agar Sabouraud , juga dikenal sebagai Sabouraud Dextrose Agar, adalah media padat, terutama diperkaya untuk isolasi dan pengembangan jamur, seperti ragi, jamur dan dermatofita.
Oleh karena itu, media ini tidak dapat kurang di laboratorium mikrobiologi untuk menyelidiki keberadaan jamur patogen atau oportunistik, baik dari sampel klinis maupun non-klinis. Demikian juga, juga ideal untuk pertumbuhan bakteri berfilamen seperti Streptomyces dan Nocardias. Penggunaannya sangat luas, karena dapat digunakan pada mikologi manusia, hewan, tumbuhan dan industri.
A. Agar Sabouraud tanpa biji. B. Agar Sabouraud diunggulkan dengan ragi. Sumber: Foto diambil oleh penulis MSc. Marielsa Gil
Media ini dibuat pada tahun 1896 oleh dokter kulit terkemuka Raimond Sabouraud, yang menjadi spesialis penyakit kulit kepala yang terkenal di dunia, terutama yang disebabkan oleh dermatofita.
Penciptaannya sangat penting sehingga telah digunakan sejak saat itu dan tetap ada sampai sekarang, meskipun dengan beberapa modifikasi.
Meskipun khusus untuk jamur, bakteri dapat tumbuh dalam media ini , oleh karena itu untuk sampel dengan flora campuran, pencantuman antibiotik dalam sediaannya diperlukan untuk menghambat pertumbuhan flora bakteri yang mungkin ada.
Pemilihan antibiotik harus dilakukan dengan hati-hati dan mempertimbangkan jenis jamur yang akan disembuhkan, karena beberapa dihambat dengan adanya zat tertentu.
Indeks artikel
Dasar
Agar Sabouraud dextrose adalah media yang dalam formulasi aslinya bersifat selektif lemah, karena pH asamnya 5,6 ± 0,2, namun bakteri masih dapat berkembang, terutama pada inkubasi yang lama.
Media mengandung kasein pepton dan pencernaan pankreas dari jaringan hewan, yang menyediakan sumber karbon dan nitrogen untuk pertumbuhan mikroorganisme.
Ini juga mengandung glukosa konsentrasi tinggi, yang bertindak sebagai sumber energi, mendorong pertumbuhan jamur di atas bakteri. Semua dicampur dengan agar-agar, komponen yang memberikan konsistensi yang tepat.
Di sisi lain, agar Sabouraud dekstrosa dapat selektif jika ditambahkan antibiotik.
Dengan antibiotik ini sangat berguna dalam sampel luka, borok terbuka atau sampel di mana kontaminasi bakteri yang besar dicurigai.
Kombinasi agar Sabouraud dextrose yang paling umum digunakan dengan antibiotik
-Saburaud agar dengan kloramfenikol: ideal untuk memulihkan ragi dan jamur berfilamen.
– Agar Sabouraud dengan gentamisin dan kloramfenikol: hampir semua jamur dan ragi berfilamen tumbuh dalam media ini, dan ini menghambat sejumlah besar bakteri, termasuk Enterobacteriaceae, Pseudomonas dan Staphylococcus.
– Agar Sabouraud dengan sikloheksimida: sangat berguna untuk sampel dari kulit atau saluran pernapasan, selama yang dicurigai adalah jamur dimorfik.
Sikloheksimida harus digunakan dengan hati-hati; Meskipun digunakan untuk menghambat pertumbuhan jamur dan ragi non-patogen atau lingkungan yang mungkin ada sebagai kontaminan dalam sampel, tetapi juga menghambat pertumbuhan beberapa jamur seperti Cryptococcus neoformans , Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium sp dan lainnya jamur oportunistik.
– Agar Sabouraud dengan kloramfenikol plus sikloheksimida: digunakan terutama untuk mengisolasi dermatofit dan jamur dimorfik. Kekurangannya adalah menghambat beberapa spesies jamur oportunistik seperti Candida no albicans , Aspergillus , Zygomycetes atau C. neoformans .
