bismuth sulfit agar adalah selektif medium padat dan budaya diferensial, diformulasikan khusus untuk isolasi Salmonella enterica subspesies enterica serotipe Typhi, di antara spesies lain dari Salmonella. Medium tersebut dikenal sebagai BSA agar untuk akronimnya dalam bahasa Inggris Bismuth Sulfite Agar.
Formula asli untuk agar bismut sulfit diciptakan pada tahun 1927 oleh Wilson dan Blair (Medium Besi Glukosa Bismut Sulfit); Ini mengandung natrium sulfit, glukosa, larutan bismut, amonium sitrat, besi sulfat, dan agar-agar.
Pertumbuhan 48 jam inkubasi Salmonella sp pada agar bismut sulfit. Sumber: Pixnio.com Penulis: Dr. WR Erving, USCDCP
Saat ini ada modifikasi media asli, terdiri dari ekstrak daging, pepton daging dan kasein, indikator bismut sulfit, glukosa, dinatrium fosfat, besi sulfat, hijau terang dan agar-agar.
Ada banyak cara untuk mengisolasi spesies Salmonella, tetapi dalam hal pemulihan serotipe Typhi, agar bismut sulfit memiliki keunggulan yang menonjol dibandingkan mereka, karena dalam kebanyakan pemulihan mikroorganisme ini sangat rendah atau nol diperoleh. .
Namun, perlu menggunakan lebih dari satu jenis media ketika mencoba mengisolasi enteropatogen, karena agar bismut sulfit kurang efektif untuk spesies Salmonella lainnya dan untuk genus Shigella, yang terhambat atau berkembang sangat buruk pada agar ini.
Perlu dicatat bahwa dari semua spesies Salmonella, serotipe Typhi adalah salah satu enteropatogen terpenting pada manusia, ini menjadi satu-satunya reservoirnya. Serovar ini menyebabkan demam tifoid, gastroenteritis, bakteremia, dan septikemia.
Untuk alasan ini, penting untuk memasukkan agar-agar ini ketika menganalisis sampel air, feses atau makanan yang diduga keberadaannya.
Indeks artikel
Dasar
Seperti kebanyakan media kultur, Bismuth Sulfite Agar mengandung nutrisi untuk mendorong pertumbuhan bakteri, seperti pepton dan ekstrak daging. Demikian pula, glukosa berfungsi sebagai sumber energi dan karbon.
Namun, tidak semua bakteri akan tumbuh pada media ini, karena Bismuth Sulfite Agar merupakan media selektif. Ini mengandung senyawa yang menghambat pertumbuhan mikroorganisme Gram positif dan bakteri Gram negatif tertentu. Senyawa tersebut adalah : indikator bismut sulfit dan berwarna hijau terang.
Untuk bagiannya, dinatrium fosfat mempertahankan osmolaritas dan pH medium.
Selain itu, agar bismut sulfit adalah media diferensial berkat adanya sulfat besi, yang menunjukkan pembentukan H 2 S. H 2 S yang dibentuk oleh bakteri bereaksi dengan besi sulfat dan membentuk endapan hitam larut yang terlihat jelas.
Terakhir, agar-agar memberikan konsistensi padat pada medium.
Persiapan
Timbang 52,3 g media dehidrasi dan larutkan dalam satu liter air. Panaskan campuran sampai mendidih selama 1 menit dengan sering diaduk, sampai benar-benar larut. Jangan terlalu panas. Media ini tidak dapat diautoklaf, karena panas yang ekstrem dapat merusak media kultur.
Biarkan dingin hingga 45 ° C dan kocok sebelum disajikan dalam cawan Petri steril. Disarankan untuk membuat pelat dengan ketebalan yang baik. Untuk ini, 25 ml harus dituangkan ke setiap piring. Biarkan memadat. Karena ini adalah media yang tidak disterilkan, disarankan untuk segera menggunakannya.
Namun, sebuah penelitian yang dilakukan oleh D’aoust pada tahun 1977, menunjukkan bahwa ada pemulihan yang lebih baik dari Salmonella typhimurium dan Salmonella enteritidis sebagai media bismut sulfit agar, tidak mempengaruhi kinerja untuk serovar Typhi dan Paratyphi B.
D’aoust merekomendasikan penggunaan pelat pada hari ke-4 pendinginan, meskipun ia memperingatkan bahwa seiring bertambahnya usia, selektivitas menurun, dan strain Proteus vulgaris berkembang lebih mudah .
Untuk alasan ini, untuk sampel yang sangat terkontaminasi, seperti feses, lebih baik menggunakan media yang baru disiapkan. Jika tidak, gunakan pada hari ke 4 persiapannya. Penulis lain merekomendasikan menggunakan piring sehari setelah persiapan mereka, disimpan dalam lemari es.
