TCBS agar adalah sarana budaya yang solid sangat selektif dan diferensial, digunakan untuk isolasi dan budidaya bakteri dari genus Vibrio, terutama Vibrio cholerae, V. vulnificus dan V. parahaemolyticus sebagai patogen utama dari jenis ini.
TCBS adalah singkatan dari Thiosulfate Sitrat Empedu Sukrosa. Agar ini juga dikenal sebagai media selektif untuk Vibrios. Rumus asli diciptakan oleh Nakanishi dan kemudian dimodifikasi oleh Kobayashi.
Media TCBS komersial dan pelat agar-agar TCBS diunggulkan dengan Vibrio cholerae. Sumber: foto 1: diambil oleh penulis MSc. Marielsa Gil / Foto 2: Microrao, JJMMC, Davangere, Karnataka, India [Domain publik]
Ini terdiri dari ekstrak ragi, pepton daging, triptein, natrium sitrat, natrium tiosulfat, empedu sapi, sukrosa, natrium klorida, besi sitrat, bromotimol biru, biru timol, dan agar.
Komposisi ini memungkinkan pengembangan spesies Vibrio yang memadai dari sampel air, makanan, dan kotoran; dengan pengecualian Vibrio hollisae, yang tidak tumbuh pada media ini. Selanjutnya, media TCBS mampu menghambat pertumbuhan bakteri lain yang menyertainya, terutama koliform.
Karena masalah pencernaan dan ekstra-usus yang serius yang dihasilkan oleh beberapa spesies genus Vibrio, diagnosisnya sangat penting. Manusia terinfeksi terutama dengan mengkonsumsi makanan mentah atau setengah matang dari laut atau perairan yang tercemar, tetapi juga melalui infeksi luka.
Akibatnya, laboratorium klinis harus memasukkan agar TCBS dalam studi kultur tinja dari sampel tinja cair, terutama penampakan air beras. Apalagi jika pasien melaporkan pernah kontak dengan air laut atau mengonsumsi kerang atau ikan.
Indeks artikel
Dasar
Ekstrak ragi, pepton daging, dan triptein adalah sumber nutrisi media ini. Namun, agar TCBS adalah media yang tidak ramah bagi sebagian besar bakteri.
Selektivitasnya yang tinggi diberikan oleh penambahan natrium sitrat dan empedu sapi; keduanya merupakan agen penghambat yang juga memberikan pH basa pada media, membatasi pertumbuhan flora yang menyertainya dan mendukung pertumbuhan V. cholerae, di antara spesies lainnya. Perlu dicatat bahwa Vibrio cholerae sangat sensitif terhadap keasaman.
Untuk bagiannya, natrium klorida secara osmotik menyeimbangkan medium. Selain itu, karena konsentrasinya tinggi, ia juga bertindak sebagai agen penghambat, mendukung pertumbuhan bakteri halofilik.
Sukrosa adalah gula yang dapat difermentasi, bersama dengan indikator pH biru bromotimol dan timol biru, memberikan medium karakter yang berbeda. Untuk alasan ini, dengan media ini dimungkinkan untuk membedakan strain fermentasi sukrosa dari yang non-fermentasi.
Koloni strain fermentasi sukrosa berkembang menjadi kuning dan akan mengubah media dari hijau menjadi kuning karena produksi asam. Non-fermentor tumbuh tembus dan media tetap warna asli (hijau).
Demikian pula, media ini mengandung natrium tiosulfat sebagai sumber belerang dan besi sitrat sebagai zat pengembang. Keduanya menunjukkan bakteri yang mampu menghasilkan hidrogen sulfida (gas tak berwarna). H 2 S terbentuk dari tiosulfat dan selanjutnya, setelah bereaksi dengan besi sitrat, terbentuk endapan hitam yang terlihat.
Akhirnya, agar-agar inilah yang memberikan konsistensi padat pada media.
Persiapan
Timbang 89 g media dehidrasi dan larutkan dalam satu liter air suling. Membantu pembubaran dengan pemanasan dan sering diaduk. Campuran dapat direbus hingga 2 menit.
Media ini tidak diautoklaf. Setelah larut, disajikan langsung di atas piring steril. Saat mengeras, mereka diatur secara terbalik dalam plak dan disimpan di lemari es (2-8 ° C) sampai digunakan.