-Agar saprofit dengan kloramfenikol, streptomisin, penisilin G dan sikloheksimida: sangat ideal untuk sampel yang sangat terkontaminasi bakteri dan jamur saprofit, tetapi memiliki kelemahan yaitu menghambat pertumbuhan Actinomyces dan Nocardias, selain jamur oportunistik yang disebutkan di atas.
Persiapan
Jika Anda memiliki bahan-bahan secara terpisah, itu dapat disiapkan sebagai berikut:
Agar Sabouraud dekstrosa
Menimbang:
– 40 gr dekstrosa
– 10 g pepton
– 15 gr agar-agar
– Ukur 1000 ml air suling
Semua bahan dicampur, pH disesuaikan menjadi 5,6. Zat terlarut dilarutkan dengan perebusan , 20 ml medium didistribusikan dalam tabung berukuran 25 x 150 mm, tanpa tepi dan lebih disukai dengan penutup kapas.
Tabung dengan tutup kapas. Sumber: Foto diambil oleh penulis MSc. Marielsa Gil
Ukuran tabung lain juga dapat digunakan, tergantung ketersediaan.
Mereka diautoklaf selama 10 menit pada atmosfer bertekanan (121 ° C). Waktu autoklaf tidak boleh dilampaui. Ketika meninggalkan autoklaf, tabung dimiringkan dengan bantuan penyangga sampai mengeras dalam paruh seruling.
Cara lain adalah dengan melarutkan bahan-bahan tersebut dengan cara dipanaskan hingga mendidih. Dalam labu yang sama, autoklaf selama 10 menit dan kemudian mendistribusikan 20 ml dalam cawan Petri.
Jika Anda memiliki media agar Sabouraud dekstrosa yang sudah mengandung semua bahan, lanjutkan untuk menimbang jumlah yang ditentukan oleh perusahaan komersial untuk satu liter air. Langkah-langkah lainnya sama seperti yang dijelaskan di atas.
Agar Sabouraud dekstrosa (modifikasi Emmons)
Menimbang:
– 20 gr dekstrosa
– 10 g pepton
– 17 gr agar-agar
– Ukur 1000 ml air suling
Semua bahan dicampur, pH diatur menjadi 6,9. Lanjutkan dengan cara yang sama seperti kasus sebelumnya.
Ada rumah komersial yang menawarkan media dengan semua bahan. Dalam hal ini, timbang dan siapkan seperti yang dijelaskan dalam sisipan.
Sabouraud dextrose agar (modifikasi Emmons) dengan kloramfenikol
Larutan Stok Kloramfenikol
– Timbang 500 mg kloramfenikol basa
– Ukur 100 ml etanol 95%
– Mencampur
Media agar Sabouraud dekstrosa (Emmons) disiapkan seperti yang dijelaskan sebelumnya dan tambahan untuk setiap liter media tambahkan 10 ml larutan stok kloramfenikol sebelum diautoklaf.
Sabouraud Emmons Dextrose Agar dengan Cycloheximide
Larutan Stok Sikloheksimida
– Timbang 5 gr sikloheksimid
– Ukur 100 ml aseton
– Mencampur
Media agar Sabouraud dekstrosa (Emmons) disiapkan seperti yang telah dijelaskan dan sebagai tambahan untuk setiap liter media tambahkan 10 ml larutan stok sikloheksimida sebelum diautoklaf.
Sabouraud dextrose agar (Emmons) dengan kloramfenikol dan sikloheksimida
Media agar Sabouraud dekstrosa (Emmons) disiapkan seperti yang telah dijelaskan dan sebagai tambahan untuk setiap liter media tambahkan 10 ml larutan stok kloramfenikol dan 10 ml larutan stok sikloheksimida sebelum diautoklaf.
Antibiotik lain yang dapat ditambahkan
20.000 hingga 60.000 unit penisilin per liter media.
30 mg streptomisin per liter media.
Keduanya harus digabungkan setelah media diautoklaf, agak didinginkan (50-55 ° C).
0,04 g neomisin per liter media.
0,04 g gentamisin per liter medium.
