. faecalis kadang-kadang berhasil tumbuh sebagai koloni kuning yang sangat kecil.
Di sisi lain, karena media ini tidak diautoklaf, penting untuk mengevaluasi sterilitas media. Oleh karena itu, dari setiap batch yang disiapkan, satu hingga dua pelat yang tidak diinokulasi harus diinkubasi pada suhu 37 ° C selama 24 jam dalam aerobiosis.
Jelas tidak ada pertumbuhan apapun yang diharapkan di piring.
Keterbatasan
-Spesies Proteus dapat berkembang dalam media ini dan karakteristik koloninya dapat dikacaukan dengan spesies Salmonella atau Shigella. Untuk alasan ini, setiap koloni yang mencurigakan harus dikonfirmasi dengan tes biokimia .
– Penggunaan media ini perlu disertai dengan agar-agar lain yang kurang selektif, karena jika mikroorganisme yang dicari ditemukan dalam konsentrasi rendah, mikroorganisme tersebut mungkin tidak berkembang dalam media ini.
-Jangan terlalu panas selama persiapannya, karena panas yang berlebihan akan mengubah komposisi media.
-Tidak biasanya, koloni Salmonella yang memfermentasi laktosa mungkin muncul tanpa disadari.
Referensi
- Kontributor Wikipedia. Agar enterik hektoen. Wikipedia, ensiklopedia gratis. 13 Maret 2019, 23:38 UTC. Tersedia di: .wikipedia.org / Diakses pada 16 Maret 2019.
- Laboratorium BD. BD Hektoen Enteric Agar (HE Agar). 2013.Tersedia di: bd.com
- Laboratorium Britannia. Agar Hektoen Enterik. 2015.Tersedia di: britanialab.com
- Laboratorium Difco Francisco Soria Melguizo. Agar hektoen. Tersedia di: f-soria.es
- Difco & BBL Manual, Hektoen Enteric Agar. Edisi ke-2. Tersedia di: bd.com/europe