Setelah persiapan, media harus tetap pada pH 8,6 ± 0,2.
Warna media yang dikeringkan adalah krem muda atau krem kehijauan, dan warna medianya adalah hijau hutan atau hijau kebiruan.
Penting untuk membiarkan pelat memanas sebelum menyemai sampel.
Menggunakan
Spesimen yang paling umum untuk isolasi Vibrios adalah tinja diare.
Sampel feses jika tidak dapat segera disemai pada media selektif harus diangkut pada media Cary Blair.
Untuk meningkatkan sensitivitas kultur, feses dapat dilewatkan melalui pepton water pada pH 8,4 sebagai media pengayaan selama maksimal 8 jam, dari sana disubkultur ke media TCBS.
Juga harus diperhitungkan bahwa beberapa strain Vibrios dapat menyebabkan septikemia pada pasien dengan imunosupresi, oleh karena itu mereka dapat diisolasi dari kultur darah. Demikian pula, sampel air dan makanan dari laut dapat dianalisis ketika ada wabah epidemi penyakit kolera.
Ditaburkan
Inokulum sampel penelitian harus menonjol, penaburan dilakukan dengan cara lurik sampai habis. Pelat diinkubasi pada suhu 37 ° C selama 24 jam dalam aerobiosis.
Koloni dugaan Vibrio cholerae berukuran sedang, halus, buram, dengan batas tipis dan berwarna kuning karena fermentasi sukrosa.
Dengan cara yang sama spesies V. alginolyticus , V. fluvialis , V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii dan beberapa V. vulnificus tumbuh . Spesies Vibrios lain yang penting secara klinis seperti V. parahaemolyticus tidak memfermentasi sukrosa, berkembang sebagai koloni hijau zaitun.
Pelat agar TCBS diunggulkan dengan Vibrio parahaemolyticus. Sumber: isis325 Flickr
Di sisi lain, harus diingat bahwa beberapa galur Aeromonas dan Plesiomonas yang bersifat oksidase (+) dapat tumbuh dalam media ini, mengembangkan koloni kuning yang dapat membingungkan klinisi. Sementara beberapa strain Pseudomonas juga oksidase (+) tumbuh sebagai koloni hijau seperti V. parahaemolyticus.
Keterbatasan
Uji oksidase yang positif untuk genus Vibrio tidak boleh dilakukan dari koloni yang diperoleh dari agar-agar TCBS, karena hasil yang diperoleh akan menjadi negatif palsu. Senyawa di tengah sangat mengganggu tes ini. Oleh karena itu, harus dibuat dari subkultur pada agar darah.
QA
Untuk membuktikan bahwa media dalam kondisi baik, disarankan untuk menaburkan galur kontrol yang diketahui atau bersertifikat, dan mengamati apakah pertumbuhannya memenuhi karakteristik yang diharapkan.
Untuk ini, Anda dapat menggunakan galur:
-Vibrio cholerae —– pertumbuhan yang memuaskan (koloni kuning, batas tembus cahaya).
-Vibrio parahaemolyticus ——– pertumbuhan memuaskan (koloni dengan bagian tengah berwarna hijau dan batas tembus cahaya).
-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 —— pertumbuhan memuaskan (koloni kuning dengan lingkaran cahaya berwarna sama di sekitar koloni).
-Enterococcus faecalis ATCC 29212 —— penghambatan total atau sebagian (koloni kecil berwarna kuning atau tembus cahaya).
-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853—– penghambatan sebagian atau total (koloni biru).
-Escherichia coli ATCC 25922 —— Benar-benar dihambat .
-Proteus mirabilis ATCC 43071 —– Penghambatan total atau sebagian. (koloni kecil batas tengah hijau tembus).
Inkubasi media yang tidak diinokulasi harus tidak berubah.
Referensi
- Laboratorium Difco Francisco Soria Melguizo. agar-agar TCBS. 2009.Tersedia di: f-soria.es
- Laboratorium BD. BD. TCBS Agar 2003.Tersedia di: bd.com
- Laboratorium Britannia. Media TCBS. 2015.Tersedia di: britanialab.com
- Laboratorium Akumedia. Agar-agar TCBS. 2016.Tersedia di: foodsafety.neogen.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosa Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 edisi Editorial Panamericana SA Argentina.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosa Mikrobiologi. edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.