Pertimbangan khusus
Untuk keamanan, lebih disukai untuk menabur agar Sabouraud dekstrosa dalam tabung berbentuk baji (cenderung paruh seruling) daripada di cawan Petri, untuk menghindari penyebaran dan penghirupan spora.
Tabung agar Sabouraud harus ditutup dengan kapas dan bukan dengan tutup ulir, karena kondisi semi-anaerobik telah terbukti menghambat pembentukan spora pada beberapa galur, misalnya Coccidioides immitis. Juga, sebagian besar jamur bersifat aerobik.
Jika menggunakan tutup ulir, jangan ditutup rapat.
QA
Media yang disiapkan harus menjalani kontrol kualitas untuk memverifikasi fungsinya yang tepat. Untuk ini, strain kontrol tertentu ditaburkan.
Untuk agar Sabouraud dextrose dengan kloramfenikol, dapat digunakan strain ATCC Candida albicans , yang harus memiliki pertumbuhan yang sangat baik. Piring lain diinokulasi dengan strain Escherichia coli , yang harus benar-benar dihambat.
Piring yang tidak diinokulasi juga diinkubasi di mana tidak ada mikroorganisme yang tumbuh.
Strain Trichophyton mentagrophytes dapat digunakan untuk agar Sabouraud dextrose dengan kloramfenikol dan sikloheksimida , dan harus berkembang dengan baik. Piring lain diinokulasi dengan strain Aspergillus flavus , di mana harus ada sedikit atau tidak ada pertumbuhan. Selain itu, piring yang tidak diinokulasi diinkubasi untuk menunjukkan sterilitasnya.
Untuk agar Sabouraud dextrose dengan cycloheximide, digunakan strain Candida albicans, Trichophyton rubrum atau Microsporum canis , yang harus menunjukkan pertumbuhan yang baik.
Demikian juga, strain Aspergillus flavus disertakan , menunjukkan sedikit atau tidak ada pertumbuhan. Terakhir, inkubasikan plat yang tidak diinokulasi untuk kontrol sterilitas.
Kegunaan
Budaya primer
Agar Sabouraud dekstrosa klasik mengandung 4 gram dekstrosa dan sangat baik sebagai media isolasi primer, karena menunjukkan morfologi karakteristik masing-masing jamur.
Ini juga sangat baik untuk menunjukkan produksi pigmen. Namun, itu bukan cara yang paling cocok untuk mengamati sporulasi.
Juga tidak dianjurkan untuk membudidayakan Blastomyces dermatitidis, yang dihambat oleh konsentrasi glukosa yang tinggi.
Di sisi lain, untuk budidaya pertimbangan tertentu harus diperhitungkan.
Beberapa jamur tumbuh paling baik pada suhu kamar, seperti jamur, yang lain tumbuh dengan sukses pada 37 ° C, seperti beberapa ragi, dan yang lain dapat tumbuh pada kedua suhu (jamur dimorfik).
Untuk alasan ini, kadang-kadang perlu menggunakan beberapa pelat agar Sabouraud untuk sampel yang sama, karena penyemaian ganda sering dilakukan untuk menginkubasi satu pelat pada suhu kamar dan pelat lainnya pada 37 ° C.
Misalnya, Sporothrix schenckii ditaburkan dalam dua piring; satu diinkubasi pada suhu kamar untuk mendapatkan fase cetakan dan yang lainnya diinkubasi pada 37 ° C untuk mendapatkan fase ragi, tetapi yang terakhir perlu menambahkan 5% darah ke media.
Dalam kasus lain, seperti sampel misetoma, dua lempeng agar Sabouraud diunggulkan, satu dengan kloramfenikol dan yang lainnya dengan sikloheksimida. Yang pertama akan memungkinkan pertumbuhan agen penyebab misetoma yang berasal dari jamur (Eumycetoma) dan agen penyebab kedua dari misetoma yang berasal dari bakteri, seperti actinomycetomas.
Sporulasi
Agar Sabouraud dekstrosa modifikasi emmon mengandung 2 gram dekstrosa dan tidak hanya digunakan untuk isolasi, tetapi juga untuk sporulasi dan pengawetan jamur.