Piring dingin harus ditempa sebelum digunakan. PH media harus 7,5 ± 0,2. Medium mentah berwarna krem dan medium yang disiapkan berwarna abu-abu kehijauan opalescent.
Kegunaan
Diantara sampel yang dapat disemai pada media ini adalah sampel feses, air minum atau air limbah dan makanan.
Untuk memperbaiki isolat, dianjurkan untuk melakukan perlakuan pra-pengayaan dengan kaldu laktosa dan setelah pengayaan dengan kaldu tetrationat atau kaldu sistin selenit, sebelum disemai pada agar bismut sulfit.
Pelat diinkubasi pada 35 ° C ± 0,2 selama 24 hingga 48 jam, secara aerobik.
Karakteristik koloni pada agar bismut sulfit
Koloni Salmonella Typhi biasanya terlihat pada agar ini dalam waktu 24 jam dengan pusat hitam dan dikelilingi oleh lingkaran hijau terang. Padahal, dalam 48 jam berubah menjadi hitam pekat karena terbentuknya hidrogen sulfida.
Salmonella Paratyphi A memiliki koloni dengan karakteristik yang bervariasi. Setelah 18 jam inkubasi , koloni hitam , hijau atau transparan dengan penampilan mukoid dapat diamati . Sementara itu, pada 48 jam mereka benar-benar hitam dan terkadang dengan kilau metalik yang menonjol.
S. Paratyphi A cenderung menghitamkan lingkungan sekitar koloni.
Salmonella sp menunjukkan koloni hitam atau abu-abu-hijau, dengan atau tanpa kilau logam, dan mungkin atau mungkin tidak menghitamkan lingkungan sekitarnya.
Strain Coliform umumnya benar-benar dihambat , tetapi jika mereka tumbuh, mereka berkembang sebagai koloni hijau atau coklat buram tanpa kilau logam. Mereka tidak menodai media di sekitar koloni.
Keterbatasan
-Inokula yang sangat lemah dapat berasal dari koloni Salmonella Typhi berwarna hijau muda, tanpa disadari dan melaporkan kultur sebagai negatif.
– Agar bismut sulfit dapat menghambat pemulihan beberapa spesies Salmonella seperti S. sendai, S. berta, S. gallinarum, S. abortus-equi.
-Media ini menghambat sebagian besar spesies genus Shigella.
– S. Typhi dan S. arizonae dapat memberikan koloni yang sangat mirip.
-coliform yang menghasilkan H 2 S seperti Proteus dan Citrobacter menghasilkan koloni mirip dengan Salmonella, sehingga perlu untuk melakukan keluar biokimia identifikasi tes .
-Sebuah striasi yang baik harus dilakukan untuk mendapatkan koloni yang terisolasi; itu adalah satu-satunya cara untuk mengamati karakteristik khas koloni genus Salmonella.
QA
Untuk pengendalian sterilitas, plat yang tidak diinokulasi diinkubasi pada suhu 37°C, diharapkan tidak terjadi pertumbuhan atau perubahan warna.
Untuk kontrol kualitas, dikenal strain seperti:
Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Escherichia coli dan Shigella flexneri diharapkan dapat dihambat sebagian dengan mengembangkan koloni berwarna coklat kehijauan dan coklat. Padahal, kedua salmonella harus memiliki perkembangan yang sangat baik dengan koloni hitam dengan kilau logam, dan akhirnya Enterococcus faecalis harus dihambat secara total.
Referensi
- Wilson, W., & EM McV. Blair Penggunaan Medium Besi Glukosa Bismut Sulfit untuk Isolasi B. typhosus dan B. proteus . Jurnal Kebersihan, 1927; 26 (4), 374-391. Diperoleh dari .jstor.org
- Aust JY. Pengaruh kondisi penyimpanan terhadap kinerja agar bismut sulfit. Mikrobiol J Clin . 1977; 5 (2): 122–124. Tersedia di: ncbi.nlm.nih.gov
- Laboratorium IVD. Agar bismut-sulfit menurut WILSON-BLAIR. 2009.Tersedia di: BismuthSulfitagar_span_Jan_2009% 20 (2) .pdf
- Laboratorium Himedia. Agar Bismut Sulfit. 2017.Tersedia di: himedialabs.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosa Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 edisi Editorial Panamericana SA Argentina.
- Morales R, de la Cruz D, Leyva G dan Ybarra M. Kualitas Bakteriologis Susu Kambing Mentah yang Diproduksi di Miravalles, Puebla. Rev Mex de Ing Quím 2012; 11 (1): 45-54