Dalam media ini, strain Blastomyces dermatitidis dapat dipulihkan .
Konservasi
Untuk mengawetkan kultur jamur, mereka dapat disimpan di lemari es (2-8 ° C). Waktu konservasi dapat bervariasi antara 2 hingga 8 minggu. Setelah waktu ini mereka harus disubkultur untuk mengulangi prosesnya.
Beberapa jamur bertahan paling baik pada suhu kamar, seperti Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum, dan Microsporum audounii .
Pemeliharaan strain dapat diperpanjang untuk menghindari pleomorfisme jika dekstrosa benar-benar dihilangkan dari agar-agar dan jika jumlah agar dalam media dikurangi untuk menghindari kekeringan.
Mikrokultur
Untuk mengidentifikasi beberapa jamur berfilamen, perlu dilakukan mikrokultur menggunakan agar Sabouraud atau cara khusus lainnya untuk mengamati struktur reproduksi seksual dan aseksual .
Dalam mikologi manusia
Ini digunakan terutama untuk diagnosis penyakit jamur, terutama yang mempengaruhi kulit dan perlekatannya (rambut dan kuku).
Sampel dapat berupa sekret, eksudat, kulit, rambut, kuku, sputum, CSS atau urin. Patogen yang biasanya diisolasi adalah dermatofita, jamur yang menyebabkan mikosis subkutan dan sistemik.
Mikologi hewan
Hewan sering terkena infeksi jamur, oleh karena itu agar Sabouraud berguna dalam mikologi hewan seperti halnya pada manusia.
Misalnya, dermatofit sering dapat menyerang hewan. Demikian pula halnya dengan Microsporum canis var distortum, yang sering menginfeksi anjing, kucing, kuda, babi, dan monyet. Demikian juga , Microsporum gypseum menginfeksi anjing, kucing dan sapi.
Burung seperti ayam, ayam jago, dan ayam dipengaruhi oleh Microsporum gallinae.
Jamur lain, seperti Zymonema farciminosum, juga merupakan penyebab penyakit pada hewan, terutama kuda, bagal dan keledai, menyebabkan peradangan yang signifikan pada pembuluh limfatik.
Sporothrix schenkii dan Histoplasma capsulatum mempengaruhi hewan peliharaan dan manusia.
Mikologi lingkungan
Banyak jamur patogen atau oportunistik dapat berkonsentrasi pada waktu tertentu di lingkungan tertentu, terutama di ruang operasi dan Intensive Care Unit (ICU) klinik dan rumah sakit. Oleh karena itu perlu dilakukan pengendalian terhadap mereka.
Ruang rentan lainnya adalah perpustakaan dan bangunan tua, yang dapat dipengaruhi oleh konsentrasi jamur lingkungan.
Dalam studi lingkungan, agar Sabouraud dekstrosa digunakan untuk isolasi jamur.
Mikologi industri
Agar Sabouraud dekstrosa tidak dapat absen untuk mempelajari jamur yang mencemari dalam produksi kosmetik, makanan, minuman, kulit, tekstil, dan lain-lain.
Mikologi tumbuhan
tanaman juga menderita dari penyakit jamur, yang mempengaruhi berbagai bagian tanaman, yang bahkan dapat mengakhiri panen, menyebabkan kerugian besar di bidang pertanian.
Referensi
- Cuenca M, Gadea I, Martín E, Pemán J, Ponton J, Rodríguez (2006). Diagnosis mikrobiologi mikosis dan studi sensitivitas antijamur. Rekomendasi dari Spanish Society of Infectious Diseases and Clinical Microbiology. Tersedia di: coesant-seimc.org
- Laboratorium ValteK. (2009). Agar Sabouraud dekstrosa dengan sikloheksimid. Tersedia di: andinamedica.com.
- Navarro O. (2013). Mikologi veteriner. Universitas Agraria Nasional. Nikaragua.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 edisi Argentina. Editorial Panamericana SA
- Casas-Rincón G. Mikologi Umum. 1994. Edisi ke-2 Universitas Pusat Venezuela, Edisi Perpustakaan. Venezuela Caracas.
